一种单粒小麦直链淀粉含量检测方法与流程

本发明属于淀粉含量检测技术领域，尤其涉及一种单粒小麦直链淀粉含量检测方法。

背景技术：

目前，最接近的现有技术：淀粉是小麦籽粒中重要的的组成成分之一，按照其分子组成结构不同可分为直链淀粉和支链淀粉。普通谷物含有约20％的直链淀粉，而糯性谷物中直链淀粉含量更少。含有较少支化的直链淀粉分子的化学性质有更好的其营养价值。最近的临床研究表明，食物中的直链淀粉对降低血糖和胰岛素很重要。由于直链淀粉的消化速度更慢，对人体健康有益，也可增加身体脂肪燃烧能力，有助于维持健康的体重，这一点可能会促进未来市场对高直链淀粉谷物的需求。由于小麦中直链淀粉和支链淀粉含量比例不同会导致不同品种的小麦有不同的工业加工用途，为了满足遗传研究和育种工作的需求，需要一种快速简洁、廉价的单粒小麦直链淀粉含量检测方法。

目前的测量方法包括市售的megazyme试剂盒测定法和比色测量法如碘-碘化钾测定法。megazyme直链淀粉/支链淀粉法是一种广为接受的技术，但是其缺点除了每个样本成本相对较高外，还在于难以测试大量样本。碘-碘化钾(i：ki)染色法最先用于马铃薯的直链淀粉测量，这是一种简单、快速的检测技术。由于在工业生产过程或者实验操作过程中需要考虑到成本以及样品数量的影响因素，所以要尽可能的在成本最低的情况下对样品进行检测，现有方法在成本控制方面有一定的制约，所以这些方法可检测的样本数量有限，且操作步骤复杂，检测人员需进行专业的训练后才可以准确地测量出结果。但这种方法检测样品的数量有限且可检测出的直链淀粉含量的范围是有限的。除了考虑化学成本之外，种子清洁、研磨和称量过程中涉及劳动操作，样品制备的成本是另一个主要的考虑因素。样品制备是所有谷物营养特性分析的共同步骤，本专利所述检测方法样本制备简单快捷。

综上所述，现有技术存在的问题是：

(1)现有的检测方法存在megazyme试剂盒法的问题是成本高。

(2)现有的检测方法存在受到人为因素制约，需要检测人员有非常熟练地技巧性，且操作步骤较为复杂。

解决上述技术问题的难度：在成本控制方面有一定的制约，所以这些方法可检测的样本数量有限，且操作步骤复杂，检测人员需进行专业的训练后才可以准确地测量出结果。

解决上述技术问题的意义：进行单粒小麦直链淀粉含量的检测，可准确检测出单粒小麦籽粒中直链淀粉含量。操作简单快捷降低了检测成本，制样成本。

技术实现要素：

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种单粒小麦直链淀粉含量检测方法。

本发明是这样实现的，一种单粒小麦直链淀粉含量检测方法，所述单粒小麦直链淀粉含量检测方法包括以下步骤：

第一步，每种小麦品种选取一粒种子称重压碎；

第二步，每毫克籽粒组织中加入10ul0.4mhcl冷藏提取过夜；

第三步，在剩余提取物中加入300μl2mnaoh调节提取液的ph并抽吸混合均匀，将混悬液在室温下保持30分钟；

第四步，用200μl1mhcl中和，再用100μl蒸馏水稀释；

第五步，抽取部分提取液至另一离心管，以1:10在离心管中稀释，取25ul稀释品于酶标板上，每个孔滴加100ul0.3％i：1.5％ki储备液，抽吸数次混匀；

第六步，静置10-15min后使用酶标仪在620nm和535nm处读取吸光度，利用测定公式1.4935*exp(2.7029)*(od620/od535)计算直链淀粉的百分比。

进一步，所述第五步中抽取部分提取液20ul至另一离心管。

进一步，所述第二步中每种样品至少三个平行样品，三个标准品对照96％直链淀粉标准品，三个空白对照，每个样品在酶标板上至少点三个孔，结果取均值。

综上所述，本发明的优点及积极效果为：本发明用于单粒小麦直链淀粉含量检测，大大降低了检测成本。本发明的单粒检测方法也可解决由于样品数量有限带来的一系列问题。本发明的检测方法样品用量很少，只需单粒籽粒即可检测，且检测步骤简捷快速，提高小麦籽粒中直链淀粉检测效率，降低检测成本。本发明是针对单一小麦籽粒的检测，样本制备简单，实验步骤简捷快速。

本发明通过对含量为96％的直链淀粉标准品的检测验证了该实验的准确性和可靠性。可准确地测定单粒小麦中直链淀粉含量，在极少的样品用量的前提下，快速简捷的测定直链淀粉含量，降低了检测成本，适用于样品量少的样品的检测。

