一种鸡蛋中丁香菌酯含量的检测方法与流程

1.本发明涉及化学检测技术领域，尤其涉及一种鸡蛋中丁香菌酯含量的检测方法。


背景技术：

2.丁香菌酯，是由沈阳化工研究院研制，吉林省八达农药有限公司开发的一款高端的杀菌剂，属甲氧基丙烯酸酯类，是一种保护性杀菌剂，同时兼有一定的治疗作用。其具有广谱、低毒、高效、安全的特点，有免疫、预防、治疗、增产增收作用。对苹果树腐烂病特效，是全国防治腐烂病最具权威的药剂。杀菌谱广，对瓜果、蔬菜、果树霜霉病、晚疫病、黑星病、炭疽病、叶霉病有效；同时对轮纹病、炭疽病，棉花枯萎病，水稻瘟疫病、纹枯病，小麦根腐病，玉米小斑病亦有效。
3.目前，丁香菌酯分析测试的相关研究较少，未见关于鸡蛋中丁香菌酯含量的检测方法。然而鸡蛋作为农场生产线的产物之一，有必要对流向市场的鸡蛋检测各类化学药剂的残留量。


技术实现要素：

4.本发明目的在于，提供一种鸡蛋中丁香菌酯含量的检测方法。
5.具体通过以下技术方案实现：
6.一种鸡蛋中丁香菌酯含量的检测方法，包括：将待测样品与溶剂混合，加入萃取盐包进行冷冻离心处理，获得上层清液；将所述上层清液进行净化处理，得到净化液；将所述净化液进行水浴氮气吹干处理，并用初始流动相定容，得到浓缩液；将所述浓缩液过有机滤膜，得到待测样液；通过液相色谱质谱仪检测所述待测样液中丁香菌酯的浓度，以计算待测样品中丁香菌酯的含量。
7.优选地，所述将待测样品与溶剂混合，加入萃取盐包进行冷冻离心处理，获得上层清液，包括：按照每1g待测样品与1ml水和3ml乙腈混合的比例，加入萃取盐包进行冷冻离心后，每1g待测样品收集1ml上层清液。
8.优选地，所述冷冻离心处理，在8000r/min的转速下离心2min。
9.优选地，所述萃取盐包包括无水硫酸镁、氯化钠、柠檬酸钠、柠檬酸氢二钠和psa.
10.优选地，所述萃取盐包中的无水硫酸镁、氯化钠、柠檬酸钠、柠檬酸氢二钠和psa按照质量比10：2：2：1：1混合而成。
11.优选地，所述将所述上层清液进行净化处理，得到净化液，包括：将所述上层清液转移到已活化的固相萃取柱进行净化处理，得到净化液。
12.优选地，所述水浴氮气吹干处理采用40℃恒温水浴。
13.优选地，所述将所述净化液进行水浴氮气吹干处理，并用初始流动相定容，得到浓缩液，包括：每1g待测样品在进行处理得到净化液后进行水浴氮气吹干处理，用初始流动相定容至0.2ml，得到0.2ml浓缩液。
14.优选地，所述有机滤膜的孔径为0.22μm。
15.优选地，所述通过液相色谱质谱仪检测所述待测样液中丁香菌酯的浓度，以计算待测样品中丁香菌酯的含量，包括：所述液相色谱质谱仪检测中，液相条件为流动相包括0.1％甲酸水和乙腈；色谱柱为c18(2.6μm，21mm*100mm)；流速为0.4ml/min；柱温为40℃；质谱条件为电喷雾离子源(esi)；正离子模式；气帘气为30psi；喷撞气为9psi；离子化电压为+4500v；喷雾气为55psi；辅助加热气为55psi；去溶剂气温度为550℃。
16.本发明的实施例，具有如下有益效果：
17.本发明提供了一种鸡蛋中丁香菌酯含量的检测方法，包括：将待测样品与溶剂混合，加入萃取盐包进行冷冻离心处理，获得上层清液；将所述上层清液进行净化处理，得到净化液；将所述净化液进行水浴氮气吹干处理，并用初始流动相定容，得到浓缩液；将所述浓缩液过有机滤膜，得到待测样液；通过液相色谱质谱仪检测所述待测样液中丁香菌酯的浓度，以计算待测样品中丁香菌酯的含量。本方法解决了鸡蛋中丁香菌酯含量的检测问题，能够满足鸡蛋中相关品种残留量限值要求，为丁香菌酯含量的检测提供技术支撑。
