一种双层微流控纸芯片及其制备方法、一种植物中农药残留量的检测方法

本发明涉及农药检测技术领域，特别涉及一种双层微流控纸芯片及其制备方法、一种植物中农药残留量的检测方法。

背景技术：

在现代农业生产中，农药的使用大大提高了农作物的产量。目前广泛应用的农药有有机磷类农药和氨基甲酸酯类农药。其中有机磷类农药包括甲胺磷、丙溴磷、敌敌畏等，氨基甲酸酯类农药有灭多威、克百威、敌百虫等。然而，农药过量不合理的使用对生态环境和人体健康造成了威胁，农药残留的危害已经引起了人们的高度重视。

目前多采用气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱法、液相色谱质谱法、酶联免疫吸附分析法等方法对有机磷和氨基甲酸酯类农药残留进行检测，这些检测设备方法成熟、定量准确、灵敏度高，但是存在设备昂贵、操作复杂、检测时间长、难于携带的缺点，无法在基层单位推广使用。

农药速测卡利用胆碱酯酶可催化红色的靛酚乙酸酯水解为乙酸与蓝色的靛酚的性能，有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱酯酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此判断样品中是否含有过量有机磷或氨基甲酸酯类农药的残留。但是，农药速测卡通过人眼判断检测结果，只能定性判断检测结果，不能实现农药残留量的定量检测。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明目的在于提供一种双层微流控纸芯片及其制备方法、一种植物中农药残留量的检测方法。本发明提供的双层微流控纸芯片能够定性、定量地对植物中的有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量进行检测。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种农药检测用双层微流控纸芯片，包括上层纸芯片1和下层纸芯片2；

所述上层纸芯片1设置有若干第一亲水区4和若干个包围所述第一亲水区4且与所述第一亲水区4共边界的第一疏水区3；

所述第一亲水区4固载有乙酰胆碱酯酶和显色剂，所述显色剂为二硫代二硝基苯甲酸；所述第一疏水区3沉积有第一疏水材料；

所述下层纸芯片2设置有若干第二亲水区6和若干个包围所述第二亲水区6且与所述第二亲水区6共边界的第二疏水区5；

所述第二亲水区6固载有硫代乙酰胆碱；所述第二疏水区5沉积有第二疏水材料；

所述上层纸芯片1的第一亲水区4和下层纸芯片2的第二亲水区6形状、大小相同。

优选的，所述乙酰胆碱酯酶在第一亲水区4的固载量为100～200μg/cm²；

所述显色剂在第一亲水区4的固载量为100～200μg/cm²。

优选的，所述硫代乙酰胆碱在第二亲水区6的固载量为160～360μg/cm²。

优选的，所述双层微流控纸芯片对有机磷类农药的检测限为0.01mg/kg，对氨基甲酸酯类农药的检测限为0.03mg/kg。

优选的，所述上层纸芯片1和下层纸芯片2的孔径独立为2.5～25μm，厚度独立为180～205μm，质量独立为88～98g/m²，空气流速独立为3.7～94s/100ml/in²。

优选的，所述第一亲水区4为圆形，所述第一疏水区3为环形，第一亲水区4与第一疏水区3的面积比为0.3～0.6：1；

所述第二亲水区6与第二疏水区5的面积比为0.3～0.6:1。

本发明提供了上述农药检测用双层微流控纸芯片的制备方法，包括以下步骤：

在纸芯片表面沉积第一疏水材料，沉积第一疏水材料的区域为第一疏水区3，被第一疏水区3包围的区域为第一亲水区4；在第一亲水区4加入乙酰胆碱酯酶溶液和显色剂，进行第一干燥，得到上层纸芯片1；

在另一张纸芯片表面沉积第二疏水材料，沉积第二疏水材料的区域为第二疏水区5，被第二疏水区5包围的区域为第二亲水区6；在第二亲水区6加入硫代乙酰胆碱溶液，进行第二干燥，得到下层纸芯片2。

本发明提供了上述农药检测用双层微流控纸芯片对植物中有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量进行检测的方法，包括以下步骤；

(i)将植物碎片与提取剂混合，进行震荡提取，得到待测液；

(ii)将所述待测液加入到上层纸芯片1的第一亲水区4，静置后将上层纸芯片1与下层纸芯片2按照第一亲水区4与第二亲水区6重合的方式叠置，进行显色反应，若无显色，说明植物中的机磷或氨基甲酸酯类农药残留量低于双层微流控纸芯片的检测限；若有显色，在开始显色5～15min内测试第二亲水区6的显色平均rgb值；

