一种铁皮石斛药材的质量检测方法与流程

本发明属于医药
技术领域：
，涉及一种铁皮石斛药材的质量检测方法。
背景技术：
：铁皮石斛是兰科石斛属多年生草本植物，其主要药用部位是新鲜或干燥茎，主要分布于安徽、浙江、广西、湖南、云南、贵州等地，是传统名贵中药材。铁皮石斛具有益胃生津，滋阴清热之功效，用于阴伤津亏，口干烦渴，胃阴不足，食少干呕，病后虚热不退，阴虚火旺，骨蒸劳热，目暗不明，筋骨痿软等症。《神农本草经》将其列为上品，道家养生经典《道藏》将它誉为“中华九大仙草”之首。通过文献调研，铁皮石斛的主要药理成分及其特征为：(1)多糖(特征性成分)：多糖是铁皮石斛中的主要特征性成分，其相对分子量在10-70万左右，主要为d－甘露糖和d－葡萄糖聚合而成的杂多糖。各地铁皮石斛总多糖含量维持在30％左右，2015版药典规定了检测方法和含量要求。(2)挥发油(特征性成分)：关于不同产地挥发油的研究不多，且挥发油中脂肪族占比较高，尤其是水蒸气蒸馏法、溶剂法提取时，脂肪族(如油酸等)占50％以上，含量较高的有亚油酸甲酯(5.852％)、二十五烷(10.132％)、22，23-二氢豆甾醇(11.093％)和己二酸二辛酯(21.115％)等。采用固相微萃取法，发现主要成分为反-2-辛烯醛(29.96％)、β-紫罗兰酮(15.78％)、芳樟醇(5.36％)、壬醛(4.39％)、β-环柠檬醛(3.40％)和正癸醛(3.14％)等。(3)茋类化合物(stilbenoids，特征性成分，其中有些被称为石斛素)，包括a)单联苄类(又称二苯乙烯，stilbene)；b)联苄衍生物类；c)菲类(phenanthrene)。茋类化合物是铁皮石斛中的特征性成分，但对其进行含量测定的研究较少。陈贤良等发明了联苄类含量测定的方法(201410542575.6)。另有江西九草铁皮石斛科技创新有限公司获得了茋类化合物有效部位的制备专利1项(201610464044.9)。安徽农业大学申请了一种检测铁皮石斛中石斛酚的方法(201611261842.8)；重庆安尚农业科技发展有限公司申请了铁皮石斛中提取毛兰素的方法(201510660801.5)。在三个小类中，根据植物化学研究以及hplc检测多个联苄类化合物的结果，单联苄类含量高，联苄衍生物类含量次之，菲类含量较少。(4)黄酮类，包括二氢黄酮(如柚皮素，非特征性成分)、黄酮碳苷(特征性成分)等。铁皮石斛中普遍含有二氢黄酮柚皮素，而柚皮素却不是铁皮石斛的特征性成分，它大量存在于柑橘皮中，还被普遍作为多种中药及食品的定量成分，如化橘红、枳壳、降香、枳实、松针、柚子、艾蒿等。黄酮碳苷，是一类以碳碳键而非碳氧键连接的黄酮苷类化合物，结构具有特点，是铁皮石斛中存在的一类大极性的特征性成分。已发现有包括夏佛托苷(schaftoside)、异夏佛托苷(isoschaftoside)等的约10种黄酮碳苷类成分，其苷元均为芹菜素。浙江中医药大学吕圭源等利用指纹图谱对浙江铁皮石斛中包括柚皮素和黄酮碳苷多个化合物进行了检测，中国中医科学院、寿仙谷等单位对不同产地黄酮类化合物进行了检测。结果表明，黄酮类化合物地域区别、种间区别较为明显。浙江黛君生物医药科技有限公司申请了铁皮石斛中黄酮化合物的提取方法(201710249998.2)，但非黄酮碳苷。上海中医药大学获得了一种铁皮石斛的薄层鉴别方法专利，检测其中的三种黄酮碳苷成分。(201410489539.8)。尚未有报道检测黄酮碳苷类成分的总含量的方法。就检测方法而言，其中hplc、hplc-ms法检测单个或几个黄酮碳苷的方法已有报道，但较为繁琐。我们深入研究了以芹菜素为苷元的黄酮碳苷的性质，建立一种基于紫外、化学反应的紫外法测定总黄酮碳苷的方法，能够铁皮石斛进行总黄酮碳苷含量检测，研究铁皮石斛的质量。(5)倍半萜生物碱类(特征性成分)此类成分虽为特征性成分，但含量极低，在其他品种石斛中含量较高。