一种同时对酒中解热镇痛类药品非法添加物定性定量检测的方法及应用与流程

本发明涉及分析化学
技术领域：
，特别是涉及一种同时对酒中解热镇痛类药品非法添加物定性、定量检测的方法及应用，具体涉及在酒中对咖啡因、阿司匹林、对乙酰氨基酚和异丙安替比林进行定性、定量分析的方法及应用。
背景技术：
：发酵酒是经粮食或者水果发酵而成，配制酒是经发酵酒与药材或者水果泡制而成，因此酒产业是农产品产业的延伸，也是农产品产业的重要支撑产业。而饮酒上头或者饮酒中毒是饮酒者最头痛的后果之一。为迎合市场上粮食酒不上头的概念，不法商家将解热镇痛药物加入到白酒中，对白酒产业冲击力比较大、负面影响严重。市面上最常见的解热镇痛药物有阿咖酚散和散利痛等，阿咖酚散主要成分为咖啡因、对乙酰氨基酚、阿司匹林(即乙酰水杨酸)，散利痛主要成分为咖啡因、对乙酰氨基酚和异丙安替比林。这两种药物与酒同服会刺激胃黏膜，大量摄入时可能会造成肝损伤。因此这类酒一定不能进入人们的餐桌上。为杜绝此种酒流通到市场上，我们应该加强此类商品的监管，但目前没有同时能对这几种物质进行定性和定量分析的方法。定性定量方法主要有薄层色谱法、紫外法、液相色谱-二极管检测器联用法、液相色谱-质谱法等。薄层色谱准确性不高，受基质影响大，精度低，低于1g/l的样品基本检测不出；紫外法准确性不高，受基质影响大，几种组分混合时基本不能用此法定性；液相色谱-二极管检测器联用法，精度不高，浓度低于1mg/l的样品基本检不出；液相色谱-质谱法在国际上应用比较广泛，但将质谱用于定性和定量分析只限于咖啡因、对乙酰氨基酚，而异丙安替比林和乙酰水杨酸没有质谱定量分析方法。因此，为了提高检验效率，实现定性、定量分析同时进行，本发明利用液相色谱-质谱联用技术，开发一种同时对咖啡因、对乙酰氨基酚、异丙安替比林和乙酰水杨酸这四种组分进行定性、定量分析的方法。技术实现要素：鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种同时对酒中解热镇痛类药品非法添加物定性定量检测的方法及应用，利用液相色谱-质谱联用技术，研究同时对四种组分进行定性、定量分析的方法，填补了国内外同时对酒中痕量咖啡因、对乙酰氨基酚、阿司匹林和异丙安替比林同时进行定性定量测定的空缺。为实现上述目的及其他相关目的，本发明一方面提供一种同时对酒中解热镇痛类药品非法添加物定性、定量检测的方法，所述非法添加物为咖啡因、对乙酰氨基酚、阿司匹林和异丙安替比林，所述方法包括如下步骤：(1)制备标准系列溶液：分别配制四种非法添加物的标准储备液，然后将标准储备液稀释为标准使用液，再用乙腈水溶液将标准使用液配制成标准系列溶液；(2)样品前处理：将酒加热后去除挥发性物质，冷却后加入乙腈补足质量，得待测样品溶液；(3)绘制标准曲线：将四种非法添加物的标准系列溶液采用液相色谱-串联质谱法进行测定，根据标准点峰面积a与其对应的标准系列溶液的浓度c绘制四种非法添加物的标准曲线，得回归方程a＝kc+b；(4)样品测定：采用液相色谱-串联质谱法对待测样品溶液进行检测，得到待测样品的峰面积a，带入步骤(3)的标准曲线回归方程中，计算得到待测样品中四种非法添加物的浓度。进一步，所述步骤(1)中，咖啡因、阿司匹林、对乙酰氨基酚和异丙安替比林的标准储备液的浓度分别为0.5±0.05mg/ml、1±0.1mg/ml、0.1±0.01mg/ml和1±0.1mg/ml。进一步，所述步骤(1)中，将标准储备液稀释100-1000倍作为标准使用液。进一步，所述步骤(1)中，配制标准储备液和标准使用液所用的溶剂为水或甲醇。可选地，所述步骤(1)中，水为超纯水，甲醇为色谱纯甲醇，乙腈水溶液为60％乙腈水溶液。进一步，所述步骤(1)中，标准系列溶液的浓度范围在10-1000ng/ml，每种非法添加物配制不少于五个点的标准系列溶液。