本发明涉及一种元素杂质检测方法，尤其涉及一种大麻提取物和大麻油产品中元素杂质的检测方法。
背景技术：
：金属元素毒性大潜伏期长，且能沿食物链富集，对人体有明显的危害。进入大气、水体和土壤等各种环境的金属元素，均可通过呼吸道、消化道和皮肤等各种途径被动物吸收，当积累到一定量后，会损害神经系统、造血系统和消解系统，降低机体免疫力。近年来，国内外越来越重视金属杂质的溶出检测及其限度问题，国际上陆续出台了针对金属元素限度的标准及指导原则，如美国药典<232药品元素杂质限度>、ichq3d<元素杂质指导原则>，emea/chmp的金属催化剂或金属试剂残留量限度规定的指导文件。而现有技术在大麻提取物和大麻油产品中元素杂质并无安全可靠的检测方法。cn107205960a(2017-09-20)公开了一种大麻提取物及其制备和使用方法，然而并未涉及其中元素杂质的检测方法；cn110004179a(2019-07-12)公开了一种大麻素类活性物质的通用检测方法及其检测试剂盒，然而也未涉及其中元素杂质的检测方法。cn104597110a(2015-05-06)公开了一种高纯铬中微量元素杂质的icp-ms测定方法，但并不适用于大麻提取物和大麻油产品中元素杂质的检测。技术实现要素：本发明的目的是提供一种大麻提取物和大麻油产品中元素杂质的检测方法。本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种大麻提取物和大麻油产品中元素杂质的检测方法，包括具体步骤：(1)选择分析方法：使用电感耦合等离子体质谱检测法(2)确定参考标准：选择1000mg/l以下的砷、镉、铅、汞标准品；(3)选择试剂溶剂：选择浓硝酸、超纯水和100％乙醇；其中，浓硝酸质量浓度为68-97.5％；(4)样品选择：选择大麻提取物和大麻油；(5)制备标准、内标、空白和样品；(6)按照以下验证参数分别进行测试：a系统适用性；b定量限值和检测限值；c准确性测试：包括ⅰ)大麻油的准确性测试；ⅱ)大麻提取物的准确性测试；d范围测试；e精确性测试：包括ⅰ)大麻油的重复性测试；ⅱ)大麻提取物的重复性测试；ⅲ)中间精度测试；f特异性测试。该方法的目的是提供证据，证明该测试方法可以在as(75)，cd(114)，hg(202)和pb(208)(工作标准浓度的10-300％)的分析范围内产生可靠和一致的结果。电感耦合等离子体质谱(icp-ms)利用icp的能力从样品中的元素物质产生带电离子。然后将这些离子导入质谱仪，质谱仪根据它们的质荷比将它们分开。应限制元素杂质的含量，具体可根据日常曝光提供不同的限值。icp-ms(电感耦合等离子体质谱)法具有检测限低，干扰少，动态线性范围宽，分析精密度高，满足多元素同时测定的优点。作为优选，所述定量限值用于测试可量化的最低水平；定量限值由准确度决定检测限值用于检测分析物的浓度。作为优选，所述定量限值等于空白试剂标准偏差的8-12倍。更优选地，所述定量限值等于空白试剂标准偏差的10倍。更优选地，计算的定量限值低于准确度研究中获得的最低浓度水平。作为优选，所述检测限值等于空白试剂标准偏差的2-4倍。更优选地，所述检测限值等于空白试剂标准偏差的3倍。作为优选，所述检测限值等于非损伤微测技术乘以0.05-0.15倍的规格定量限值浓度。更优选地，所述检测限值等于非损伤微测技术乘以0.1倍的规格定量限值浓度。作为优选，所述准确性测试用于测试发现量与已知添加量的接近程度；按照限值的50％，100％，150％准备一式三份；每个级别的平均恢复率为70％-150％。作为优选，所述范围测试用于测试线性响应范围。作为优选，所述精确性测试，具体是在100％的极限下进行6次以上重复。作为优选，目标元素浮动不超过20％。更优选地，系统适用性中的标准校对浮动范围为-5.2％-5.9％。作为优选，准确性研究分别在as(75)，cd(114)，hg(202)和pb(208)的极限浓度的10％，50％，100％，150％和300％下进行。更优选地，元素杂质as(75)的准确度是在1.2ppb-36ppb；cd(114)和pb(208)的准确度是0.4ppb-12ppb；hg(202)的准确度是0.8ppb-24ppb。