一种替比培南匹酯颗粒剂中高分子聚合物的检测方法与流程

1.本发明涉及制剂分析技术领域，具体涉及一种替比培南匹酯颗粒剂中高分子聚合物的检测方法。


背景技术：

2.替比培南匹酯，化学名为(+)-(4r，5s，6s)-6-[(lr)_羟基乙基]-4-甲基-7-氧代-3[[1-(2-噻唑啉-2-基)-3-氮杂环丁烷基]硫]-1-氮杂双环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸(2，2-二甲基-1-氧代丙氧基)甲酯，属碳青霉烯类抗生素，替比培南匹酯最早由美国辉瑞公司研发，替比培南匹酯细粒剂由日本明治公司研制，于2009年2月获得日本批准，并于2009年4月上市。替比培南匹酯颗粒组成为：主料替比培南匹酯，辅料为微晶纤维素，羟丙基纤维素，蔗糖，色素等。替比培南匹酯抗菌谱广，对大多数临床分离的菌株，替比培南均表现出比青霉素系列及头孢系列更强的抗菌性，而与其他注射用的碳青霉烯类抗生素相比，替比培南也表现出同程度或更强的抗菌效果。特别是针对引起儿童感染主要原因的耐青霉素肺炎链球菌、耐红霉素肺炎链球菌及流感嗜血杆菌表现出极强的抗菌效果。国内对抗生素的高分子杂质的控制非常重视，为此通过合理的手段检测并控制此类高分子聚合物具有重要的现实意义。
[0003]
目前中国药典多数对水溶性好的抗生素的聚合物控制的比较多，像替比培南匹酯这种脂溶性的抗生素的聚合物的检测一般控制较少，虽然分子排阻色谱法用于高分子聚合物的检测已被公认，但并不是一个色谱条件对于所有的抗生素都适合，且聚合物一般在制剂中检测的比较少，多数是辅料对其有干扰，所以寻找一个专属性强的色谱条件用于替比培南匹酯颗粒的检测，有利于更好的控制替比培南匹酯颗粒中高分子聚合物的含量，从而更好的控制替比培南匹酯颗粒的质量。