可选地，所述步骤(1)中，咖啡因的标准系列溶液的浓度依次为：20、50、80、100、200ng/ml，对乙酰氨基酚的标准系列溶液的浓度依次为：10、20、50、80、100、200ng/ml，异丙胺替比林的标准系列溶液的浓度依次为：40、60、80、100、200ng/ml，阿司匹林的标准系列溶液的浓度依次为：400、500、600、800、1000ng/ml。进一步，所述步骤(2)中，将酒在沸水浴中蒸馏，去除挥发性物质。酒中主要的挥发性物质为乙醇。进一步，所述步骤(2)中，所述待测样品溶液经滤膜过滤后再进行检测，所述滤膜为0.25μm的微孔滤膜。进一步，所述步骤(3)和(4)中，液相色谱测定条件为：流动相：乙腈和水，梯度洗脱；液相色谱柱为zorbaxeclipseeplusec18rapidresolutionhd，2.1×50mm,1.8μm，或与其相当的液相色谱柱；柱温：20-35℃；流速：0.3ml/min；进样量：10μl。进一步，所述流动相包括10-90-％乙腈和90-10％的水，所述水中含有离子化助剂，所述离子化助剂包括甲酸和甲酸铵，所述甲酸为0.1％甲酸，所述甲酸铵为0.01mmol/l甲酸铵。进一步，所述液相色谱测定条件中，分离度大于1.5，流动相的梯度洗脱程序为：0-3min，乙腈和水的体积比为1:9-1:9；3-5.1min，乙腈和水的体积比为1:9-8:2；5.1-8min，乙腈和水的体积比为8:2-9:1；8-12min，乙腈和水的体积比为9:1-9:1。进一步，所述步骤(3)和(4)中，质谱测定条件为：质谱仪为安捷伦6460qqq和/或与其具有等同功能的检测器；离子源：esi，锥孔电压：4000kv；干燥气流量：11l/min，辅助气压力：15psi；干燥气温度：150℃。进一步，所述质谱测定条件中，各非法添加物的出峰时间、定量离子对、定型离子对、碎裂电压、碰撞电压、检测模式分别为：对乙酰氨基酚：1.2min，152-110，152-110，114v，15v，正离子；异丙安替比林：5.9min，231-189，231-189，92v，17v，正离子；和/或，异丙安替比林：5.9min，231-189，231-112，21v，15v，正离子；咖啡因：2.0min，195-138，195-138，100v，20v，正离子；和/或，咖啡因：2.0min，195-138，195-110，100v，20v，正离子；阿司匹林：4.9min，179-137，179-137，45v，5v，负离子。本发明另一方面提供如上所述的同时对酒中解热镇痛类药品非法添加物定性定量检测的方法在白酒中解热镇痛类药品非法添加物检测上的应用。如上所述，本发明的同时对酒中解热镇痛类药品非法添加物定性定量检测的方法及应用，具有以下有益效果：本发明公开了一种对白酒中咖啡因、阿司匹林、对乙酰氨基酚和异丙安替比林四种非法添加物同时进行定性、定量检测的液相色谱-串联质谱分析方法。本方法是用超高效液相色谱仪作为分离设备，三重四级杆质谱仪作为检测器，利用质谱定性离子对进行定性分析，定量离子对外标法进行定量检测。本方法前处理简便、专属性强、灵敏度高，能同时对咖啡因、阿司匹林、对乙酰氨基酚和异丙安替比林四种物质进行定性和定量分析，能应用于食品安全监管中，以预防这四类解热镇痛类药品在酒中的非法添加。附图说明图1显示为本发明实施例中咖啡因的标准曲线图。图2显示为本发明实施例中乙酰水杨酸的标准曲线图。图3显示为本发明实施例中对乙酰氨基酚的标准曲线图。图4显示为本发明实施例中异丙安替比林的标准曲线图。图5显示为本发明实施例中不同浓度咖啡因标准系列溶液的提取离子色谱图。图6显示为本发明实施例中不同浓度乙酰水杨酸标准系列溶液的提取离子色谱图。图7显示为本发明实施例中不同浓度对乙酰氨基酚标准系列溶液的提取离子色谱图。图8显示为本发明实施例中不同浓度异丙安替比林标准系列溶液的提取离子色谱图。