更优选地，大麻提取物中间精度的验收标准是每个目标元素rsd为nmt20％-25％。作为优选，所述大麻提取物的加标样品制备方法包括步骤：1)将0.1-0.9g大麻提取物精确称量到50ml离心管中；2)向每个管中加入0.5-3ml乙醇；然后将每个管子盖紧，并涡旋直至完全溶解；3)将硝酸，盐酸，中间标准-2溶液，150-250μl内部工作标准溶液和30-80μl金标准品被转移到相同的离心管中，盖管松散，并允许在通风橱中冷却；4)然后将每个管盖紧，用手摇匀，将样品转移到消解管中；5)所有样品均在多波段go消解系统中消解；消解时间：5-15分钟；目标温度：120-210℃；保持时间：15-25分钟；6)消解完成后，将样品转移到离心管中；用超纯水冲洗消解管，并将冲洗液合并到相同的离心管中；将每个离心管用超纯水稀释至50ml标记，加盖并用手充分混合。更优选地，所述大麻提取物的加标样品制备方法包括步骤：1)将0.1-0.9g大麻提取物精确称量到50ml离心管中；2)向每个管中加入1ml乙醇；然后将每个管子盖紧，并涡旋直至完全溶解；3)将硝酸，盐酸，中间标准-2溶液，200μl内部工作标准溶液和50μl金标准品被转移到相同的离心管中，盖管松散，并允许在通风橱中冷却；4)然后将每个管盖紧，用手摇匀，将样品转移到消解管中；5)所有样品均在多波段go消解系统中消解；消解时间：10分钟；目标温度：120-210℃；保持时间：15-25分钟；6)消解完成后，将样品转移到50ml离心管中；用milli-q水冲洗消解管，并将冲洗液合并到相同的离心管中；将每个离心管用milli-q水稀释至50ml标记，加盖并用手充分混合。综上所述，本发明具有以下有益效果：本发明测试方法可以用于在大麻提取物和大麻油产品中元素杂质as(75)，cd(114)，hg(202)和pb(208)(工作标准浓度的10-300％)的检测分析范围内产生可靠和一致的结果。具体实施方式表1植物药品和植物药制备中的元素杂质含量限值(usp-美国药典委员会标准；nmt-非损伤微测技术)icp-ms技术在进行元素分析时是独一无二的：(1)等离子体的高温有效地消除了火焰原子吸收(faa)的所有干扰，例如形成难熔化合物，抑制剂等。(2)雾化元素由它们的质荷比决定，每个元素都是唯一的。此外，所有元素同位素都已确立；因此，icp-es(icp发射)中发现干扰的可能性大大降低。(3)将样品泵入界面，确保明确定义样品引入速度。在faa中的样品引入速率中被发现的典型误差也减少了。它不再依赖于faa中的样品抽吸过程的物理特性(粘度，密度，液体水平)。表2:验证方法3.0测试方法3.1参考标准本研究使用的所有标准均为适用于追踪金属分析的认证材料。表3：本验证中使用的参考标准标准品供应商砷标准品(～1000mg/l)西格玛奥德里奇镉标准品(～1000mg/l)西格玛奥德里奇铅标准品(～1000mg/l)西格玛奥德里奇汞标准品(～1000mg/l)西格玛奥德里奇铋,铟&锗内标(100ppm)安捷伦3.2试剂和溶剂表4：本验证中使用的试剂和溶剂试剂供应商等级浓硝酸费希尔化学微量金属超纯水自制-100％乙醇商用乙醇试剂3.3样本信息表5：用于验证的样品3.4仪器验证分3批进行表6：使用的设备仪器安捷伦7900电感耦合等离子体质谱安东帕，微波go消解系统微量移液器分析平衡仪3.5标准，内标，空白和样品制备按照所附规定的测试方法制备标准、内标、空白和样品3.6仪器设置按照所附规定的测试方法4.0验证参数4.1系统适用性系统适用性表明，分析系统可以在重复测量中精确测量目标值。每次在分析之前新鲜制备标准溶液。按照所附测试方法的规定注入标准溶液和空白溶液。在该方法验证期间，系统适用性执行了5次。在注射样品之前和之后，注射工作标准溶液，并计算每次运行的系统浮动。接受标准：·校准标准曲线中每个目标元素的相互关系系数(r)为nlt0.99。