技术实现要素：

[0004]
本发明的目的是建立一种测定替比培南匹酯颗粒剂中高分子聚合物的检测方法，可以更好的控制替比培南匹酯颗粒剂中替比培南匹酯引起的高分子聚合物，排除辅料的干扰，能够更好的控制替比培南匹酯颗粒剂的质量。该方法具有专属性好，易操作，灵敏度高，峰型好的特点，替比培南酯和其前面的聚合物能达到很好的分离效果好且分析方法稳定。
[0005]
为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验，最终获得如下技术方案：
[0006]
一种利用分子排阻色谱法检测替比培南匹酯颗粒剂中高分子聚合物的方法，所述的分子排阻色谱法的色谱条件为：
[0007]
色谱柱：苯乙烯二乙烯基苯类为填料的色谱柱tskgel g2000hhr
[0008]
柱温：20-40℃；
[0009]
检测器为紫外检测器，检测波长300-320nm；流动相流速为0.2-1.0ml/min。
[0010]
流动相为二氯甲烷/甲醇，乙酸乙酯/甲醇，正己烷/甲醇中一种；
[0011]
流动相以体积比计，所述二氯甲烷或乙酸乙酯或正己烷：甲醇＝95-100：0-5，等度
洗脱；
[0012]
优选的，所述流动相为正已烷/甲醇；
[0013]
优选的，流动相以体积比计，所述正已烷：甲醇＝97：3，等度洗脱
[0014]
优选的，所述色谱条件中检测波长为310nm，柱温为35℃，流动相的流速为0.8ml/min。
[0015]
优选的，所述色谱条件中色谱柱为tskgel g2000hhr 7.8
×
300mm，5μm。
[0016]
具体的，本发明所述液相色谱法为：
[0017]
柱温：35℃；
[0018]
流动相为正已烷：甲醇＝97：3(v/v)；
[0019]
色谱柱为tskgel g2000hhr 7.8
×
300mm，5μm；
[0020]
检测波长为310nm；
[0021]
流动相流速为0.8ml/min；
[0022]
本发明所述的一种利用分子排阻色谱法检测替比培南匹酯颗粒剂中高分子聚合物的方法，具体操作步骤如下所述：
[0023]
a、取替比培南匹酯对照品适量，先用甲醇少量使溶解，再用流动相稀释制成每1ml含替比培南酯1μg的对照品溶液；
[0024]
b、取替比培南匹酯颗粒适量，研细，先用甲醇少量使溶解，再用流动相稀释制成0.1mg/ml的供试品溶液；
[0025]
c、分别取对照品和供试品溶液50μl注入高效液相色谱仪，按照以下色谱条件完成替比培南匹酯颗粒剂中高分子聚合物的分析检测；
[0026]
色谱条件为：
[0027]
柱温：35℃；
[0028]
流动相为正已烷：甲醇＝97：3(v/v)；
[0029]
色谱柱为tskgel g2000hhr 7.8
×
300mm，5μm；
[0030]
检测波长为310nm；
[0031]
流动相流速为0.8ml/min；
[0032]
本发明涉及的分析检测方法，可以有效地检测替比培南匹酯颗粒剂中高分子聚合物的含量，而且该方法分离度高，重复性及耐用性好，检测限低，操作简单，结果稳定可靠，从而可用于替比培南匹酯颗粒剂的质量控制，为最终成品的质量提供有效保障。
附图说明
[0033]
图1为样品溶液的hplc图谱
[0034]
图2为空白溶剂的hplc图谱
[0035]
图3为空白辅料的hplc图谱
[0036]
图4为定量限溶液hplc图谱
[0037]
图5为对照品溶液hplc图谱
具体实施方式
[0038]
以下通过实施例形式再对本发明的内容做进一步详细说明，但不应就此理解为本
发明上述主题范围内仅限于以下实施例。在不脱离本发明上述技术前提下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的相应替换或变更的修改，均包括在本发明内。
[0039]
实施例1
[0040]
色谱柱选择
[0041]
1.仪器与条件：waters液相色谱系统，2998检测器，色谱柱：tskgel g2000hhr7.8
×
300mm，5μm；检测波长：310nm；以正已烷：甲醇97：3为流动相，等度洗脱，柱温35℃，流速为0.8ml/min，进样量为50μl。
[0042]
2.试验步骤：
[0043]
取替比培南匹酯颗粒适量，研细，精密称取适量(约相当于替比培南酯5mg)，置50ml容量瓶中，先加甲醇少量冰浴超声使溶解，用流动相定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，按照上述色谱条件测定，记录色谱图。
[0044]
色谱图显示，替比培南酯的保留时间为19.563min，其与前面聚合物的峰分离度为2.88，符合要求。色谱图见图1。
[0045]
专属性试验
[0046]
1.空白溶剂干扰试验
[0047]
取少量甲醇，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，注入液相色谱仪，按照实施例1中色谱条件测定，记录色谱图，hplc图谱见图2。
[0048]
由图2可见，空白溶剂在31.534min有溶剂峰，但是不干扰聚合物的检测。
[0049]
2.辅料干扰试验
[0050]
取替比培南匹酯颗粒剂辅料适量，先加少量甲醇冰浴超声使溶解，用流动相制成约0.1mg/ml的溶液，按照实施例1色谱条件测定，记录色谱图，hplc图谱见图3。
[0051]
由图3可知，辅料不出峰，不干扰聚合物的检测。
[0052]
定量限和检测限
[0053]
1.定量限：取替比培南匹酯对照品适量，先加甲醇少量使溶解，用流动相稀释配制成约0.05μg/ml的溶液，作为定量限溶液，按照实施例1色谱条件测定，记录色谱图，hplc图谱见图4。
[0054]
由图4可知，替比培南酯的保留时间为20.138min，s/n为24.5。
[0055]
2)检测限：取替比培南酯对照品适量，先加甲醇少量使溶解，用流动相稀释配制成约0.015μg/ml的溶液，作为检测限溶液，按照实施例1色谱条件测定，记录色谱图。
[0056]
由图谱可知，替比培南酯的保留时间为20.132min，s/n为8.6。