图9显示为本发明实施例中咖啡因的质谱图。图10显示为本发明实施例中乙酰水杨酸的质谱图。图11显示为本发明实施例中对乙酰氨基酚的质谱图。图12显示为本发明实施例中异丙安替比林的质谱图。图13显示为本发明实施例中空白样品的总离子流色谱图。图14显示为本发明实施例中阴性样品的总离子流色谱图。图15显示为本发明实施例中阴性加标样品的总离子流色谱图。图16显示为本发明实施例中标准样品的总离子流色谱图。具体实施方式以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。本发明提供了一种同时对酒中解热镇痛类药品非法添加物定性、定量检测的方法，所述非法添加物为咖啡因、对乙酰氨基酚、阿司匹林和异丙安替比林，具体步骤如下：1、配制标准系列溶液(1)制备咖啡因、阿司匹林、对乙酰氨基酚和异丙安替比林的标准储备液，具体稀释溶剂、制备体积、浓度见下表1：表1储备液配制表(2)用甲醇将步骤(1)中的标准储备液稀释1000倍，作为标准使用液。(3)用60％乙腈水溶液，将步骤(2)中的标准使用液配制浓度在10-1000ng/l范围内的标准系列溶液，标准点不少于5个，具体分别为：咖啡因：20、50、80、100、200ng/ml，对乙酰氨基酚：10、20、50、80、100、200ng/ml，异丙胺替比林：40、60、80、100、200ng/ml，阿司匹林：400、500、600、800、1000ng/ml。(4)将标准系列溶液用0.25μm的滤膜过滤后待用。2、样品前处理将待测样品在沸水浴中蒸馏20min，去除挥发性物质(乙醇)，冷却后加入乙腈补足质量，用0.25μm的微孔滤膜过滤后待测。3、液相色谱-串联质谱仪测定(1)液相色谱测定条件流动相：乙腈和水(0.01mmol/l甲酸铵，0.1％甲酸)，梯度洗脱，洗脱顺序见下表2；柱温：20-35℃；流速：0.3ml/min；进样量：10μl。表2梯度洗脱顺序时间(min)乙腈水(0.01mmol/l甲酸铵,0.1％甲酸)010％90％310％90％5.180％20％890％10％1290％10％(2)质谱测定条件质谱仪型号：安捷伦6460qqq或等同者检测器；离子源：esi，锥孔电压：4000kv，干燥气流量：11l/min，辅助气压力：15psi；干燥气温度：150℃；定性定量离子对及检测模式见下表3。表3质谱检测条件表(3)绘制标准曲线：将各非法添加物的标准系列溶液分别注入液相色谱-串联质谱仪中，根据标准点峰面积(a)与其对应浓度(c)绘制标准曲线，得回归方程a＝kc+b，b为纵坐标。咖啡因、阿司匹林、对乙酰氨基酚和异丙安替比林的标准曲线分别如图1、图2、图3和图4所示。咖啡因的标准曲线为：a咖啡因＝15335c+12.227，r2＝0.9995；乙酰水杨酸的标准曲线为：a乙酰水杨酸＝32.865c-30.175，r2＝0.9985；(乙酰水杨酸的医用药物名称即是阿司匹林)对乙酰氨基酚的标准曲线为：a对乙酰氨基酚＝9.4806c+421.25，r2＝0.9974；异丙安替比林的标准曲线为：a异丙安替比林＝8.8559c+57.596，r2＝0.9985。咖啡因、阿司匹林、对乙酰氨基酚和异丙安替比林的提取离子色谱图分别如图5、图6、图7和图8所示。咖啡因、阿司匹林、对乙酰氨基酚和异丙安替比林的质谱图分别如图9、图10、图11和图12所示。(4)采用液相色谱-串联质谱法对待测样品溶液进行检测，得到待测样品的峰面积a，将待测样品的峰面积a带入标准曲线回归方程中，即可得到待测样品中四种非法添加物的浓度。实施例1采用本发明方法分别对12种香型白酒中对乙酰氨基酚、阿司匹林、咖啡因、异丙安替比林进行添加回收实验，12种香型白酒分别为浓香型、清香型、酱香型、凤香型、豉香型、兼香型、药香型、特香型、米香型、芝香型、馥郁香型、老白干，各种香型实验用白酒及生产厂家如表13所示：表13实验用白酒统计表实施例2回收率实验精密称取12个阴性样品20g，吸取一定体积的标准溶液加入到样品中，按照样品的前处理方法处理，测定，然后计算样品添加的回收率，并以相对标准偏差表示方法的精密度。