附图说明
18.为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
19.图1是本发明某一实施例提供的鸡蛋中丁香菌酯含量的检测方法的流程示意图；
20.图2是本发明某一实施例中检测的丁香菌酯标准品的液相图谱；
21.图3是本发明某一实施例中检测的丁香菌酯标准品的质谱图。
具体实施方式
22.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
23.请参阅图1，图1是本发明某一实施例提供的鸡蛋中丁香菌酯含量的检测方法的流程示意图。本发明实施例提供的一种鸡蛋中丁香菌酯含量的检测方法，包括：
24.步骤s110，将待测样品与溶剂混合，加入萃取盐包进行冷冻离心处理，获得上层清液。
25.在本实施例中，按照每1g待测样品与1ml水和3ml乙腈混合的比例，加入萃取盐包进行冷冻离心后，每1g待测样品收集1ml上层清液。冷冻离心处理，在8000r/min的转速下离心2min。萃取盐包包括无水硫酸镁、氯化钠、柠檬酸钠、柠檬酸氢二钠和psa。萃取盐包中的无水硫酸镁、氯化钠、柠檬酸钠、柠檬酸氢二钠和psa按照质量比10：2：2：1：1混合而成。
26.步骤s120，将上层清液进行净化处理，得到净化液。
27.在本实施例中，净化处理是将固相萃取柱置于固相萃取仪上，加入10ml乙腈进行活化，再将所述上层清液转移到固相萃取柱进行净化处理，得到净化液。
28.步骤s130，将净化液进行水浴氮气吹干处理，并用初始流动相定容，得到浓缩液。
29.在本实施例中，根据溶剂和目标物的挥发性，水浴氮气吹干处理采用40℃恒温水
浴。每1g待测样品在进行处理得到净化液后进行水浴氮气吹干处理，用初始流动相定容至0.2ml，得到0.2ml浓缩液。
30.步骤s140，将浓缩液过有机滤膜，得到待测样液。
31.在本实施例中，有机滤膜的孔径为0.22μm，以过滤溶剂中孔径较大的杂质。
32.步骤s150，通过液相色谱质谱仪检测待测样液中丁香菌酯的浓度，以计算待测样品中丁香菌酯的含量。
33.在本实施例中，液相色谱质谱仪检测中，液相条件为流动相包括0.1％甲酸水和乙腈；色谱柱为c18(2.6μm，21mm*100mm)；流速为0.4ml/min；柱温为40℃；质谱条件为电喷雾离子源(esi)；正离子模式；气帘气为30psi；喷撞气为9psi；离子化电压为+4500v；喷雾气为55psi；辅助加热气为55psi；去溶剂气温度为550℃。
34.在一具体实施方式中，需要提前配置标准储备液。准确称取0.01g丁香菌酯标准品(cas:850881
‑
70
‑
8，纯度≥99％)于10ml容量瓶，加入乙腈溶解后定容至刻度。配制成浓度为1000μg/ml的标准储备液。标准储备液需要于
‑
18℃保存，有效期6个月。标准工作液：准确移取0.1ml的标准储备液于10ml容量瓶，用乙腈定容，配制成浓度为10μg/ml的标准中间液，于
‑
18℃保存，有效期1个月。用标准工作液配制成浓度为10、20、50、100、200ng/ml的工作曲线。以定量离子峰面积为纵坐标，标准物质浓度为横坐标绘制曲线，线性方程为y＝7030.91828x+27630.63820，r＝0.99982。请参阅图2和图3，图2和图3分别是是本发明某一实施例中检测的丁香菌酯标准品的液相图谱(图2)和质谱图(图3)。
35.在本实施例中，用到的仪器包括高效液相色谱质谱仪、超高速冷冻离心机、氮吹仪、涡旋振荡器、电子天平(精度0.0001g)、固相萃取仪、固相萃取柱和孔径0.22μm的有机滤膜。