安徽农业大学申请了一种铁皮石斛总生物碱含量的检测方法(201810469952.6)。(6)木酯素(苷)类(非特征性成分)木酯素在多种植物中均存在，且在本品种不成群系，为非特征性成分。(7)简单酚酸类(非特征性成分)包括多种简单酚酸及其苷类成分，由于各种植物中均存在此类成分。综上所述，本发明为绕铁皮石斛中含有的黄酮碳苷类特征成分，开展总黄酮碳苷的含量检测方法研究。黄酮碳苷是指糖直接与黄酮母体以c-c键联结的化合物，在自然界分布较少。黄酮碳苷类化合物已被证明具有保肝、抗氧化、抗甲状腺、杀虫、抗病毒等多种活性(吴新安，赵毅民，天然黄酮碳苷及其活性研究进展，解放军药学学报，2005，21，135-138)，是铁皮石斛的药效成分之一(周桂芬，吕圭源，铁皮石斛不同部位黄酮碳苷类成分及清除dpph自由基能力比较研究，中国中药杂志，2012,37,1536-1540)。测定铁皮石斛中总黄酮碳苷的含量，将有助于进一步体现这类大极性特征成分在药材质量评价方面的用途，为建立科学、全面反映铁皮石斛药材质量的检测方法做出贡献。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种铁皮石斛药材的质量检测方法，主要涉及一种铁皮石斛药材中总黄酮碳苷的含量检测方法，可有效控制铁皮石斛药材的质量，从而确保其临床应用的安全性、稳定性和有效性。为实现上述目的，本发明通过对铁皮石斛中含有的以芹菜素为苷元的黄酮碳苷的系列研究，优选了提取工艺、除去黄酮氧苷的水解工艺、黄酮苷显色方法等，最终提供如下技术方案：一种铁皮石斛药材的质量检测方法，采用紫外分光光度法测定药材中总黄酮碳苷的含量,以碳苷黄酮类化合物为对照品，采用高浓度醇水系统超声提取铁皮石斛药材，依次用中极性有机溶剂和水饱和正丁醇萃取，将正丁醇萃取物用1m盐酸甲醇溶液水解，再依次用中极性有机溶剂和水饱和正丁醇萃取以得到总黄酮碳苷，然后用三乙胺显色法在400nm用外标法进行总碳苷黄酮的含量测定。所述的铁皮石斛药材的质量检测方法，具体检测步骤如下：1)将铁皮石斛粉碎，过80目筛，精密量取1g铁皮石斛粉末，以重量/体积比为13-100倍量的高浓度醇水系统超声提取10-60min，滤过，残渣用溶剂洗涤，合并滤液和洗液，置于100ml容量瓶，定容。摇匀，作为提取液。精密量取20ml提取液，蒸干，用10ml水复溶，超声溶解，转移，再用5ml水润洗，一并转移。用15ml中极性有机溶剂萃取3次，弃有机相，再用15ml水饱和正丁醇萃取3次，弃水相。蒸干正丁醇相后，加入20ml1m盐酸甲醇溶液，在95℃下酸解80min。蒸干酸液，用10ml水复溶，超声溶解，转移，再用5ml水润洗，一并转移，使用15ml中极性有机溶剂萃取3次，弃有机相，再用15ml水饱和正丁醇萃取3次，弃水相。蒸干正丁醇相后，先加入10ml60％乙醇超声溶解，再加入10ml1％三乙胺溶液。配成供试液。上述提取用高浓度醇水系统包括但不限于浓度为60％-95％的甲醇水溶液体系、乙醇水溶液体系；上述萃取用中极性有机溶剂包括但不限于三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯以及他们的二元混合物。2)对照品溶液的制备：精密称取铁皮石斛中含有的黄酮碳苷类化合物标准对照品，加60％乙醇溶解制成溶液；上述黄酮碳苷类化合物对照品，包括但不限于异夏佛塔苷、夏佛塔苷等铁皮石斛中含有的以芹菜素为苷元的黄酮碳苷。3)测定法：以60％乙醇：1％三乙胺＝1:1的溶液为空白参比溶剂；采用紫外分光光度法，测试在400nm波长处的吸光度，空白溶液无干扰；用标准曲线法计算含量。作为本发明进一步的细化方案：具体检测步骤如下：1)将铁皮石斛粉碎，过80目筛，精密量取1g铁皮石斛粉末，置于锥形瓶中，加入50ml90％甲醇溶液，超声提取40min，滤过，残渣也用90％甲醇洗涤，合并滤液和洗液，置于100ml容量瓶，定容。