样品中加入的标准溶液后的浓度(加标浓度)及加标体积如表4-7所示，回收率及其相对标准偏差如表8-11所示。表4咖啡因标准溶液浓度：10μg/ml加标浓度80ng/g120ng/g200ng/g加入标液体积160μl240μl400μl表5阿司匹林(乙酰水杨酸)标准溶液浓度：800μg/ml加标浓度4μg/g8μg/g10μg/g加入标液体积100μl200μl250μl表6对乙酰氨基酚标准溶液浓度：10μg/ml加标浓度50ng/g80ng/g100ng/g加入标液体积100μl160μl200μl表7异丙安替比林标准溶液浓度：10μg/ml加标浓度80ng/g120ng/g200ng/g加入标液体积160μl240μl400μl表8咖啡因的加标回收率加标浓度80ng/g120ng/g200ng/g回收率92.1～110.7％95.3～107.0％96.7～105.1％相对标准偏差85.7～107.5％86.8～105.8％89.6～104.3％表9阿司匹林(乙酰水杨酸)的加标回收率加标浓度4μg/g8μg/g10μg/g回收率83.8～116.7％89.6～109.0％90.7～107.3％相对标准偏差95.7～102.5％96.2～104.1％95.6～103.1％表10对乙酰氨基酚的加标回收率加标浓度50ng/g80ng/g100ng/g回收率83.5～114.7％88.4～111.2％90.7～105.3％相对标准偏差83.2～109.1％85.7～107.5％88.3～105.6％表11异丙安替比林的加标回收率加标浓度80ng/g120ng/g200ng/g回收率94.1～109.1％95.3～106.8％96.2～105.4％相对标准偏差91.7～104.7％92.8～103.6％93.6～102.8％实施例3最低检测限试验将标准溶液用60％乙醇水溶液稀释测定，当待测组分的峰高为3倍信噪比时对应的浓度即为该组分的最低检测限，结果如表12所示。表12各待测组分的最低检测限待测组分咖啡因乙酰水杨酸对乙酰氨基酚异丙安替比林最低检测限50ng/ml1μg/ml20ng/ml40ng/ml上述实验结果表明，经过本方法处理后的这12种香型酒的阴性样品总离子流色谱图(如图14所示)与空白样品的总离子流色谱图(如图13所示)相比都没有出现明显的杂峰；而阴性加标样品的总离子流色谱图(如图15所示)与空白样品的总离子流色谱图(如图13所示)相比有明显的峰增加，且增加峰的保留时间和质谱图与标准样品的总离子流色谱图(如图16所示)中目标峰的保留时间和质谱图一致。并且，从实施例2的回收率实验可以看出，本方法具有良好的回收率和相对标准偏差(见表8-11)，这说明使用本发明的方法可以快速有效的进行白酒中对乙酰氨基酚、阿司匹林、咖啡因、异丙安替比林定性定量的测定。综上所述，本发明提供了一种能对白酒中咖啡因、阿司匹林、对乙酰氨基酚和异丙安替比林四种非法添加物同时进行定性、定量检测的液相色谱-串联质谱分析方法。本方法是用超高效液相色谱仪作为分离设备，三重四级杆质谱仪作为检测器，利用质谱定性离子对进行定性分析，定量离子对外标法进行定量检测。本方法前处理简便、专属性强、灵敏度高，能同时对咖啡因、阿司匹林、对乙酰氨基酚和异丙安替比林四种物质进行定性和定量分析，能应用于食品安全监管中，以预防这四类解热镇痛类药品在酒中的非法添加。上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属
技术领域：
中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。当前第1页12