36.其中，液相色谱质谱仪的工作原理是指样品中各组分经高效液相色谱仪分离后先后经适用的接口导入质谱仪中，被离子源电离成具有一定质荷比的碎片离子，由质量分析器分离而被检测，最后由计算机处理得到碎片离子组成的单一组分的质谱图，再由质谱图鉴定出该组分的结构组成。液相色谱和质谱联机的关键是选用适合的接口，即要将大气压条件下的色谱分离和气化与质谱高真空条件下的电离完美连接。其中esi和apci接口是现有液相色谱
‑
质谱联用仪器中最为普遍的接口。液相色谱
‑
质谱联用结合了液相色谱仪有效分离热不稳性及高沸点化合物的分离能力与质谱仪很强的组分鉴定能力。
37.为了获得待测样液，首先用电子天平称取5g待测样品于离心管中，依次加入5ml水、15ml乙腈和萃取盐包(5g无水硫酸镁、1g氯化钠、1g柠檬酸钠、0.5g柠檬酸氢二钠和500mgpsa)，使用涡旋振荡器涡旋振荡5min后，置于超高速冷冻离心机中在8000r/min转速下冷冻离心2min，收集5ml上层清液；将上层清液转移到已活化的固相萃取柱，得到净化液；采用氮吹仪将净化液于40℃水浴下缓慢氮气吹干，用初始流动相定容至1ml，过孔径0.22μm的有机滤膜，得到待测样液。
38.用高效液相色谱质谱仪分析待测样液中丁香菌酯的浓度，请参阅表1和表2，仪器条件如下：
39.液相条件：
40.流动相：a：0.1％甲酸水；b：乙腈。色谱柱：c18(2.6μm,21mm*100mm)流速：0.4ml/min进样体积：2ul柱温：40℃。
41.表1液相条件对应表
42.时间/min流动相a：0.1％甲酸水流动相b：乙腈090％10％0.590％10％180％20％2.510％90％410％90％4.190％10％590％10％
43.质谱条件：
44.电离模式：esi；正离子模式；气帘气(cur)：30.0psi；喷撞气(cad)：9.0；离子化电压(is)：正离子4500v；喷雾气(gsi)：55psi；去溶剂气温度(tem)：550℃；辅助加热气(gsi)：55psi。
45.表2质谱条件对应表
[0046][0047]
按如下公式计算丁香菌酯含量：
[0048][0049]
其中，x为样品中丁香菌酯的含量，单位采用毫克每千克；c为测定液中丁香菌酯的浓度，单位采用纳克每毫升；v为定容体积，单位采用毫升；m为待测样品称样量，单位采用克；f为稀释因子。
[0050]
基于前述具体实施方式，进行鸡蛋样品检测，称取5份鸡蛋样品按照上述待测样液获取过程和仪器条件进行测定，检测数据如表3所示。
[0051]
表3鸡蛋样品检测
[0052]
[0053][0054]
基于前述具体实施方式，进行精密度和回收率检测，称取10份鸡蛋样品，准确加入相同体积的标准溶液，按照上述前处理过程和仪器条件进行测定，检测数据和回收率如表4所示。
[0055]
表4鸡蛋中丁香菌酯含量的检测数据和回收率
[0056]
样品添加浓度(ng/ml)测定浓度(ng/ml)回收率(％)鸡蛋
‑
150.0048.3296.64鸡蛋
‑
250.0051.04102.08鸡蛋
‑
350.0049.1398.26鸡蛋
‑
450.0049.0898.16鸡蛋
‑
550.0050.02100.04鸡蛋
‑
650.0048.9297.84鸡蛋
‑
750.0049.2198.42鸡蛋
‑
850.0048.2196.42鸡蛋
‑
950.0048.7797.54鸡蛋
‑
1050.0049.1298.24
[0057]
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。