·每个目标元素浮动不超过20％表7：第一批中的系统适用性结果名称r标准校对浮动(％)as(75)1.00000.1cd(114)1.0000-2.4hg(202)1.0000-5.2pb(208)1.00001.9表8：第2批中的系统适用性结果名称r标准校对浮动(％)as(75)0.99995.9cd(114)0.9998-1.0hg(202)1.0000-0.1pb(208)1.00000.1表9：第3批中的系统适用性结果名称r标准校对浮动(％)as(75)0.9999-1.6cd(114)1.0000-0.9hg(202)1.0000-0.8pb(208)0.99991.5结论：如表7,8和9所示，所有系统适用性要求在4次运行中均符合所有验收标准，如表7,8和9所示。这证明该系统对于测定as(75)，cd(114)，hg(202)和pb(208)是可靠的。4.2定量限值(loq)和检测限(lod)为了测定loq和lod，将空白试剂注入6次，并计算as(75)，cd(114)，hg(202)和pb(208)的标准偏差。loq和lod的计算如下式中as(75)，cd(114)，hg(202)和pb(208)所规定。有关结果摘要，请参阅表11。定量限值等于标准偏差的10倍。loq＝10×空白试剂的标准偏差检测限等于标准偏差的3倍。lod＝3×空白试剂的标准偏差定量限值的验收标准：计算的loq应低于准确度研究中获得的最低浓度水平。检测限的验收标准：计算的lod应为nmt×0.1倍规格限值浓度(表11)。表10：第一批1中的lod/loq结论：确定loq和lod研究的结果符合所有验收标准。确定的每个as(75)，cd(114)，hg(202)和pb(208)的loq和lod如表11中所述。4.3准确性分析过程的准确性表示传统的真实值或可接受的参考值与所发现的值之间的一致性的接近程度。准确性研究在as(75)，cd(114)，hg(202)和pb(208)的极限浓度的10％，50％，100％，150％和300％下进行。准确性研究分两次进行。4.3.1准确度：大麻油大麻油是溶解在mct(中链甘油三酯)中的超临界二氧化碳提取物(提取物)。因此，大麻油被认为是mct的最坏情况。因此，mct油的方法验证结果可以从大麻油中推断，但特异性除外。表11：中间标准溶液1的制备:(所有储备标准浓度-1000mg/l).中间标准溶液2的制备：将1.0ml中间溶液1转移到100ml容量瓶中并用稀释剂稀释至体积并充分混合。一式三份制备以10％，50％，100％，150％和300％水平加标大麻油的加标样品溶液，将相应体积的中间标准溶液-2(表13)移液到单独的50ml容量瓶中。此外，还为精密重复性测试准备了另外3个以100％水平加标的样品。表12：准确度加标水平加入大麻油的加标样品：·将0.1-0.9g大麻油精确称量到50ml离心管中(共18个样品)。·一定量硝酸，盐酸，表14中规定体积的中间标准-2溶液，将200μl内部工作标准溶液和50μl金标准品转移到相同的离心管中，盖管松散，并允许在通风橱中冷却。·然后将每个管盖紧，用手摇匀，将样品转移到消解管中。·所有样品均在多波段go消解系统中消解(斜坡时间：10分钟；目标温度：190℃；保持时间：20分钟)。·消解完成后，将样品转移到50ml离心管中。用超纯水冲洗消解管，并将冲洗液合并到相同的离心管中。将每个离心管用超纯水稀释至50-ml标记，加盖并用手充分混合。·所有结果总结在下表13中。表13：准确度值验收标准：·对于每个浓度水平的三次重复制剂的平均值，加标回收率在理论值的70％至150％之间。结论：·根据表16中总结的大麻油准确性研究结果，符合所有回收标准。因此，测试方法对于大麻油中as(75)，cd(114)，hg(202)和pb(208)的测定是准确的，对于as(75)，在1.2ppb至36ppb的范围内；对于cd(114)和pb(208)，0.4ppb至12ppb；对于hg(202)，为0.8ppb至24ppb。4.3.2准确度：大麻提取物第二批测试是在大麻提取物上完成的。制备单个未加标样品的大麻提取物。通过将(表13)相应体积的中间标准溶液-2移液到单独的50ml容量瓶中，一式三份制备以10％，50％，100％，150％和300％大麻提取物加标样品溶液。