一种总胆固醇检测试剂及检测芯片的制作方法

1.本发明涉及总胆固醇检测技术领域，特别是涉及一种总胆固醇检测试剂及检测芯片。


背景技术：

2.血清总胆固醇(total cholesterol，tc)是指血液中所有脂蛋白所含胆固醇的总和，包括游离胆固醇(fc)和胆固醇酯(ce)；其中，fc约占tc 的70％。胆固醇是脂类化合物的一种，是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及构成细胞膜的重要成分。正常人tc含量范围在3.0～5.20mmol/l。若tc在血液中浓度过高，可造成心脑血管的严重损害。
3.目前，tc的测定方法主要有化学比色法和酶法。化学比色法大多采用有机溶剂提取血清中的fc和ce，用特殊试剂显色再比色测定。化学比色法需要从血清中提取胆固醇并纯化，也需要使用腐蚀性的浓酸试剂，其操作步骤繁琐、特异性差且干扰因素多，不适用于tc的常规检测。故临床上常用酶法对tc进行检测。
4.在实现本发明的过程中，发明人发现相关技术中，使用酶法检测tc 的检测结果容易受到检测样本中其他物质的干扰，导致检测结果准确性差。


技术实现要素：

5.为了克服酶法检测结果准确性差的技术问题，本发明实施例提供一种血清总胆固醇检测试剂及检测芯片，能够采用氧化型辅酶、胆固醇脱氢酶对检测样本中的tc含量进行检测，反应过程不易受到其物质的干扰，测试结果准确性高。
6.为了解决上述技术问题，本发明实施例提供以下技术方案：
7.第一方面，本发明实施例提供一种总胆固醇检测试剂，所述总胆固醇检测试剂包括由第一试剂制备而成的第一冻干试剂球和由第二试剂制备而成的第二冻干试剂球；
8.所述第一试剂包括以下组分：
9.第一缓冲液 0.005
‑
2mol/l；
10.氧化型辅酶i 20
‑
100g/l；
11.第一赋形剂 100
‑
200g/l；
12.所述第二试剂包括以下组分：
13.第二缓冲液 0.005
‑
2mol/l；
14.胆固醇酯酶 20
‑
100ku/l；
15.胆固醇脱氢酶 10
‑
50ku/l；
16.第二赋形剂 100
‑
200g/l。
17.可选的，所述第二试剂还包括联胺。
18.可选的，所述联胺在所述第二试剂中的含量为5
‑
10g/l。
19.可选的，所述第一试剂还包括第一表面活性剂，所述第一表面活性剂在所述第一试剂中的含量为0.1
‑
10g/l；和/或
20.所述第二试剂还包括第二表面活性剂，所述第二表面活性剂在所述第二试剂中的含量为0.1
‑
10g/l。
21.可选的，所述第二试剂还包括稳定剂，所述稳定剂在所述第二试剂中的含量为0.1
‑
10g/l。
22.可选的，所述第稳定剂为牛血清白蛋白或硫酸鱼精蛋白。
23.可选的，所述第一试剂和/或所述第二试剂还包括氯化钠。
24.可选的，所述第一缓冲液和所述第二缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸缓冲液、硼酸缓冲液或两性离子缓冲液中的至少一种。
25.可选的，所述第一赋形剂或所述第二赋形剂为甘露醇、肌醇、海藻糖或聚乙二醇中的一种或几种。
26.第二方面，本发明实施例还提供一种总胆固醇检测芯片，所述血清总胆固醇检测芯片包括芯片本体和存放于所述芯片本体的如第二方面制备的所述的总胆固醇检测试剂。
27.本发明实施方式的有益效果是：区别于现有技术的情况，本发明实施例提供了一种总胆固醇检测试剂及检测芯片，能够使检测样本中的胆固醇酯在胆固醇酯酶的作用下水解为游离胆固醇，游离胆固醇被胆固醇脱氢酶还原为胆烷
‑4‑
烯
‑3‑
酮，同时氧化型辅酶i被还原为还原型辅酶i，通过检测还原型辅酶i的吸光率便可以测定检测样本中总胆固醇的含量，操作简单，且反应过程不容易受到其他物质(例如，抗坏血酸、胆红素、血红蛋白、甘油三酯和乳酸脱氢酶)的干扰。因此，检测结果更加准确。
附图说明
28.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对本发明实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
