一种聚乙烯吡咯烷酮含量的测试方法与流程

本发明属于检测技术领域，尤其涉及一种聚乙烯吡咯烷酮含量的测试方法。

背景技术：

聚乙烯吡咯烷酮(pvp)是一种水溶性高分子物质，由于其具有良好的可溶性以及出色的生物相容性，因此广泛应用于医疗卫生、化妆品、食品加工、表面活性剂等其它方面。

2017年10月27日，世界卫生组织将pvp列入3类致癌物清单中。目前没有特别充分的实验性证据或理论机理表明pvp对人体有致癌性。国内外一些课题组研究表明pvp在使用过程中存在潜在的风险。例如中科大王玉珍课题组研究表明pvpk30对hela细胞产生毒性，实验表明pvpk30毒性主要依赖于作用浓度和作用时间。strehler等人将人的精子放入含8.3％pvp的hepes缓冲溶液中孵化，结果表明pvp造成精子亚显微结构的变化。kuleshova等人将小鼠胚胎放入含30％pvp的pbs缓冲溶液中孵化，实验结果表明pvp处理的胚胎都不能发育成膨大的胚泡，对照组胚胎能够正常发育。虽然各国以及pvp生产厂家basf公认pvp不具有致畸性和诱变性，但是一些学者对pvp的绝对安全性提出挑战。

医疗器械行业中，血液透析器作为三类医疗器械涉及pvp的使用，pvp常被用作致孔剂和表面改性材料。血液透析器生产工艺中，pvp是通过共混的方式添加到纺丝液中，因此这类医疗器械在使用过程中不可避免的会有pvp析出，对患者来说是一种潜在的风险。因此建立简单有效以及精确度高的方法来检测pvp的溶出量含量显得尤为重要。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种聚乙烯吡咯烷酮含量的测试方法，该方法简单，且准确度较高。

本发明提供了一种聚乙烯吡咯烷酮含量的测试方法，包括以下步骤:

配置聚乙烯吡咯烷酮标准溶液，在194nm波长下测试吸光度值，绘制标准曲线；

将含聚乙烯吡咯烷酮的待测液采用溶剂稀释，在194nm波长下测试吸光度值，代入标准曲线中，得到聚乙烯吡咯烷酮的浓度；

所述溶剂选自超纯水、超纯水-乙醇混合溶剂或超纯水-甲醇混合溶剂。

在本发明中，所述溶剂和待测液的体积比为0.95～1.05:1。具体实施例中，所述溶剂和待测液的体积比为1:1。具体实施例中，所述溶剂为超纯水。

在本发明中，所述聚乙烯吡咯烷酮标准溶液的浓度分别为10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml和50μg/ml。

在本发明中，所述聚乙烯吡咯烷酮的分子量mw为5～1000kda；还可以为9～850kda。具体实施例中，聚乙烯吡咯烷酮的分子量为9kda、450kda或850kda。

在本发明中，所述含聚乙烯吡咯烷酮的待测液由以下仪器洗脱获得：

所述仪器包括血液透析器、血液透析滤过器、血液滤过器和血浆分离器中的一种或多种。

本发明提供了一种聚乙烯吡咯烷酮含量的测试方法，包括以下步骤:配置聚乙烯吡咯烷酮标准溶液，在194nm波长下测试吸光度值，绘制标准曲线；将含聚乙烯吡咯烷酮的待测液采用溶剂稀释，在194nm波长下测试吸光度值，代入标准曲线中，得到聚乙烯吡咯烷酮的浓度；所述溶剂选自超纯水、超纯水-乙醇混合溶剂或超纯水-甲醇混合溶剂。与müller法相比，本发明采用的测试方法更简单，且准确度更高。该方法同样适用于分子量分布较宽的pvp。

附图说明

图1为本发明提供的测试方法的流程示意图；

图2为本发明提供的待测液的制备示意图；

图3为本发明实施例1中标准溶液绘制的标准曲线图；

图4为本发明实施例2中标准溶液绘制的标准曲线图。

具体实施方式

为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种聚乙烯吡咯烷酮含量的测试方法进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1～3

1、pvp标准曲线的绘制：

将1.0克pvp(k17(mw＝9kda)溶解于0.8升实验用水中，在30℃条件下机械搅拌至溶解；随后将上述原液冷却至室温，用实验用水定容至1.0升；将上述pvp原液依次稀释至浓度为10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml和50μg/ml的标准溶液；各标准溶液用等体积蒸馏水稀释后，测试在194nm下的吸光度值，并绘制标准曲线：y1＝0.02811x1-0.00095，r1²＝0.99981。

将1.0克pvp(k60(mw＝450kda))溶解于0.8升实验用水中，在30℃条件下机械搅拌至溶解；随后将上述原液冷却至室温，用实验用水定容至1.0升；将上述pvp原液依次稀释至浓度为10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml和50μg/ml的标准溶液；各标准溶液用等体积蒸馏水稀释后，测试在194nm下的吸光度值，并绘制标准曲线：y2＝0.02762x2-0.00724，r2²＝0.99986。