此外，还准备了3个以100％水平加标的样品进行精密重复性测试。大麻提取物的加标样品制备：·将0.1-0.9g大麻提取物精确称量到50ml离心管中(共18个样品)。·向每个管中加入1ml乙醇。然后将每个管子盖紧，并涡旋直至完全溶解。·一定量硝酸，盐酸，表12中规定体积的中间标准-2溶液，200μl内部工作标准溶液和50μl金标准品被转移到相同的离心管中，盖管松散，并允许在通风橱中冷却。·然后将每个管盖紧，用手摇匀，将样品转移到消解管中。·所有样品均在多波段go消解系统中消解(斜坡时间：10分钟；目标温度：120-210℃；保持时间：15-25分钟)。·消解完成后，将样品转移到50ml离心管中。用milli-q水冲洗消解管，并将冲洗液合并到相同的离心管中。将每个离心管用milli-q水稀释至50-ml标记，加盖并用手充分混合。·所有结果总结在下表14中。表14：准确值验收标准：·在每种浓度下，三次重复制剂的平均值的理论值为70％至150％。结论：·基于表14中总结的大麻提取物准确性研究结果，符合所有回收标准。因此，测试方法对于大麻提取物中的as(75)，cd(114)，hg(202)和pb(208)的测定是准确的，对于as(75)，在1.2ppb至36ppb的范围内；对于cd(114)和pb(208)，在0.4ppb至12ppb的范围内；对于hg(202)，在0.8ppb至24ppb的范围内。4.4范围每种金属的校准范围在该方法的线性范围内：校准范围水平之外的含有残留物的测试溶液可稀释至校准范围内的浓度。验收标准：·通过遵守准确度恢复要求来证明范围。结论：·大麻油和大麻提取物的准确度恢复符合所有要求，as(75)为1.2ppb至36ppb，cd(114)和pb(208)为0.4ppb至12ppb，hg(202)为0.8ppb至24ppb。4.5精度4.5.1可重复性：大麻油表15：可重复性大麻油结果总结验收标准：·每个目标元素的相对标准偏差rsd是nmt20％(n＝6)。结论：·表15的可重复性大麻油结果总结符合所有验收标准。因此，发现测试方法ara-18-007.00草案对于测定大麻油中的as(75)，cd(114)，hg(202)和pb(208)是准确的。4.5.2重复性：大麻提取物表16：重复性大麻提取物结果总结4.5.3中间精度在不同的日子，制备6种单独的大麻油和6种单独的大麻提取物样品溶液，加标浓度为100％，参见ar-19-001pg.01-10。所有结果总结在表17大麻油和表18大麻提取物中。将中间精度和重复性研究的结果组合进行总共12次分析，结果参见表19。表17：大麻油的中间精度结果表18：大麻提取物中间精度结果表19：重复性和中间精度组合结果验收标准：·每个目标元素rsd是nmt20％(n＝6)·每个目标元素rsd是nmt25％(n＝12)结论：·表17大麻油中间精度的总结的结果，表18大麻提取物中间精度和表19组合结果符合所有验收标准。因此，发现测试方法精确且可重复用于测定大麻油和大麻提取物中的as(75)，cd(114)，hg(202)和pb(208)。4.6特异性通过遵守准确度和精度要求来证明特异性。5.0参考·sop020-031.00：药品和药物的分析方法验证·ichq2(r1)：分析程序的验证：文本和方法·usp-41<232>元素杂质-限量·usp-41<233>元素杂质-程序·ph.eur.2.2.58“电感耦合等离子体-质谱”·ph.eur.2.2.23“原子吸收光谱法”-方法i.·现任ph.eur.2.4.27。“草药和草药制剂中的重金属”·usp-41<561>“植物来源的文章”·“使用masshunter4.1软件操作agilent7900icp-ms”·“多波段-go微波消解系统的操作”6.0结论符合所有验收标准，并且“通过icp-ms确定mct油，大麻提取物和大麻油产品中元素杂质(砷，镉，铅和汞)的方法”已在凯纳比斯药业有限公司得到验证。本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。当前第1页12