一种反相高效液相色谱法检测氰基乙酰胺的方法与流程

本发明涉及检测分析技术领域，具体来说，是一种反相高效液相色谱法检测氰基乙酰胺的方法。

背景技术：

氰基乙酰胺是常用的有机合成原料，用于丙二腈、电镀液和农药氨苯蝶啶、氨蝶呤的合成。其作为重要合成中间体，脱水可生成丙二腈；溴化可得到杀菌剂2,2-二溴-2氰基乙酰胺；与三氟乙酰乙酸乙酯环合后得到取代的吡啶化合物，由此合成得到杀虫剂氟啶虫酰胺；同样，氰基乙酰胺也是杀菌剂咯菌腈的重要原料之一。其结构式如下：

氰基乙酰胺作为化工行业重要原料，目前一般用定量方法检测氰基乙酰胺剩余情况，魏泱等采用正相高效液相色谱法，使用xdb-cn柱，以乙醇和正己烷混合溶剂为流动相，对氰基乙酰胺样品进行分离和定量分析。专利cn103926333a提供一种氰乙酰胺的高效液相色谱法检测，该方法所选用的色谱条件为：色谱柱：polar-silica，粒径5μm，长250mm，直径4.6mm，孔径流动相为乙腈和一氯甲烷的混合体系；检测器为elsd，适用于氰乙酰胺工业粗品、中间体的定量检测。用正相液相色谱可以实现定量检测，但操作比较复杂，给分析工作带来不便，特别是通过液相进行监控反应状况的时候不及时、不直观，检测周期较长，不仅费时，也不能准确直观地反映反应进行的状况，同时往往因为产物或者另一种原料的极性较小，正相液相色谱不能有效跟踪。魏泱等采用高效液相反相ods柱、c18或c8进行检测，但因氰乙酰胺极性较大，在反相ods柱上保留很弱，经常与倒峰或者溶剂峰、杂质峰同时出峰，难以实现氰乙酰胺的准确定量检测。因此，迫切需要一种分离度良好、柱稳定性高的测定氰基乙酰胺的反相高效液相色谱法。

技术实现要素：

针对现有技术的上述不足，本发明提供一种反相高效液相色谱法检测氰基乙酰胺的方法，分离度良好、准确度高、柱稳定性好。

本发明提供一种反相高效色谱法检测氰基乙酰胺的方法，采用如下色谱条件：

色谱柱：agilentzorbaxeclipsexdb-cn液相色谱柱(4.6mm×250mm，5um)；

流动相：乙腈-甲酸铵可挥发性缓冲溶液；

流速：0.5ml/min；

检测波长：200nm；

柱温：40℃；

进样量：5ul；

检测器采用二极管阵列检测器。

流动相中乙腈与甲酸铵可挥发性缓冲溶液的体积比为7-15:90。随着乙腈比例的增加，出峰时间缩短。

甲酰胺可挥发缓冲溶液的ph＝6.5-7.5。维持在该ph值既可以防止氰基乙酰胺变质，又可以更好地适用于色谱性能。

流动相也可为乙腈-甲醇-甲酸铵可挥发性缓冲溶液。

流动相中甲酸铵可挥发性缓冲溶液和有机相无需预混(即提前将有机相和水相按比例混合后使用)，直接采用双泵单独进有机相和甲酸铵可挥发性缓冲溶液；若有机相为甲醇和乙腈的混合相，可先将有机相预混后再用双泵进有机相和甲酸铵可挥发性缓冲溶液。

检测波长为200nm，随着波长红移，氰基乙酰胺峰面积呈下降趋势，波长蓝移，基线会变差。

色谱条件优选为：流动相中乙腈与甲酸铵缓冲溶液体积比为10:90；流速为0.5ml/min；检测波长为200nm；柱温为40℃，进样体积为5ul。

一种反相高效色谱法检测氰基乙酰胺的方法，包括如下步骤：

(1)标样溶液的配制

准确称取含有氰基乙酰胺0.05g(精确至0.0002g)标样，置于100ml容量瓶中，加乙腈溶液90ml，经超声波振荡溶解，冷却至室温，用乙腈至刻度，摇匀备用；

(2)试样溶液的配制

准确称取含有氰基乙酰胺0.05g(精确至0.0002g)样品，置于100ml容量瓶中，加乙腈溶液90ml，经超声波振荡溶解，冷却至室温，用乙腈至刻度，摇匀备用；

(3)测定

在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻两针氰基乙酰胺响应值相对变化小于0.5％后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定；

