一种测定硫脲类药物中硫脲含量的方法与流程

本发明属于硫脲类药物中残留硫脲含量检测技术领域，涉及硫脲类药物中硫脲含量的检测方法，具体设计一种使用lc-ms/ms法检测硫脲类药物中硫脲含量的方法，所述药物为丙硫氧嘧啶。

背景技术：

硫脲在医药上用作生产噻类药物和抑制甲状腺病药的中间体，反复作用时可抑制甲状腺和造血器官的机能，引起中枢神经麻痹及呼吸和心脏功能降低等症状，对人的致死量，文献记载为10g/kg，因此需要控制其在药物中的含量，但目前并无质量标准收录硫脲的含量测定方法。

技术实现要素：

针对上述不足，本发明的目的是提供一种测定硫脲类药物中硫脲含量的方法，不仅检测时间短，准确度好，精密度高，且重复性好。

本发明提供了如下的技术方案：

一种测定硫脲类药物中硫脲含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1)：取硫脲标准品，以甲醇-水(5:95)溶液为溶剂，配制对照品溶液，取待测药物，用甲醇-水(5:95)溶液溶解，获得供试品溶液；

步骤2)：平行配制两份对照品溶液，经lc-ms/ms法检测，分别获得对照品溶液中硫脲的峰面积，计算硫脲的峰面积与对照品溶液的浓度的比值，得硫脲的响应因子。

步骤3)：取供试品溶液经lc-ms/ms法检测，获得供试品溶液的峰面积，用响应因子计算供试品溶液中硫脲的含量。

优选的，平行配制两份对照品溶液：

精密移取硫脲标准品约10mg，加10ml甲醇溶液溶解，用甲醇-水(5:95)溶液稀释制成每1ml中含有100ng硫脲的溶液，作为对照品溶液-1。

精密移取硫脲标准品约10mg，加10ml甲醇溶液溶解，用甲醇-水(5:95)溶液稀释制成每1ml中含有100ng硫脲的溶液，作为对照品溶液-2。

供试品溶液配置：

精密称取丙硫氧嘧啶约10mg，加0.5ml甲醇溶液溶解，涡旋3min，加入9.5ml水稀释制成每1ml中含有1mg的样品溶液，作为供试品溶液-1。

精密称取丙硫氧嘧啶约10mg，加0.5ml甲醇溶液溶解，涡旋3min，加入9.5ml水稀释制成每1ml中含有1mg的样品溶液，作为供试品溶液-2。

优选的，在步骤2)和步骤3)中，lc-ms/ms法的参数为：采用watershsst3色谱柱，离子源为esi源，在正离子模式下采用多反应监测(mrm)扫描测定，外表法定量，离子对为77/60，去簇电压为40v，碰撞能量为20v，柱温为35℃，以酸-水(1:1000)为流动相a，乙腈为流动相b，流速0.3ml/min，梯度洗脱程序为：0～3min，流动相b的体积百分数为10％；3～4min，流动相b的体积百分数由10％至95％；4～6min，流动相b的体积百分数为95％；6～6.1min，流动相b的体积百分数由95％至10％；6.1～7min，流动相b的体积百分数为10％。

本发明的有益效果：

1、本发明采用的样品前处理和lc-ms/ms方法测定硫脲的含量，具有如下显著的特点。第一，采用甲醇-水(5:95)溶液直接溶解硫脲类药物，减少有机溶剂的使用，减少对环境的危害；第二，采用质谱检测器，灵敏度高，专属性强，可以检测样品中ppm级的硫脲。

2、在本发明提供的lc-ms/ms条件下，通过外标一点法测定供试品溶液中的硫脲含量，操作简单，并进行了系列的方法学验证，试验结果表明本发明的检测方法专属性强、准确度好、精密度高、重复性好，符合药物的质量标准研究的技术要求。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1色谱图图谱；

图2硫脲标准曲线

图3色谱图谱对比图；

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做具体说明。

实施例1：

精密移取硫脲标准品10mg，加10ml甲醇溶液溶解，用甲醇-水(5:95)溶液稀释制成每1ml中含有100ng硫脲的溶液，作为对照品溶液-1。

精密称取丙硫氧嘧啶10mg，加0.5ml甲醇溶液溶解，涡旋3min，加入9.5ml水稀释制成每1ml中含有1mg的样品溶液，作为供试品溶液-1。

精密移取硫脲标准品10mg，加10ml甲醇溶液溶解，用甲醇-水(5:95)溶液稀释制成每1ml中含有100ng硫脲的溶液，作为对照品溶液-2。

精密称取丙硫氧嘧啶10mg，加0.5ml甲醇溶液溶解，涡旋3min，加入9.5ml水稀释制成每1ml中含有1mg的样品溶液，作为供试品溶液-2。

lc-ms/ms条件为：lc-ms/ms法的参数为：采用watershsst3色谱柱，离子源为esi源，在正离子模式下采用多反应监测(mrm)扫描测定，外表法定量，离子对为77/60，去簇电压为40v，碰撞能量为20v，柱温为35℃，以酸-水(1:1000)为流动相a，乙腈为流动相b，流速0.3ml/min，梯度洗脱程序为：0～3min，流动相b的体积百分数为10％；3～4min，流动相b的体积百分数由10％至95％；4～6min，流动相b的体积百分数为95％；6～6.1min，流动相b的体积百分数由95％至10％；6.1～7min，流动相b的体积百分数为10％。

