一种检测果蔬中福美胂残留量的高效液相色谱串联质谱法的制作方法

本发明涉及农药残留检测技术领域，具体涉及一种利用高效液相色谱串联质谱测定果蔬中福美胂残留量的方法。

背景技术：

福美胂是一种二硫代氨基甲酸酯类杀菌剂，其抗菌性强且具有长期有效性，对苹果腐烂病有特效，还可防治黄瓜白粉病、锈病霜霉病、辣椒炭疽病、梨黑星病，而且对葡萄、小麦、豌豆、苹果树等的白粉病、水稻的稻瘟病、茄子霜霉病、山楂枯梢病等作物的多种病害也有防治效果。福美胂为中等毒性，可通过呼吸道，肠胃道和皮肤吸收，排泄出体外的过程长，还会在体内转化成毒性可能更大的无机三价砷及其衍生物，使人体产生无机砷中毒症状。由于其高残留性，在果园中使用福美胂，会造成果树、环境甚至生态系统严重的砷污染。

牛鹏飞等公开了液相色谱法测定福美胂含量的检测方法和条件，但是液相色谱法存在干扰多，灵敏度不够高等缺陷。因此，有必要建立一种新的果蔬中福美胂残留量检测的方法。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种检测果蔬中福美胂残留量的高效液相色谱串联质谱法，前处理方法简单，净化效果好，能有效解决液相色谱法检测福美胂存在的外界干扰多以及灵敏度不高的问题。

为解决上述技术问题，本发明采用了以下技术方案：

一种检测果蔬中福美胂残留量的高效液相色谱串联质谱法，包括以下步骤：

s1.配制标准工作溶液：称取福美胂标准品，用乙腈配制不同浓度的标准系列溶液；

s2.提取：将待测果蔬样品制成匀浆，称取匀浆于离心管，依次加入乙腈、无水硫酸镁和氯化钠，均质处理2min后，离心分层；

s3.净化：取分层后溶液的上层有机相，置于装有psa、c18、gcb分散固相萃取剂的离心管中，涡旋震荡2min后，离心取上清液于40℃下氮吹浓缩，之后加入流动相定容，涡旋混匀后，取上清液过0.22μm膜，待检；

s4.配制基质标准工作溶液：对空白果蔬样品按照步骤s2和步骤s3的方法提取和净化，之后加入等量步骤s1配制的标准工作溶液，得到系列浓度的福美胂基质标准工作溶液；

s5.将步骤s4制备的系列浓度的福美胂基质标准工作溶液与步骤s3制备的待检样品溶液注入液相色谱仪，经串联质谱仪检测后得待测果蔬样品中福美胂的残留量。

其中，液相色谱仪参数条件为：色谱柱：silicalc-ms/mscolumn，10cm×2.1mm,3μm；流动相：0.1％甲酸水溶液+乙腈，按表1规定进行梯度洗脱：

表1流动相梯度及时间

流速：0.3ml/min；柱温40℃；进样量：20μl。

串联质谱仪参数条件为：离子源：esi，正离子模式；毛细管电压：4.0kv；离子源温度：300℃；脱溶剂气流量：540l/h；锥孔电压：100v；扫描方式：多反应监测(mrm)；离子对：314.9/88。

步骤s2中匀浆与乙腈的质量体积比为1:1，匀浆与无水硫酸镁的质量比为10:1，匀浆与氯化钠的质量比为4:1。

步骤s3中psa与上层有机相的质量体积比为1:100；c18与上层有机相的质量体积比为1:100；gcb与上层有机相的质量体积比为2:100。

步骤s2以及步骤s3中离心条件为4000r/min离心5min。

上述技术方案中提供的检测果蔬中福美胂残留量的高效液相色谱串联质谱法，果蔬样品经乙腈提取后，向提取液中加入psa(乙二胺-n-丙级硅烷)、c18、gcb(石墨化炭黑)脱除其中的有机酸、糖、脂类、色素等有机杂质，达到净化目的，本前处理溶剂使用量少，操作简便。同时高效液相色谱串联质谱测定的方法，分析速度快，准确度和精密度均能达到定量分析的要求，具有灵敏度高、重复性好，检测特异性高等优点，二者联合使用，可以有效实现果蔬中福美胂的快速定性和定量分析。

附图说明

图1为福美胂标准溶液的总离子流图；

图2为福美胂基质标准溶液的总离子流图。

具体实施方式

为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行具体说明。应当理解，以下文字仅仅用以描述本发明的一种或几种具体的实施方式，并不对本发明具体请求的保护范围进行严格限定。

本实施例检测果蔬中福美胂残留量的高效液相色谱串联质谱法，包括以下步骤：

s1.配制标准工作溶液：称取10mg福美胂标准品，用乙腈溶解并定容于20ml容量瓶中，得到浓度为500μg/ml的标准储备溶液，将标准储备溶液用流动相(0.1％甲酸水溶液+乙腈)逐级稀释，得到浓度为20、40、80、100、200ng/ml的标准系列溶液，图1为福美胂标准溶液的总离子流图；

s2.提取：将待测果蔬样品，用组织捣碎机制成匀浆，称取20g匀浆于100ml离心管中，依次加入20ml乙腈、2g无水硫酸镁和5g氯化钠，高速均质机上均质处理2min后，4000r/min离心5min，分层；

s3.净化：取分层后溶液的上层有机相10ml，置于装有0.1gpsa、0.1gc18、0.2ggcb分散固相萃取剂的离心管中，于涡旋混合器上涡旋、震荡2min，4000r/min离心5min，取5ml上清液于40℃下氮吹浓缩至近干，之后加入1ml流动相(0.1％甲酸水溶液+乙腈)定容，涡旋混匀后，取上清液过0.22μm膜，待检；

s4.配制基质标准工作溶液：对空白果蔬样品按照步骤s2和步骤s3的方法提取和净化，之后加入1ml步骤s1配制的标准工作溶液，得到系列浓度的福美胂基质标准工作溶液，图2为福美胂基质标准溶液的总离子流图；

s5.将步骤s4制备的系列浓度的福美胂基质标准工作溶液与步骤s3制备的待检样品溶液注入液相色谱仪，经串联质谱仪检测后得待测果蔬样品中福美胂的残留量。

其中，液相色谱仪参数条件为：色谱柱：silicalc-ms/mscolumn，10cm×2.1mm,3μm；流动相：0.1％甲酸水溶液+乙腈，按表1规定进行梯度洗脱：

表1流动相梯度及时间

流速：0.3ml/min；柱温40℃；进样量：20μl。

其中串联质谱仪参数条件为：离子源：esi，正离子模式；毛细管电压：4.0kv；离子源温度：300℃；脱溶剂气流量：540l/h；锥孔电压：100v；扫描方式：多反应监测(mrm)；离子对：314.9/88。

为判断方法的准确性，向空白果蔬样品中加入0.40μg的福美胂标准溶液，进行s2和s3的前处理，以hplc-ms/ms测得的福美胂选择离子峰面积，带入标准曲线。最后计算得出样品中福美胂的含量为0.361μg，即目标物的回收率为90.2％，说明此方法是准确的。

上面结合实施例对本发明的实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，对于本技术领域的普通技术人员来说，在获知本发明中记载内容后，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对其作出若干同等变换和替代，这些同等变换和替代也应视为属于本发明的保护范围。