摇匀，作为提取液。精密量取20ml提取液，蒸干，用10ml水复溶，超声溶解，转移，再用5ml水润洗烧瓶，一并转移。用15ml氯仿萃取3次，弃有机相，再用15ml水饱和正丁醇萃取3次，弃水相。蒸干正丁醇相后，加入20ml1m盐酸甲醇溶液，在95℃下酸解80min。蒸干酸液，用10ml水复溶，超声溶解，转移，再用5ml水润洗烧瓶，一并转移，使用15ml氯仿萃取3次，弃有机相，再用15ml水饱和正丁醇萃取3次，弃水相。蒸干正丁醇相后，先加入10ml60％乙醇超声溶解，再加入10ml1％三乙胺溶液。配成供试液。2)对照品溶液的制备：精密称取异夏佛塔苷对照品4.7mg，置于50ml容量瓶中，加60％乙醇溶解，定容，精密量取标准溶液0.5、1.0、1.5、2、3、4ml，分别置于10ml容量瓶中定容，即得对照品溶液；3)测定法：以60％乙醇：1％三乙胺＝1:1的溶液为空白参比溶剂；按照紫外分光光度法在400nm波长处测吸光度，空白溶液无干扰；用标准曲线法计算含量，以吸光度为纵坐标y，异夏佛塔苷浓度为横坐标x进行线性回归，求得回归方程式为y＝43.492x+0.0268，线性范围为0.00235mg/ml-0.0188mg/ml，相关系数r2＝0.996，线性关系良好。本检测方法经过单因素试验优化样品前处理工艺，通过精密度、重复性、加样回收等方法学验证，证明是一种简便的测定铁皮石斛中总黄酮碳苷的有效方法。与现有技术相比，本发明的有益效果是：简便、易行、重复性好，能够确切反映铁皮石斛药材质量，进一步完善了铁皮石斛药材的质量标准，弥补了铁皮石斛质量评价中缺乏对以黄酮碳苷为代表的特征成分的检测方法的不足，使铁皮石斛药材的质量检测技术更科学、合理；可有效控制铁皮石斛药材的质量，从而确保其临床应用的安全性、稳定性和有效性。附图说明图1是黄酮氧苷(芦丁)与黄酮碳苷(异夏佛塔苷)不同条件酸水解情况。图2是碳苷黄酮提取量与提取时间的关系。图3是碳苷黄酮提取量与提取料液比的关系。图4是碳苷黄酮提取量与提取次数的关系。图5是异夏佛塔苷标准曲线图。具体实施方式下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例1：提取溶剂考察与显色方法考察称取1g过80目筛的铁皮石斛粉末，共5份，分别记为a、b、c、d、e；a、20ml80％甲醇超声提取40min；b、20ml90％甲醇超声提取40min；c、20ml60％乙醇超声提取40min；d、20ml80％乙醇超声提取40min；e、20ml95％乙醇超声提取40min，定容至25ml，得提取液，取10ml供试液，蒸干，用10ml水溶解。每次用10ml水饱和乙酸乙酯萃取三次，弃有机相；再用10ml水饱和正丁醇萃取三次，合并正丁醇相，蒸干，用10ml甲醇溶解，得萃取液。萃取液用以下三种方法测吸光度值。nano2-al(no3)3-naoh显色法：取5ml待测液，加5％nano20.3ml，振摇后放置5min，加10％al(no3)30.3ml，摇匀后放置60min，加1.0mol/lnaoh2ml，用各对应溶剂定容至刻度，以零管为空白，摇匀后用1cm比色皿，在510nm处测吸光度。直接测量法：扫描获得最大吸收波长后在该吸收波长下测定。三乙胺法：取对照品溶液0.5ml，置于5ml容量瓶中，加提取溶剂2ml，以1％三乙胺定容，摇匀。以试剂空白为参比，在400nm测定吸光度。提取结果如表1所示：表1不同提取方法的总碳苷黄酮提取率从表可以看出90％甲醇和95％乙醇都拥有较好的萃取效果，考虑到相比乙醇，甲醇的极性更大，可以更好的提出黄酮苷。最终选择90％甲醇作为提取溶剂。