采用本发明提供的lc-ms/ms条件，分别对对照品溶液和供试品溶液进行lc-ms/ms分析。所得色谱图结果如图1所示，对照品溶液的峰面积为821522.8。

实施例2：

本实施例提供方法的线性范围考察。

储备溶液-1(硫脲溶液：1mg/ml)：精密称取硫脲10mg至10ml容量瓶中，用甲醇-水(5:95)溶液定容，混匀。

储备溶液-2(硫脲溶液：2000ng/ml)：精密移取0.10ml储备溶液-1至50ml容量瓶中，用甲醇-水(5:95)溶液定容，混匀。

储备溶液-3(硫脲溶液：100ng/ml)：精密移取0.50ml储备溶液-2至10ml容量瓶中，用甲醇-水(5:95)溶液定容，混匀。

线性溶液：

l-loq：精密移取1.00ml储备溶液-3至10ml容量瓶中，甲醇-水(5:95)溶液定容，混匀。

l-50：精密移取0.25ml储备溶液-2至10ml容量瓶中，用甲醇-水(5:95)溶液定容，混匀。

l-100：精密移取0.5ml储备溶液-2至10ml容量瓶中，用甲醇-水(5:95)溶液定容，混匀。

l-150：精密移取0.75ml储备溶液-2至10ml容量瓶中，用甲醇-水(5:95)溶液定容，混匀。

l-200：精密移取1.00ml储备溶液-2至10ml容量瓶中，用甲醇-水(5:95)溶液定容，混匀。

精密移取l-loq、l-50、l-100、l-150、l-200的溶液，分别注入lc-ms/ms中，记录色谱图。以浓度c和峰面积a进行线性回归，试验结果见表1和图2。

表1硫脲标准曲线结果

实验结果表明：硫脲在0.0103～0.2062μg/ml的浓度范围内，浓度与峰面积呈线性关系，且线性关系良好。线性回归方程为：y＝6370994.9200x+54742.3122(r＝0.9987，n＝5)。

实施例3：

本实施例提供方法的加样回收试验：

通过加样回收的方法，对本发明提供的方法的准确度进行分析。

取药物10mg，精密称定，平行11份。取其中2份，加甲醇-水(5:95)溶液溶解，定容和混匀，作为供试品溶液，测定样品中的硫脲含量；取其中3份，分别加入0.25ml储备液-2，加甲醇-水(5:95)溶液溶解，定容和混匀，作为50％回收率溶液；取其中3份，分别加入0.5ml储备液-2，加甲醇-水(5:95)溶液溶解，定容和混匀，作为100％回收率溶液；取其中3份，分别加入0.75ml储备液-2，加甲醇-水(5:95)溶液溶解，定容和混匀，作为150％回收率溶液。

精密移取供试品溶液和100％回收率溶液，分别注入lc-ms/ms中，记录色谱图，按照外表法以峰面积计算回收率，结果见表2，结果显示，硫脲回收率均在80～120％。表明本发明提供的方法具有良好的准确度。

表2供试品溶液含量结果

表3硫脲回收率结果

试验结果表明，硫脲回收率均在80％～120％范围内，且rsd小于20％，说明本方法准确度较好。

实施例4：

本实施例提供方法的精密度试验：

重复性：通过100％加样回收的方法，平行配制6份100％回收率溶液，作为重复性溶液。

中间精密度：由另一实验人员平行配制6份100％回收率溶液，作为中间精密度溶液。

对本发明提供的方法的精密度进行分析。按本发明的lc-ms/ms法测定，结果见表4，结果显示，硫脲回收率为80％～120％，12针回收率rsd％为6。表明本发明提供的方法具有良好的准确度。

表4硫脲精密度统计结果

实施例5：

本实施例提供方法的专属性试验：

取甲醇-水(5:95)溶液，实施例1中对照品溶液和供试品溶液，实施例3中100％回收率溶液，按本发明的lc-ms/ms法测定，记录谱图，结果见图3。结果表明，甲醇-水(5:95)溶液和供试品溶液对硫脲的测定无干扰

实施6：

本实施例提供方法的稳定性试验

取实施例1中的对照品溶液、实施例3中的100％回收率溶液，于室温下，考察其稳定性。按本发明的lc-ms/ms法，分别进样，记录硫脲的峰面积，记算对照品溶液和100％回收率溶液相对于0h点的回收率。结果见表5～6。结果表明，对照品溶液室温下放置17.3h和100％回收率溶液室温放置15.7h的回收率均在80～120％，说明本发明提供的方法具有良好的稳定性。

表5对照品溶液稳定性结果表

表6100％回收率溶液稳定性结果表

以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。