(4)计算

将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液氰基乙酰胺峰面积分别进行平均。

agilentzorbaxeclipsexdb色谱柱(c18、c8、苯基和氰基)提供四种键合固定相，用于方法开发优化。这些色谱柱可在宽ph范围(ph＝2-9)内提供良好的峰形，eclipsexdb色谱柱可以在低ph(2-3)条件下用于方法开发，且同样的色谱柱还可以在中等ph(6-8)范围内用于方法开发，在中等ph范围内，残留硅醇基活性更大，且更容易发生相互作用，造成峰拖尾。为了克服这些相互作用，eclipsexdb色谱柱通过专利工艺进行超密键合和双封端，以覆盖尽可能多的活性硅醇基。最终碱性化合物在ph＝2-9范围内具有出色的峰形。实现高速、高分离度、分析和制备放大分离。

本发明的有益效果在于，

(1)以乙腈-甲酸铵可挥发性缓冲溶液作流动相，甲酰胺可挥发缓冲溶液的ph＝6.5-7.5，可以有效避免对色谱柱造成损坏，并有效避免流动相或溶剂在短波下的吸收对样品检测的干扰；

(2)可以实现氰基乙酰胺的有效保留，从而避免溶剂峰、倒峰、杂质峰干扰，能够实现快速准确检测；

(3)可以实现氰基乙酰胺与6.5min杂质的有效分离；

(4)所选色谱柱柱稳定性好，流动相配制简单，检测成本低；

(5)能够更好地实现氰基乙酰胺的质量控制，提高了分析的准确性，准确度高，检测的线性及范围、回收率、精密度等试验均良好。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为氰基乙酰胺标准曲线图；

图2为实施例1样品色谱图。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。

实施例1

一种反相高效液相色谱法检测氰基乙酰胺的方法，色谱条件为：色谱柱为agilentzorbaxeclipsexdb-cn液相色谱柱，(4.6mm×250mm，5um)，流动相为乙腈-甲酸铵可挥发性缓冲溶液；流速为0.5ml/min；检测波长为200nm；柱温为40℃；进样量为5ul；检测器采用二极管阵列检测器。

具体操作步骤为：

(1)标样溶液的配制

准确称取含有氰基乙酰胺0.05g(精确至0.0002g)标样，置于100ml容量瓶中，加乙腈溶液90ml，经超声波振荡溶解，冷却至室温，用乙腈至刻度，摇匀备用。

(2)试样溶液的配制

准确称取含有氰基乙酰胺0.05g(精确至0.0002g)样品，置于100ml容量瓶中，加乙腈溶液90ml，经超声波振荡溶解，冷却至室温，用乙腈至刻度，摇匀备用。

(3)测定

在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻两针氰基乙酰胺响应值相对变化小于0.5％后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。样品色谱图见图2。

(4)计算

将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液氰基乙酰胺峰面积分别进行平均。氰基乙酰胺的质量分数为x1(％)，按下式计算：

式中：

a1—标样溶液中，氰基乙酰胺面积的平均值；

a2—试样溶液中，氰基乙酰胺面积的平均值；

m1—氰基乙酰胺标样的质量，g；

m2—试样的质量，g；

p—氰基乙酰胺的质量分数，％。

检测数据如下表1：

表1相关检测数据

经计算可得，样品的质量分数为98.08％。

(5)验证

①样品的准确度分析，见表1。

表1样品准确度检测结果

②加标回收实验数据分析：

表2样品加标回收检测数据结果

尽管通过参考附图并结合优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应所述以权利要求的保护范围为准。