29.图1是本发明的一个实施例提供总胆固醇检测芯片的临床相关性分析图；
30.图2是本发明的一个实施例提供的总胆固醇检测芯片的线性范围分析图。
具体实施方式
31.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
32.需要说明的是，如果不冲突，本发明实施例中的各个特征可以相互组合，均在本发明的保护范围之内。另外，虽然在装置示意图中进行了功能模块的划分，在流程图中示出了逻辑顺序，但是在某些情况下，可以以不同于装置示意图中的模块划分，或流程图中的顺序执行所示出或描述的步骤。
33.除非另有定义，本说明书所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本说明书中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是用于限制本发明。本说明书所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
34.本发明实施例提供一种总胆固醇检测试剂，该总胆固醇包括第一试剂球和第二试剂球，其中，第一试剂球由第一试剂制备而成，第二试剂球由第二试剂制备而成。
35.第一试剂包括以下组分：
36.第一缓冲液 0.005
‑
2mol/l；
37.氧化型辅酶i 20
‑
100g/l；
38.第一赋形剂 100
‑
200g/l；
39.所述第二试剂包括以下组分：
40.第二缓冲液 0.005
‑
2mol/l；
41.胆固醇酯酶 20
‑
100ku/l；
42.胆固醇脱氢酶 10
‑
50ku/l；
43.第二赋形剂 100
‑
200g/l。
44.其中，缓冲液是指由弱酸及其盐或弱碱及其盐组成的混合溶液，能够维持反应体系ph值的相对稳定。本发明实施例中的缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷(tris)缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸缓冲液或两性离子 (good’s)缓冲液中的至少一种。其中，good’s缓冲液具有很好的ph 稳定性及高度极性，对多种化学试剂和酶为惰性，不参加且不干扰生物化学反应过程。good’s缓冲液包括hepes缓冲液和pipes缓冲液。 hepes缓冲液的主要成分是羟乙基哌嗪乙硫磺酸，ph缓冲范围是 6.8
‑
8.2，在ph7.2
‑
7.4范围内具有较好的缓冲能力，能较长时间控制恒定的ph范围。本实施例中，当缓冲液的浓度达到0.005
‑
2mol/l时缓冲能力较好。
45.赋形剂能够赋予总胆固醇检测试剂良好的外观，使总胆固醇检测试剂疏松多孔，易于复溶。赋形剂主要包括多元醇类、糖类，氨基酸类、无机盐类以及蛋白质和肽类赋形剂。多元醇类赋形剂包括甘油、山梨醇、甘露醇、肌醇、侧金盏花醇、乙二醇和聚乙二醇等。糖类赋形剂包括单糖类赋形剂、二糖类赋形剂和多糖类赋形剂；其中，单糖类赋形剂包括葡萄糖；二糖类赋形剂包括蔗糖、乳糖、麦芽糖和海藻糖等；多糖类赋形剂包括水溶性淀粉、麦芽糊精和葡聚糖等；葡聚糖可以是葡聚糖1万、葡聚糖2万、葡聚糖4万或葡聚糖7万中的一种或多种。氨基酸类赋形剂包括：谷氨酸钠、脯氨酸、赖氨酸和丙氨酸等；无机盐类赋形剂包括：磷酸盐、碳酸钙、硫酸锰、胆酸钠和乙酸钠等；蛋白质和肽类赋形剂包括粘多糖蛋白、酪蛋白或牛血清蛋白等。本发明实施例中的赋形剂包括第一赋形剂和第二赋形剂，且第一赋形剂和第二赋形剂为任意合适的赋形剂。
46.进一步地，在一些实施例中，为了赋予第一试剂球更好的外观和复溶性，本发明实施例中的第一赋形剂或第二赋形剂为甘露醇、肌醇、海藻糖或聚乙二醇(peg)中的至少一种，其中，peg可以是peg 3350 和/或peg 8000。
47.本发明实施例提供的总胆固醇检测试剂的检测原理如下：检测样本包括游离胆固醇和胆固醇酯，其中，胆固醇酯在胆固醇酯酶的作用下水解为游离胆固醇。检测样本中原有的游离胆固醇和水解生成的游离胆固醇被胆固醇脱氢酶还原为胆烷