测定方法中，三乙胺法需要吸取更多对照品溶液以增大吸光度值；直接测定法每次都要扫描最大吸收波长，且考虑到后续不同批次石斛样品可能在黄酮碳苷的含量和种类上都有差异，不同批次最大吸收波长可能不同，找出一个共用的较难，故不采用；nano2-al(no3)3-naoh显色法看似可行，但在后续实验中发现该方法对水解之后纯化的黄酮苷没有显色，后经文献查阅发现该方法显色原理为对黄酮苷元中的邻二酚羟基显色，而铁皮石斛中目前已知所含的碳苷苷元均为芹菜素，芹菜素中不含邻二酚羟基，故不采用该方法。最终选择改良已有的三乙胺显色测定方法。实施例2：测定波长的选择通过测定对照品及提取物经过三乙胺处理后的紫外最大吸收，如表2所示，确定400nm为合理的总碳苷黄酮紫外分光光度法测定波长。表2不同物质的紫外最大吸收对照品/提取物异夏佛塔苷90％甲醇超声提取处理物紫外最大吸收峰/nm449，401，331401，325，296.5实施例3：萃取溶剂的选择根据文献查阅，发现提取黄酮大多使用水饱和正丁醇对黄酮水溶液进行深度萃取以获得纯度较高的黄酮。去除脂溶性杂质例如苷元一般有乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷等。我们在利用铁皮石斛样品进行实验时，tlc检测，发现使用乙酸乙酯会将小部分极性小的黄酮苷带出，而氯仿、二氯甲烷则不会出现这种情况，因此萃取剂优选氯仿或二氯甲烷+水饱和正丁醇。正丁醇提取液蒸干后进行盐酸-镁粉反应，呈紫红色，证明正丁醇提取液中含有黄酮类化合物。萃取次数同样进行了探究，将萃取所得到的有机层直接点在硅胶板上，显色，观察是否含有黄酮类物质，若有，则继续萃取，确定萃取次数为3次。实施例4：薄层色谱展开条件和酸水解条件的选择4.1薄层色谱展开条件在聚酰胺薄膜上，使用甲醇：水：正丁醇＝10：5：1作为展开剂，1％氯化铝甲醇试剂为显色剂。4.2水解温度量取300μg/ml芦丁标准品溶液5ml和100μg/ml异夏佛塔苷标准品溶液1ml，加入20ml1m盐酸甲醇溶液，分别在不同温度20、40、60、80、95℃下水解1h，蒸干酸液后，10ml甲醇超声溶解定容，薄层色谱展开，观察水解情况。4.3盐酸浓度量取300μg/ml芦丁标准品溶液5ml和100μg/ml异夏佛塔苷标准品溶液1ml，分别加入20ml盐酸甲醇溶液，浓度分别为0.2、0.4、0.6、0.8、1、1.2m，95℃下水解1h，蒸干酸液后，10ml甲醇超声溶解定容，薄层色谱展开，观察水解情况。4.4水解时间量取300μg/ml芦丁标准品溶液5ml和100μg/ml异夏佛塔苷标准品溶液1ml，分别加入20ml1m盐酸甲醇溶液，95℃下水解20、40、60、80、100min，蒸干酸液后，10ml甲醇超声溶解定容，薄层色谱展开，观察水解情况。由附图1可见，编号1-5为不同温度20、40、60、80、95℃下酸水解情况的薄层色谱图，可以看出80℃下芦丁基本水解完全，为保证黄酮氧苷水解完全，选择较高的温度95℃；编号6-11为不同盐酸浓度0.2、0.4、0.6、0.8、1、1.2m下酸水解情况的薄层色谱图，0.8m盐酸浓度下可以看出还有极少量残留，所以选择1m盐酸浓度；编号12-16为不同水解时间20、40、60、80、100min下酸水解情况的薄层色谱图，60min下可以看出还有极少量残留，80min下基本水解完全，所以选择水解时间80min。综上，酸水解条件为95℃下，加入20ml1m盐酸甲醇溶液，水解80min。实施例5：单因素实验5.1提取时间称取1g过80目筛的铁皮石斛干燥茎粉末，加入25ml90％的甲醇，超声提取，放冷，过滤，定容至100ml。精密量取滤液20ml，经过处理后，在400nm处测得a，再从回归方程上读出c，计算得碳苷含量，得到的提取时间与碳苷黄酮提取率的关系如附图2所示：40-60min三者提取量相差无几，选择40min，为0.833mg/g。