附图说明

图1是本发明实施例提供的单粒小麦直链淀粉含量检测方法流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种单粒小麦直链淀粉含量检测方法，下面结合附图对本发明作详细的描述。

如图1所示，本发明实施例提供的单粒小麦直链淀粉含量检测方法包括以下步骤：

s101：每种小麦品种选取一粒种子称重压碎。

s102：每毫克籽粒组织中加入10ul0.4mhcl冷藏提取过夜。

s103：在剩余提取物中加入300μl2mnaoh调节提取液的ph并抽吸混合均匀，然后将混悬液在室温下保持30分钟。

s104：用200μl1mhcl中和，再用100μl蒸馏水稀释。

s105：抽取部分提取液(20ul)至另一离心管，以1:10在离心管中进一步稀释，取25ul稀释品于酶标板上，每个孔滴加100ul0.3％i：1.5％ki储备液,抽吸数次混匀。每种样品至少三个平行样品，三个标准品对照(96％直链淀粉标准品)，三个空白对照，每个样品在酶标板上至少点三个孔，结果取均值。

s106：静置10-15min后使用酶标仪在620nm和535nm处读取吸光度，利用测定公式1.4935*exp(2.7029)*(od620/od535)计算直链淀粉的百分比。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：

1.一种单粒小麦直链淀粉含量检测方法，其特征在于，所述单粒小麦直链淀粉含量检测方法包括以下步骤：

第一步，每种小麦品种选取一粒种子称重压碎；

第二步，每毫克籽粒组织中加入hcl冷藏提取过夜；

第三步，在剩余提取物中加入naoh调节提取液的ph并抽吸混合均匀，将混悬液在室温下保持；

第四步，用hcl中和，再用蒸馏水稀释；

第五步，抽取部分提取液至另一离心管，在离心管中稀释，取稀释品于酶标板上，每个孔滴加i：ki储备液，抽吸数次混匀；

第六步，静置后使用酶标仪在620nm和535nm处读取吸光度，利用测定公式1.4935*exp(2.7029)*(od620/od535)计算直链淀粉的百分比。

2.如权利要求1所述的单粒小麦直链淀粉含量检测方法，其特征在于，所述第二步中每毫克籽粒组织中加入10ul0.4mhcl冷藏提取过夜。

3.如权利要求1所述的单粒小麦直链淀粉含量检测方法，其特征在于，所述第二步中每种样品至少三个平行样品，三个标准品对照96％直链淀粉标准品，三个空白对照，每个样品在酶标板上至少点三个孔，结果取均值。

4.如权利要求1所述的单粒小麦直链淀粉含量检测方法，其特征在于，所述第三步中在剩余提取物中加入300μl2mnaoh调节提取液的ph并抽吸混合均匀，将混悬液在室温下保持30分钟。

5.如权利要求1所述的单粒小麦直链淀粉含量检测方法，其特征在于，所述第四步中用200μl1mhcl中和，再用100μl蒸馏水稀释。

6.如权利要求1所述的单粒小麦直链淀粉含量检测方法，其特征在于，所述第五步中抽取部分提取液至另一离心管，以1:10在离心管中稀释，取25ul稀释品于酶标板上，每个孔滴加100ul0.3％i：1.5％ki储备液，抽吸数次混匀。

7.如权利要求1所述的单粒小麦直链淀粉含量检测方法，其特征在于，所述第五步中抽取部分提取液20ul至另一离心管。

8.如权利要求1所述的单粒小麦直链淀粉含量检测方法，其特征在于，所述第六步中静置10-15min后使用酶标仪在620nm和535nm处读取吸光度。

技术总结
本发明属于淀粉含量检测技术领域，公开了一种单粒小麦直链淀粉含量检测方法，每种小麦品种选取一粒种子称重压碎；每毫克籽粒组织中加入HCl冷藏提取过夜；在剩余提取物中加入NaOH调节提取液的pH并抽吸混合均匀，将混悬液在室温下保持30分钟；用HCl中和，再用100μl蒸馏水稀释；抽取部分提取液至另一离心管，以1:10在离心管中稀释，取25ul稀释品于酶标板上，每个孔滴加100ul 0.3％I：1.5％KI储备液，抽吸数次混匀；静置10‑15min后使用酶标仪读取吸光度，计算直链淀粉的百分比。本发明可准确地测定单粒小麦中直链淀粉含量，快速简捷的测定直链淀粉含量，降低了检测成本。

技术研发人员：刘东莉;吴依宣;王琦琦
受保护的技术使用者：海南大学
技术研发日：2019.12.27
技术公布日：2020.05.08