(iii)根据第二亲水区6的显色平均rgb值和预定的标准曲线获得植物中有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量；所述标准曲线为有机磷类农药残留质量浓度与显色平均rgb值的线性关系曲线，或为氨基甲酸酯类农药残留质量浓度与显色平均rgb值的线性关系曲线。

优选的，所述提取剂为磷酸氢二钾-磷酸二氢钾缓冲溶液，所述提取剂的ph值为7.5～8.5；所述振荡提取的速率为50～80次，时间为2～3min。

优选的，所述测试显色平均rgb值的方法为：

使用图像采集设备采集第二亲水区6的显色图片，使用图像处理软件得到第二亲水区6显色图片的显色平均rgb值。

本发明提供了一种双层微流控纸芯片，包括上层纸芯片1和下层纸芯片2，所述上层纸芯片1包括环形的第一疏水区3，和被所述第一疏水区3包围的第一亲水区4；所述第一亲水区4固载有乙酰胆碱酯酶和显色剂二硫代二硝基苯甲酸；所述第一疏水区3沉积有第一疏水材料；所述下层纸芯片2包括环形的第二疏水区5，和被所述第二疏水区5包围的第二亲水区6；所述第二亲水区6固载有硫代乙酰胆碱；所述第二疏水区5沉积有第二疏水材料；所述上层纸芯片1的第一亲水区4和下层纸芯片2的第二亲水区6形状相同。本发明使用二硫代二硝基苯甲酸作为显色剂，利用有机磷和氨基甲酸酯类农药抑制乙酰胆碱酯酶的活性，进而抑制乙酰胆碱的水解，最终影响显色反应的显色平均rgb值，根据显色平均rgb值能够实现植物中的有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量的定量检测。本发明将乙酰胆碱酯酶和显色剂固载于第一亲水区4，将底物硫代乙酰胆碱固载于第二亲水区6，在进行检测时，只需要在第一亲水区4滴加待检测液，在纸纤维毛细管作用下，待测液扩散至下层纸芯片2的第二亲水区6，与第二亲水区6固载的底物进行显色反应。本发明不需要加入额外的试剂，操作简单，可随时随地检测。本发明使用疏水区包围亲水区，能够在纸芯片表面形成微流控通道，样品的检测与显色均在亲水区内完成，能够提高检测精度，方便检测人员进行操作。同时，本发明使用纸芯片作为检测材料，具有成本低廉、便携的优势，便于市场推广使用。在本发明中，所述双层微流控纸芯片对有机磷类农药的检测限为0.01mg/kg，对氨基甲酸酯类农药的检测限为0.03mg/kg。

本发明提供了基于上述农药检测用双层微流控纸芯片对植物中有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量进行检测的方法，本发明根据第二亲水区6的有无显色可以定性地判断植物中是否有农药残留，在已知植物中农药种类的前提下，可以根据第二亲水区6的显色平均rgb值和标准曲线获得植物中有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量。

附图说明

图1是农药检测用双层微流控纸芯片的结构示意图，其中，1-上层纸芯片1，2-下层纸芯片2，3-第一疏水区3，4-第一亲水区4，5-第二疏水区5，6-第二亲水区6；

图2是标准丙溴磷农药样品溶液的显色图片；

图3是实施例2所得标准曲线；

图4是标准灭多威农药样品溶液的显色图片；

图5是实施例3所得标准曲线。

具体实施方式

本发明提供了一种农药检测用双层微流控纸芯片，包括上层纸芯片1和下层纸芯片2；

所述上层纸芯片1设置有若干第一亲水区4和若干个包围所述第一亲水区4且与所述第一亲水区4共边界的第一疏水区3；

所述第一亲水区4固载有乙酰胆碱酯酶和显色剂，所述显色剂为二硫代二硝基苯甲酸；所述第一疏水区3沉积有第一疏水材料；

所述下层纸芯片2设置有若干第二亲水区6和若干个包围所述第二亲水区6且与所述第二亲水区6共边界的第二疏水区5；

所述第二亲水区6固载有硫代乙酰胆碱；所述第二疏水区5沉积有第二疏水材料；

所述上层纸芯片1的第一亲水区4和下层纸芯片2的第二亲水区6形状、大小相同。

在本发明中，所述第一亲水区4与第一疏水区3的面积比优选为0.3～0.6：1，更优选为0.4～0.5:1。在本发明中，所述第一亲水区4的形状优选为圆形，所述圆形的直径优选为4～6mm，更优选为5mm；所述第一疏水区3的形状优选为圆环形，所述圆环形的内径与为第一亲水区4的直径相同，所述圆环形的外径优选为8～12mm，更优选为9～10mm。