5.2液料比称取1g过80目筛的铁皮石斛干燥茎粉末，加入13-100ml90％的甲醇，超声提取40min，放冷，过滤，定容至100ml。精密量取滤液20ml，经过处理后，在400nm处测得a，再从回归方程上读出c，计算得碳苷黄酮提取率，得到的液料比与碳苷黄酮提取率的关系如附图3所示：当液料比为1：50时，碳苷黄酮的提取率最高，为0.894mg/g。5.3提取次数称取1g过80目筛的铁皮石斛干燥茎粉末，加入50ml90％的甲醇，超声提取多次，放冷，过滤，精密量取滤液，定容至100ml，分别量取取20，100，100ml滤液，经过处理后。在400nm处测得a，再从回归方程上读出c，计算得碳苷黄酮提取率，得到的提取次数与碳苷黄酮提取率的关系如附图4所示：提取1次能把碳苷黄酮类成分90％以上提出。实施例6：方法学考察6.1精密度同一浓度的样品溶液，于400nm处重复测量a值6次，如表3所示，算得相对标准偏差＝0.481％，表明仪器日内精密度良好。表3仪器的精密度吸光度值黄酮含量(mg/g)rsd0.3300.70220.3330.70910.3340.71150.481％0.3340.71150.3330.70910.3330.70916.2重复性实验称取1g过80目筛的铁皮石斛干燥茎粉末，共6份。分别加入50ml90％的甲醇，超声提取40min，放冷，过滤，定容至100ml，精密量取滤液20ml，经过处理，在400nm处测得a，再从回归方程上读出c，计算得碳苷黄酮含量，计算结果如表4所示，算得rsd＝3.69％，表明该方法的重复性良好。表4重复性试验结果质量(g)吸光度值黄酮含量(mg/g)rsd0.99690.3700.79081.00370.3890.82971.00510.4040.86213.69％1.00340.3790.80711.00560.4040.86250.99840.3990.85726.3加样回收率加样回收实验准确称取0.5g过80目筛的铁皮石斛干燥茎粉末，共9份，分别加入碳苷黄酮标准品适量，按上述供试液制备和碳苷黄酮测定法进行提取率测定。结果如下表5所示。表5加样回收试验结果组别质量(g)吸光度值回收率平均回收率rsd0.49860.351100.9％低(+3.2ml)0.50560.362106.8％104.1％2.90％0.49740.356104.7％0.50540.405104.9％中(+4ml)0.50660.38296.3％99.2％4.98％0.50330.38196.4％0.50650.425100.8％高(+4.8ml)0.50700.41997.6％98.4％2.15％0.50140.41596.8％6.4稳定性实验同一供试品溶液，稀释50倍后，分别在0，2h、4h、8h、24h和48h测量a值，如表11所示，所得相对标准偏差＝4.40％，说明供试样品48h内稳定性良好。长期稳定性样品为重复性实验2号，将其在冰箱内放置一个月后再次测量，吸光度值为0.381。与之前相比rsd＝1.47％，证明在冰箱内放置一个月的样品是稳定的。表6稳定性实验结果时间(h)吸光度值黄酮含量(mg/g)rsd00.3860.886920.4000.92040.3860.88774.40％80.3960.909240.4170.958480.4300.989实施例7：含量测定方法1)供测样品液制备方法：将铁皮石斛粉碎，过80目筛，精密量取1g铁皮石斛粉末，置于锥形瓶中，加入50ml90％甲醇溶液，超声提取40min，滤过，残渣也用90％甲醇洗涤，合并滤液和洗液，置于100ml容量瓶，定容。摇匀，作为提取液。精密量取20ml提取液，蒸干，用10ml水复溶，超声溶解，转移，再用5ml水润洗烧瓶，一并转移。用15ml氯仿萃取3次，弃有机相，再用15ml水饱和正丁醇萃取3次，弃水相。蒸干正丁醇相后，加入20ml1m盐酸甲醇溶液，在95℃下酸解80min。