‑4‑
烯
‑3‑
酮，同时，氧化型辅酶i(nad
+
) 被还原为还原型辅酶i(nadh)和氢离子(h
+
)。还原型辅酶i在340nm 处吸光度的变化与总胆固醇的含量相关联，故通过测量340nm处吸光度的变化速率来计算总胆固醇的含量。反应方程式具体如下：
48.(1)
49.(2)
50.在一些实施例中，第二试剂还包括联胺。由于联胺可以与胆烷
‑4‑ꢀ
烯
‑3‑
酮反应，生成胺类化合物和水，联胺用于消除上述反应(2)中的胆烷
‑4‑
烯
‑3‑
酮，从而对上述反应(2)具有促进作用，使总胆固醇含量的检测结果更加准确。具体地，联胺在第二试剂中的含量为5
‑
10g/l。当联胺的含量小于5g/l时，联胺对反应(2)促进效果不理想；而当联胺的含量在10g/l左右时，联胺对反应(2)的促进作用接近饱和，过多的联胺会导致原料的浪费，浪费成本。
51.在一些实施例中，第一试剂还包括第一表面活性剂。可选的，在另一些实施例中，第二试剂还包括第二表面活性剂。第一表面活性剂和/ 或第二表面活性剂为胆固醇酯水解酶与胆固醇脱氢酶的激活剂，用于加快上述反应(1)和(2)的反应速率，同时使疏水性的胆固醇酯与试剂充分接触，反应更加完全。本发明实施例中的第一表面活性剂和第二表面活性剂的种类和含量可以相同也可以不同。具体的，在一些实施例中，第一表面活性剂在第一试剂中的含量为0.1
‑
10g/l；第二表面活性剂在第二试剂中的含量为0.1
‑
10g/l。
52.本发明实施例中的表面活性剂为任意合适的非离子型表面活性剂，具体可以是曲拉通(triton)系列、吐温(tween)系列和聚多卡醇中的至少一种。例如，triton系列表面活性剂是常用的非离子表面活性剂，具体可以是triton x
‑
100或triton x
‑
114曲拉通，其中，triton x
‑
100为聚乙二醇单辛基苯基醚，triton x
‑
114是聚氧乙烯单叔辛基苯基醚。吐温系列具体可以是吐温
‑
20或吐温
‑
80。
53.在一些实施例中，为了提高总胆固醇检测试剂中酶的稳定性，第二试剂还包括稳定剂，稳定剂具体可以是牛血清白蛋白或硫酸鱼精蛋白。例如，稳定剂可以使胆固醇酯酶和胆固醇脱氢酶更加稳定。稳定剂在第二试剂中的具体含量为0.1
‑
10g/l。可选的，在一些实施例中，第一试剂和/或第二试剂还包括氯化钠。
54.具体的，在一些实施例中，当第一试剂和第二试剂包括以下组分时，冻干试剂球的精密度、准确度、热稳定性和临床相关性均较好，满足使用要求。当总胆固醇浓度范围在[2，14]mmol/l内时，检测结果线性相关系数r≥0.990；且对抗坏血酸、胆红素、血红蛋白、甘油三酯和乳酸脱氢酶均具有较强的抗干扰能力。例如，第一试剂包括：50
‑
100mmol/l 的tris缓冲液、5
‑
10g/l氯化钠、20
‑
100g/l的氧化型辅酶i、0.1
‑
10g/l 的聚多卡醇、50
‑
100g/l的甘露醇和50
‑
100g/l的海藻糖，且第二试剂包括：20
‑
50mmol/l的hepes缓冲液、5
‑
10g/l的氯化钠、0.1
‑
10g/l的聚多卡醇、5
‑
10g/l的联胺、20
‑
100ku/l的胆固醇酯酶、10
‑
50ku/l的胆固醇脱氢酶、0.1
‑
10g/l的牛血清白蛋白、20
‑
50g/l的肌醇和50
‑
100g/l 的海藻糖。或者，第一试剂包括：50
‑
100mmol/l的pipes缓冲液、5
‑
10g/l 的氯化钠、40
‑
100g/l的氧化型辅酶i、0.1
‑
10g/l的triton x
‑
100、20
‑
50g/l 的肌醇和50
‑
100g/l的海藻糖；第二试剂包括20
‑
50mmol/l的pipes缓冲液、5
‑
10g/l的氯化钠、0.1
‑
10g/l的triton x
‑
100、5
‑
10g/l的联胺、 40
‑
100ku/l的胆固醇酯酶、20
‑
50ku/l的胆固醇脱氢酶、0.1
‑
10g/l的牛血清白蛋白、10