在本发明中，所述单个第一亲水区4和单个第一疏水区3构成第一微流控通道；在本发明中，所述上层纸芯片1优选包括多个第一微流控通道，优选为2～20个，更优选为5～10个。

在本发明中，所述第一亲水区4固载有乙酰胆碱酯酶；在本发明中，所述乙酰胆碱酯酶优选为国标乙酰胆碱酯酶，所述乙酰胆碱酯酶对丙溴磷的灵敏度为0.01mg/kg，对灭多威的灵敏度为0.2mg/kg。本发明对所述乙酰胆碱酯酶的来源没有特殊的要求，使用本领域技术人员常规市售的乙酰胆碱酯酶即可。在本发明中，所述乙酰胆碱酯酶的固载量优选为100～200μg/cm²，更优选为120～180μg/cm²，进一步优选为150μg/cm²。

在本发明中，所述第一亲水区4固载有显色剂，所述显色剂为二硫代二硝基苯甲酸。在本发明中，所述显色剂的固载量优选为100～200μg/cm²，更优选为120～180μg/cm²，进一步优选为150μg/cm²。

在本发明中，所述第一疏水材料优选为蜡。

在本发明中，所述第二亲水区6与第二疏水区5的面积比优选为0.3～0.6：1，更优选为0.4～0.5:1。在本发明中，所述第二亲水区6的形状优选为圆形，所述圆形的直径优选为4～6mm，更优选为5mm；所述第二疏水区5的形状优选为圆环形，所述圆环形的内径与为第二亲水区6的直径相同，所述圆环形的外径优选为8～12mm，更优选为9～10mm。

在本发明中，第一亲水区4和第二亲水区6形状、大小相同；所述第一疏水区3和第二疏水区5的形状、大小优选相同。

在本发明中，所述单个第二亲水区6和单个第二疏水区5构成第二微流控通道；在本发明中，所述下层纸芯片2优选包括多个第二微流控通道，在本发明中，所述第二微流控通道的个数与第一微流控通道的个数相同，且位置一一对应。

在本发明中，所述第二亲水区6固载有硫代乙酰胆碱，所述硫代乙酰胆碱的固载量为160～360μg/cm²，更优选为200～300μg/cm²。

在本发明中，所述第二疏水材料优选为蜡。

在本发明中，所述上层纸芯片1和下层纸芯片2的材质优选为滤纸，所述滤纸的孔径独立优选为2.5～25μm，更优选为5～15μm；厚度独立优选为180～205μm，更优选为190～200μm；重量独立优选为88～98g/m²，更优选为90～95g/m²，空气流速独立优选为3.7～94s/100ml/in²，更优选为10～80s/100ml/in²，进一步优选为30～50s/100ml/in²。

本发明对所述上层纸芯片1和下层纸芯片2的具体形状没有特殊的要求，根据实际情况进行相应的设计即可。

本发明提供的农药检测用双层微流控纸芯片的结构示意图如图1所示，图1中，1-上层纸芯片1，2-下层纸芯片2，3-第一疏水区3，4-第一亲水区4，5-第二疏水区5，6-第二亲水区6。

本发明提供了上述农药检测用双层微流控纸芯片的制备方法，包括以下步骤：

在纸芯片表面沉积第一疏水材料，在第一疏水材料包围的区域内加入乙酰胆碱酯酶溶液和显色剂，干燥后得到上层纸芯片1；

在另一张纸芯片表面沉积第二疏水材料，在第二疏水材料包围的区域内加入硫代乙酰胆碱溶液，干燥后得到下层纸芯片2。

本发明在纸芯片表面沉积第一疏水材料，在第一疏水材料包围的区域内加入乙酰胆碱酯酶溶液和显色剂，进行第一干燥，得到上层纸芯片1。在本发明中，所述沉积第一疏水材料的设备优选为喷蜡打印机。本发明对所述沉积的具体方式没有特殊的要求，使用本领域技术人员熟知的沉积方式即可。沉积所述第一疏水材料后，本发明优选对第一疏水材料进行加热，所述加热的温度优选为110～120℃，更优选为115℃；时间优选为100～150s，更优选为120～140s。本发明通过所述加热，使第一疏水材料渗入到纸芯片的孔隙结构中。