将1.0克pvp(k80(mw＝850kda)))粉末溶解于0.8升实验用水中，在30℃条件下机械搅拌至溶解；随后将上述原液冷却至室温，用实验用水定容至1.0升；将上述pvp原液依次稀释至浓度为10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml和50μg/ml的标准溶液；各标准溶液用等体积蒸馏水稀释后，测试在194nm下的吸光度值，并绘制标准曲线：y3＝0.02759x3-0.00771，r3²＝0.99979。

图3为本发明实施例1中标准溶液绘制的标准曲线图；图3看出：本发明提供的方法不需要显色剂，测试结果受分子量影响较小。

2、待测液的制备：

2.1透析器预冲

空心纤维透析器(透析器上含有pvp)血室与管路连接好，透析液室用防尘帽封闭，然后用37℃的生理盐水以100ml/min的流速冲洗透析器，冲洗完成后然后将生理盐水排空。

2.2透析器待测液的制备

将排空生理盐水的透析器与管路相连接，见图2，开泵运行排出透析器中的气泡，然后调整血泵流速至设定速度，计时循环。试验结束后，将管路及透析器中的所有液体排入广口瓶中，搅拌均匀，得到含聚乙烯吡咯烷酮的待测液。

以37℃循环超纯水(不连接透析器)做空白。

3、试样检测

将含聚乙烯吡咯烷酮的待测液加入到试管中，然后用蒸馏水等体积稀释，在194nm波长下测试其吸光度，根据标准曲线计算处待测液中pvp浓度。

表1实施例1和对比例1中待测液的测试结果一览表

注：相对标准偏差越大，测试误差越大。

对比例1～3

1、pvp标准曲线的绘制：

将1.0克pvp(k17(mw＝9kda)溶解于0.8升实验用水中，在30℃条件下机械搅拌至溶解；随后将上述原液冷却至室温，用实验用水定容至1.0升；将上述pvp原液依次稀释至浓度为10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml和50μg/ml的标准溶液；在试管中加入0.2mol/l柠檬酸水溶液2.5ml与0.006mol/l的碘溶液1ml，涡流震荡混匀后分别加入各标准溶液，涡流震荡混匀后，静置20分钟后，于470nm波长测定其吸光度，并绘制标准曲线：y4＝0.01369x4+0.44652，r4²＝0.99908。

将1.0克pvp(k60(mw＝450kda))溶解于0.8升实验用水中，在30℃条件下机械搅拌至溶解；随后将上述原液冷却至室温，用实验用水定容至1.0升；将上述pvp原液依次稀释至浓度为10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml和50μg/ml的标准溶液；在试管中加入0.2mol/l柠檬酸水溶液2.5ml与0.006mol/l的碘溶液1ml，涡流震荡混匀后分别加入各标准溶液，涡流震荡混匀后，静置20分钟后，于470nm波长测定其吸光度，并绘制标准曲线：y5＝0.01819x5+0.44138，r5²＝0.99901。

将1.0克pvp(k80(mw＝850kda))粉末溶解于0.8升实验用水中，在30℃条件下机械搅拌至溶解；随后将上述原液冷却至室温，用实验用水定容至1.0升；将上述pvp原液依次稀释至浓度为10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml和50μg/ml的标准溶液；在试管中加入0.2mol/l柠檬酸水溶液2.5ml与0.006mol/l的碘溶液1ml，涡流震荡混匀后分别加入各标准溶液，涡流震荡混匀后，静置20分钟后，于470nm波长测定其吸光度，并绘制标准曲线：y6＝0.02107x6+0.44814，r6²＝0.99953。

图4为本发明对比例1中标准溶液绘制的标准曲线图；图4看出：müller法测试待测液需要显色剂；且müller法中三条标准曲线不重合，受分子量影响较大。

2、待测液的制备：

2.1透析器预冲

空心纤维透析器血室与管路连接好，透析液室用防尘帽封闭，然后用37℃的生理盐水以100ml/min的流速冲洗透析器，冲洗完成后然后将生理盐水排空。

2.2透析器待测液的制备

将排空生理盐水的透析器与管路相连接，见图1，开泵运行排出透析器中的气泡，然后调整血泵流速至设定速度，计时循环。试验结束后，将管路及透析器中的所有液体排入广口瓶中，搅拌均匀，得到含聚乙烯吡咯烷酮的待测液。

以37℃循环超纯水(不连接透析器)做空白。

3、试样检测

试管里分别加入0.2mol/l柠檬酸水溶液2.5ml与0.006mol/l的碘溶液1ml，涡流震荡混匀后，然后对应加入含聚乙烯吡咯烷酮的待测液5ml，涡流震荡混匀后，静置20分钟后，于470nm波长测定其吸光度，根据标准曲线，计算待测液中pvp浓度，对比例1中待测液的测试结果见表1。

由以上实施例可知，本发明提供了一种聚乙烯吡咯烷酮含量的测试方法，包括以下步骤:配置聚乙烯吡咯烷酮标准溶液，在194nm波长下测试吸光度值，绘制标准曲线；将含聚乙烯吡咯烷酮的待测液采用溶剂稀释，在194nm波长下测试吸光度值，代入标准曲线中，得到聚乙烯吡咯烷酮的浓度；所述溶剂选自超纯水、超纯水-乙醇混合溶剂或超纯水-甲醇混合溶剂。与müller法相比，本发明采用的测试方法更简单，且准确度更高。该方法同样适用于分子量分布较宽的pvp。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。