蒸干酸液，用10ml水复溶，超声溶解，转移，再用5ml水润洗烧瓶，一并转移，使用15ml氯仿萃取3次，弃有机相，再用15ml水饱和正丁醇萃取3次，弃水相。蒸干正丁醇相后，先加入10ml60％乙醇超声溶解，再加入10ml1％三乙胺溶液。配成供试液2)对照品溶液的制备：精密称取异夏佛塔苷对照品4.7mg，置于50ml容量瓶中，加60％乙醇溶解，定容，精密量取标准溶液0.5、1.0、1.5、2、3、4ml，分别置于10ml容量瓶中定容，即得对照品溶液；3)测定法：以60％乙醇：1％三乙胺＝1:1的溶液为空白参比溶剂；按照紫外分光光度法在400nm波长处测吸光度，空白溶液无干扰；用标准曲线法计算含量，以吸光度为纵坐标y，异夏佛塔苷浓度为横坐标x进行线性回归，求得回归方程式为y＝43.492x+0.0268，线性范围为0.00235mg/ml-0.0188mg/ml，相关系数r2＝0.996，线性关系良好。标准曲线见图5。实施例8：含量测定方法1)供测样品液制备方法：将铁皮石斛粉碎，过80目筛，精密量取1g铁皮石斛粉末，置于锥形瓶中，加入50ml80％乙醇溶液，超声提取50min，滤过，残渣也用80％乙醇洗涤，合并滤液和洗液，置于100ml容量瓶，定容。摇匀，作为提取液。精密量取20ml提取液，蒸干，用10ml水复溶，超声溶解，转移，再用5ml水润洗烧瓶，一并转移。用15ml二氯甲烷萃取3次，弃有机相，再用15ml水饱和正丁醇萃取3次，弃水相。蒸干正丁醇相后，加入20ml1m盐酸甲醇溶液，在95℃下酸解80min。蒸干酸液，用10ml水复溶，超声溶解，转移，再用5ml水润洗烧瓶，一并转移，使用15ml二氯甲烷萃取3次，弃有机相，再用15ml水饱和正丁醇萃取3次，弃水相。蒸干正丁醇相后，先加入10ml60％乙醇超声溶解，再加入10ml1％三乙胺溶液。配成供试液2)对照品溶液的制备：精密称取夏佛塔苷对照品5.0mg，置于50ml容量瓶中，加60％乙醇溶解，定容，精密量取标准溶液0.5、1.0、1.5、2、3、4ml，分别置于10ml容量瓶中定容，即得对照品溶液；3)测定法：以60％乙醇：1％三乙胺＝1:1的溶液为空白参比溶剂；按照紫外分光光度法在400nm波长处测吸光度，空白溶液无干扰；用标准曲线法计算含量，以吸光度为纵坐标y，夏佛塔苷浓度为横坐标x进行线性回归，求得回归方程式为y＝48.354x+0.0308，线性范围为0.00250mg/ml-0.0200mg/ml，相关系数r2＝0.998，线性关系良好。实施例9：含量测定实验以实施例7所示方法，测定多种铁皮石斛样品中的总黄酮碳苷含量。分别称取1g过80目筛的代号为sy-1、sy-2、gxd、gxl、gxs、keb、xrc、wztd、wzty、wc、lxx、hq、nb、sxg、zhh、tfts、tfth、th、ylb的铁皮石斛干燥茎粉末，加入50ml的90％的甲醇，超声提取1次40min，过滤，定容至100ml。精密量取滤液20ml，经过处理后。在400nm处测得a，再从实施例1中的回归方程上读出c，计算得提取率如下表12所示。表7不同批次的铁皮石斛药材的地区与栽培方式表8不同批次的铁皮石斛药材的黄酮碳苷含量由以上测定数据可知，铁皮石斛总黄酮碳苷在各种样品中的含量有明显差异，说明本方法可以用于区分铁皮石斛药材中黄酮碳苷的质量。本发明简便、易行、重复性好，能够确切反映铁皮石斛药材质量，进一步完善了铁皮石斛药材的质量标准，弥补了铁皮石斛质量评价中缺乏对以碳苷黄酮为特征成分的检测方法的不足，使铁皮石斛药材的质量检测技术更科学、合理；可有效控制铁皮石斛药材的质量，从而确保其临床应用的安全性、稳定性和有效性。对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。当前第1页12