本发明对所述乙酰胆碱酯酶溶液和显色剂的加入顺序没有特殊的要求。在本发明中，所述乙酰胆碱酯酶溶液和显色剂的加入方式优选为滴加。本发明对所述滴加的速率没有特殊的要求。在本发明中，所述第一干燥的温度优选为30～37℃，时间优选为32～35℃，时间优选为30～40min，更优选为32～36min。

本发明在另一张纸芯片表面沉积第二疏水材料，在第二疏水材料包围的区域内加入硫代乙酰胆碱溶液，进行第二干燥，得到下层纸芯片2。在本发明中，所述第二疏水材料的沉积方式优选与所述第一疏水材料的沉积方式相同，在此不再赘述。沉积所述第二疏水材料后，本发明优选对第二疏水材料进行加热，所述加热的温度优选为110～120℃，更优选为115℃；时间优选为100～150s，更优选为120～140s。本发明通过所述加热，使第二疏水材料渗入到纸芯片的孔隙结构中。

在本发明中，所述加入硫代乙酰胆碱溶液的方式优选为滴加，本发明对所述滴加的速率没有特殊的要求。在本发明中，所述硫代乙酰胆碱溶液的浓度优选为8.0～9.0g/l，更优选为8.5g/l。在本发明中，所述第二干燥的温度优选为30～37℃，时间优选为32～35℃，时间优选为30～40min，更优选为32～36min。

本发明提供了基于上述农药检测用双层微流控纸芯片对植物中有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量进行检测的方法，包括以下步骤；

(1)将植物碎片与提取剂混合，进行震荡提取，得到待测液；

(2)将所述待测液加入到上层纸芯片1的第一亲水区4，静置后将上层纸芯片1的第一亲水区4与下层纸芯片2的第二亲水区6叠合，进行显色反应，若无显色，说明植物中的机磷或氨基甲酸酯类农药残留量低于双层微流控纸芯片的检测限；若有显色，在开始显色5～15min内测试第二亲水区6的显色平均rgb值；

(3)根据第二亲水区6的显色平均rgb值和标准曲线获得植物中有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量；所述标准曲线为机磷类农药残留质量浓度与显色平均rgb值的线性关系曲线，或氨基甲酸酯类农药残留质量浓度与显色平均rgb值的线性关系曲线。

本发明将植物碎片与提取剂混合，进行震荡提取，得到待测液。本发明对所述植物的种类没有特殊的要求，本领域熟知的植物、如蔬菜、水果、农作物均能使用本发明提供的方法进行检测。在本发明中，所述植物碎片的片径优选为0.5～1.5cm，更优选为1cm。在本发明中，所述提取剂优选为无水磷酸氢二钾与磷酸二氢钾的缓冲溶液，所述提取剂的ph值优选为7.5～8.5。在本发明中，所述振荡提取的次数优选为50～80次，时间优选为2～3min。

所述振荡提取后，本发明优选随所得提取剂依次进行静置和固液分离，得到待测液。在本发明中，所述静置的时间优选为3～5min，更优选为4min；本发明对所述固液分离的方式没有特殊的要求，使用本领域技术人员熟知的固液分离方式即可，具体的如过滤。

得到待测液后，本发明将所述待测液加入到上层纸芯片1的第一亲水区4，静置后将上层纸芯片1的第一亲水区4与下层纸芯片2的第二亲水区6叠合，进行显色反应。在本发明中，所述待测液的加入量优选为4～20μl，更优选为6～15μl。在本发明中，所述静置的时间优选为3～5min，更优选为4min。

在本发明中，若第二亲水区6无显色，说明植物中的机磷或氨基甲酸酯类农药残留量低于双层微流控纸芯片的检测限；若有显色，在开始显色5～15min内测试第二亲水区6的显色平均rgb值。在本发明中，所述测试显色平均rgb值的方法优选为：