[0057]
线性与范围
[0058]
取替比培南匹酯对照品适量，先加甲醇适量使溶解，再用流动相配制成0.053μg/ml、0.21μg/ml、0.53μg/ml、0.85μg/ml、1.06μg/ml、2.12μg/ml系列浓度的溶液，分别进样，按照实施例1色谱条件测定，记录色谱图，得线性方程。
[0059]
表1替比培南匹酯峰面积与浓度曲线关系表
[0060][0061]
由表1可知，替比培南匹酯在0.053-2.12μg/ml范围内，浓度和峰面积线性关系良好。
[0062]
进样精密度
[0063]
1.取替比培南匹酯对照品适量，先加甲醇适量使溶解，再用流动相配制成约1.0μg/ml浓度的溶液，重复进样6次，按照实施例1色谱条件测定，记录色谱图。色谱图见图5。结果统计见表2。
[0064]
表2替比培南匹酯进样重复性结果表
[0065][0066]
由表2可知，连续进样6次，替比培南匹酯峰面积的rsd为0.58％，保留时间rsd为0.03％，符合要求。
[0067]
2.取替比培南匹酯对照品适量，先加甲醇适量使溶解，用流动相配制成0.21μg/ml、1.06μg/ml、2.12μg/ml浓度的溶液，每个浓度配制3份，按照实施例1色谱条件测定，记录色谱图，量取峰面积，并计算相对标准偏差。结果见表3。
[0068]
表3替比培南匹酯精密度结果表
[0069]
[0070]
由表3可知：在低、中、高三个浓度下，峰面积的rsd分别为0.40％、0.78％、0.09％，峰面积rsd均小于2.0％，说明本法精密度良好。
[0071]
耐用性流速变化
[0072]
1、仪器与条件：waters液相色谱系统，2998检测器，色谱柱为tskgel g2000hhr7.8
×
300mm，5μm，流动相为正已烷：甲醇97：3，柱温为35℃，检测波长为310nm，流速0.8ml/min。
[0073]
测定：取替比培南匹酯颗粒适量，研细，加甲醇少量冰冷超声使溶解，用流动相稀释配制成0.1mg/ml的溶液，精密量取50μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0074]
在此条件下，替比培南酯的保留时间为19.563min，替比培南酯与其聚合物峰分离度为2.88，符合要求。
[0075]
2.仪器与条件：waters液相色谱系统，2998检测器，色谱柱为tskgel g2000hhr7.8
×
300mm，5μm，流动相为正已烷：甲醇97：3，柱温为35℃，检测波长为310nm，流速0.4ml/min。
[0076]
测定：取替比培南匹酯颗粒适量，研细，加甲醇少量冰冷超声使溶解，用流动相稀释配制成0.1mg/ml的溶液，精密量取50μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0077]
在此条件下，替比培南酯的保留时间为40.567min，替比培南酯与其聚合物峰分离度为2.12，符合要求。
[0078]
耐用性柱温变化
[0079]
1.仪器与条件：waters液相色谱系统，2998检测器，色谱柱为tskgel g2000hhr7.8
×
300mm，5μm，流动相为正已烷：甲醇97：3，柱温为30℃，检测波长为310nm，流速0.8ml/min。
[0080]
测定：取替比培南匹酯颗粒适量，研细，加甲醇少量冰冷超声使溶解，用流动相稀释配制成0.1mg/ml的溶液，精密量取50μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0081]
在此条件下，替比培南酯的保留时间为20.165min，替比培南酯与其聚合物峰分离度为2.25，符合要求。
[0082]
2.仪器与条件：waters液相色谱系统，2998检测器，色谱柱为tskgel g2000hhr7.8
×
300mm，5μm，流动相为正已烷：甲醇97：3，柱温为40℃，检测波长为310nm，流速0.8ml/min。
[0083]
测定：取替比培南匹酯颗粒适量，研细，加甲醇少量冰冷超声使溶解，用流动相稀释配制成0.1mg/ml的溶液，精密量取50μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0084]
在此条件下，替比培南酯的保留时间为18.526min，替比培南酯与其聚合物峰分离度为3.01，符合要求。
[0085]
耐用性检测波长变化
[0086]
1.仪器与条件：waters液相色谱系统，2998检测器，色谱柱为tskgel g2000hhr7.8
×
300mm，5μm，流动相为正已烷：甲醇97：3，柱温为35℃，检测波长为315nm，流速0.8ml/min。
[0087]
测定：取替比培南匹酯颗粒适量，研细，加甲醇少量冰冷超声使溶解，用流动相稀释配制成0.1mg/ml的溶液，精密量取50μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0088]
在此条件下，替比培南酯的保留时间约为19.625min，替比培南酯与其聚合物峰分离度为2.70，符合要求。
[0089]
6)仪器与条件：waters液相色谱系统，2998检测器，色谱柱为tskgel g2000hhr7.8
×
300mm，5μm，流动相为正已烷：甲醇＝97：3，柱温为35℃，检测波长为305nm，流速0.8ml/min。
[0090]
测定：取替比培南匹酯颗粒适量，研细，加甲醇少量冰冷超声使溶解，用流动相稀
释配制成0.1mg/ml的溶液，精密量取50μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0091]
在此条件下，替比培南酯的保留时间为19.553min，替比培南酯与其聚合物峰分离度为2.67，符合要求。
[0092]
由上述试验结果可知：利用本发明的检测方法可以有效的检测替比培南匹酯颗粒剂中聚合物的含量，空白辅料与空白溶剂对其检测均无干扰，因此本方法可用于替比培南匹酯颗粒剂的质量控制。