使用图像采集设备采集第二亲水区6的显色图片，使用图像处理软件得到第二亲水区6显色图片的显色平均rgb值。

在本发明中，所述图像采集设备优选为扫描仪、数码相机或带有拍照功能的手机。在本发明中，所述图像处理软件优选为photoshop或imagej图像处理软件。在本发明中，所述显色平均rgb值为红r、绿g、蓝b三个颜色通道的平均rgb值。

得到第二亲水区6的显色平均rgb值后，本发明根据第二亲水区6的显色平均rgb值和标准曲线获得植物中有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量；所述标准曲线为有机磷类农药残留质量浓度与显色平均rgb值的线性关系曲线，或为氨基甲酸酯类农药残留质量浓度与显色平均rgb值的线性关系曲线。

在本发明中，所述有机磷类农药残留质量浓度与显色平均rgb值的线性关系曲线的获得方法优选包括以下步骤：

(1)准确配制浓度为0、100μg/kg、200μg/kg、300μg/kg、400μg/kg、500μg/kg的系列有机磷类农药标准溶液；

(2)将有机磷类农药标准溶液加入到上层纸芯片1的第一亲水区4，静置后将上层纸芯片1的第一亲水区4与下层纸芯片2的第二亲水区6叠合，进行显色反应，在开始显色5～15min内测试第二亲水区6的显色平均rgb值。以有机磷类农药标准溶液的浓度为横坐标，以显色平均rgb值为纵坐标，绘制标准曲线。本发明对所述绘制标准曲线的方法没有特殊的要求，使用本领域技术人员熟知的方法绘制标准曲线即可。在本发明中，所述有机磷类农药标准溶液的浓度与显色平均rgb值呈正相关。

作为本发明的一个具体实施例，所述丙溴磷标准曲线为y＝0.05023x+139.19857，r2＝0.99776，x＝10～500μg/kg。

在本发明中，所述氨基甲酸酯类农药残留质量浓度与显色平均rgb值的线性关系曲线的方法与有机磷类农药残留质量浓度与显色平均rgb值的线性关系曲线的获得方法相似，在此不再赘述。

作为本发明的一个具体实施例，所述灭多威标准曲线为y＝0.04722x+168.551，r²＝0.99537，x＝3～300μg/kg。

下面结合实施例对本发明提供的一种双层微流控纸芯片及其制备方法、一种植物中农药残留量的检测方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

取两张纸芯片，纸芯片的孔径为11μm，厚度为180μm，基本重量为88g/m²，空气流速为10.5s/100ml/in²。

分别取11.9g无水磷酸氢二钾与3.2g磷酸二氢钾，用1000ml蒸馏水溶解，获得缓冲溶液，ph值为8。

分别取160mg二硫代二硝基苯甲酸和15.6mg碳酸氢钠，用20ml缓冲溶液溶解，得到显色剂溶液。

用25.0mg硫代乙酰胆碱，用3.0ml蒸馏水溶解，得到底物溶液，摇匀置4℃冰箱保存备用。

取10u/l的国标乙酰胆碱酯酶(对丙溴磷的灵敏度为0.01mg/kg，对灭多威的灵敏度为0.2mg/kg)作为酶液。

在一张纸芯片表面使用喷蜡打印机沉积蜡，在120℃下加热100s，得到第一疏水区3，其中第一疏水区3的形状为圆环形，内径为6mm，外径为12mm，第一疏水区3包围的区域为第一亲水区4。在第一亲水区4内，滴加5μl酶液和5μl显色剂溶液，干燥后得到上层纸芯片1，上层纸芯片1中乙酰胆碱酯酶的固载量为150μg/cm²，显色剂的固载量为150μg/cm²。

在另一张纸芯片表面使用喷蜡打印机沉积蜡，在120℃下加热100s，得到第二疏水区5，其中第二疏水区5的形状为圆环形，内径为6mm，外径为12mm，第二疏水区5包围的区域为第二亲水区6。在第二亲水区6内，滴加5μl底物溶液，干燥后得到下层纸芯片2，下层纸芯片中硫代乙酰胆碱的固载量为200μg/cm²。

实施例2

配制浓度分别为0、100μg/kg、200μg/kg、300μg/kg、400μg/kg和500μg/kg的标准丙溴磷农药样品溶液，将标准丙溴磷农药样品溶液加入到实施例1所得上层纸芯片1的第一亲水区4，静置3min后将上层纸芯片1的第一亲水区4与下层纸芯片2的第二亲水区6叠合，进行显色反应，分别在显色5min、10min、和15min，对显色区域用6400万像素的手机相机拍照进行信号提取，获得的显色图片如图2所示，使用photoshop获得显色区域的平均rgb值。所得结果如表1所示。

表1不同浓度丙溴磷和不同显色时间下的显色平均rgb值

由图2和表1可以看出，在100～500μg/kg范围内，纸芯片的平均rgb值呈良好的线性关系。由于国标中蔬菜中丙溴磷残留量最多为500μg/kg，则将本发明提供的农药检测用双层微流控纸芯片对丙溴磷的检测上限定为500μg/kg。

以10min的显色平均rgb值为纵坐标，以丙溴磷浓度为横坐标，绘制标准曲线，标准曲线图如图3所示，所得标准曲线为y＝0.05023x+139.19857，r2＝0.99776。

配制浓度为0、5μg/kg、8μg/kg、10μg/kg、20μg/kg、30μg/kg、40μg/kg、50μg/kg的标准丙溴磷农药样品溶液，按照上述方式进行显色反应，得到丙溴磷农药的最低检测限为10μg/kg。

实施例3

配制浓度分别为0、100μg/kg、200μg/kg、300μg/kg、400μg/kg和500μg/kg的标准灭多威农药样品溶液，将标准灭多威农药样品溶液加入到实施例1所得上层纸芯片1的第一亲水区4，静置3min后将上层纸芯片1的第一亲水区4与下层纸芯片2的第二亲水区6叠合，进行显色反应，分别在显色5min、10min、和15min，对显色区域用6400万像素的手机相机拍照进行信号提取，获得的显色图片如图4所示，使用photoshop获得显色区域的平均rgb值。所得结果如表2所示。

表2不同浓度灭多威和不同显色时间下的显色平均rgb值

由图4和表2可以看出，说明随着农药残留量的增加，显色强度降低，平均rgb值表现为增加，并且随着显色时间的增长，显色强度随之加强，即表现为平均rgb降低。当浓度超过300μg/kg时，纸芯片的显色强度区别不再明显，可以确定本发明提供的农药检测用双层微流控纸芯片对丙溴磷的检测上限是300μg/kg，此检测限已超过国标中规定蔬菜中灭多威农药残留量上限200μg/kg。

以10min的显色平均rgb值为纵坐标，以灭多威浓度为横坐标，绘制标准曲线，标准曲线图如图5所示，所得标准曲线为y＝0.04722x+168.551，r²＝0.99537。

配制浓度为0、5μg/kg、8μg/kg、10μg/kg、20μg/kg、30μg/kg、40μg/kg、50μg/kg的标准灭多威农药样品溶液，按照上述方式进行显色反应，得到丙溴磷农药的最低检测限为30μg/kg。

实施例4

选取10个菠菜样品，记为编号1～10，冲洗掉表面泥土，剪成1cm左右方形碎片。取1g的碎片，放入烧杯或提取瓶中，加入5ml缓冲溶液，震荡1min后倒出提取剂，静置5min，待用。

分别使用本发明双层微流控纸芯片和gb/t5009.199-2003所规定的分光光度法对其残留的有机磷进行检测。使用双层微流控纸芯片进行检测时，将待测液样品滴加到双层微流控纸芯片上，静置3min后将上层纸芯片1的第一亲水区4与下层纸芯片2的第二亲水区6叠合，进行显色反应，在显色5min、后对显色区域用6400万像素的手机相机拍照进行信号提取，获得显色区域平均rgb值，并计算待测样品对酶的抑制率，其中抑制率(％)＝[(空白组平均rgb值(0μg/kg)-样品平均rgb值)/空白组平均rgb值]*100。所得结果如表3所示。

表3分光光度法和本发明检测结果比较

由表3可以看出，利用两种检测方法检测抑制率不存在显著性差异，其相关系数为0.9975，说明两者具有较高的一致性，且最终的判断结果完全一致。利用本发明的检测方法在获取图片时保证了显色时间的一致，避免了由于样品和空白显色时间的不一致而引入的误差。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。