‑
20g/l的肌醇、20
‑
50g/l的peg 8000和50
‑
100g/l的海藻糖。
[0055]
本发明实施例还提供一种总胆固醇检测芯片，用于检测血清中的总胆固醇的含量，该检测芯片包括芯片本体和上述总胆固醇检测试剂。芯片本体上开设有比色孔，总胆固
醇检测试剂收容于比色孔中。血清中总胆固醇的检测方法为：通过稀释液将血清样本稀释，将稀释后的血清样本填充到比色孔中，待稀释后的血清样本与比色孔中的总胆固醇检测试剂充分反应后，采用分光光度计测试所述比色孔中溶液的吸光度值。
[0056]
在一些实施例中，检测芯片还包括样本孔、稀释液孔、样本槽、稀释液槽、样本定量槽、稀释液定量槽和混合槽。使用该检测芯片进行测试时，无需对样本进行离心处理即可进行检测，因此，血清、血浆和全血等检测样本都可以用于检测。具体可以通过移液器将血清样本从样本孔加入样本槽中。再撕开稀释液槽的封口膜，采用离心的方式使预存的稀释液从稀释槽进入稀释液定量槽，使所述血清样本从样本槽进入样本定量槽，以及使稀释液定量槽中的稀释液和样本定量槽中的血清样本进入混合槽，以通过稀释液稀释血清样本。再通过离心的方式使混合槽中稀释后的血清样本填充到比色孔中，待稀释后的血清样本与比色孔中的总胆固醇检测试剂充分反应后，采用分光光度计测试所述比色孔中溶液的吸光度。具体的，稀释液可以是蒸馏水。
[0057]
本发明实施例提供一种总胆固醇检测试剂及检测芯片，其反应原理是使用nad
+
和胆固醇脱氢酶分解胆固醇，分解产物包括nadh和胆烷
ꢀ‑4‑
烯
‑3‑
酮胆烷
‑4‑
烯
‑3‑
酮，通过反应体系在340nm处的特征性吸收峰测定检测样本中总胆固醇的含量，同时，联胺能够与分解产物胆烷
‑4‑
烯
‑3‑ꢀ
酮偶联，生成胺类化合物，从而降低分解产物的浓度，促进胆固醇在胆固醇脱氢酶(cdh)的作用下脱氢，并与nad
+
反应生成nadh和h
+
。 cdh的特性对不同底物有不同的催化特性，对胆固醇的特异性为100％。本发明实施例提供的总胆固醇检测试剂及检测芯片反应时间短，精密度高，操作简便，不受脂血和乳酸脱氢酶等物质的干扰，检测结果具有良好一致性。另外，将液体试剂做成冻干小球保存在检测芯片中，减少外界污染和交叉污染，样本用量少，是临床检验的理想方法。
[0058]
本发明实施例还提供一种总胆固醇检测试剂的制备方法，该方法包括如下步骤：
[0059]
s11、获取第一试剂和第二试剂；
[0060]
本发明实施例中，第一试剂的配置过程如下：在1升烧杯中加入800 毫升的蒸馏水，称取第一缓冲液，调节ph与第一缓冲液相适，待第一缓冲液溶解完全后依次加入氧化型辅酶i，最后加入第一赋形剂，定容至1升。可选的，在一些实施例中，在往烧杯中加入氧化性辅酶i的同时还可以加入氯化钠和/或第一表面活性剂。
[0061]
第二试剂的配置过程如下：在1升烧杯中加入800毫升的蒸馏水，称取第二缓冲液，调节ph与第二缓冲液相适，待第一缓冲液溶解完全后依次加入胆固醇酯酶与胆固醇脱氢酶，最后加入稳定剂和第二赋形剂，定容至1升。可选的，在一些实施例中，在往烧杯中加入胆固醇酯酶与胆固醇脱氢酶的同时还可以加入氯化钠和第二表面活性剂。
[0062]
s12、分别将第一试剂和第二试剂的液滴滴入液氮中，以使第一试剂和第二试剂的液滴分别凝结成第一冰球和第二冰球；
[0063]
例如，可以通过点胶机将第一试剂(或第二试剂)的液滴滴在液氮中，使第一试剂(或第二试剂)的液滴在液氮中凝结成第一冰球(或第二冰球)。本领域技术人员可以根据实际需要调整滴入液氮中的混合液的液滴的大小，并通过控制液滴的大小来调整第一冰球(或第二冰球) 的体积。可选的，在一些实施例中，为了确保总胆固醇检测试剂的复溶效果，冰球的体积为2.5
‑
3.5μl。
[0064]
s13、分别对第一冰球和第二冰球进行冷冻干燥得到第一冻干试剂球和第二冻干
试剂球。
[0065]
本实施例中，分别将第一冰球和第二冰球置于真空冷冻干燥机进行冷冻干燥形成总胆固醇检测试剂，待氮气复压后将总胆固醇检测试剂收集并保存在干燥的铝瓶中。
[0066]
冷冻干燥是指将含水的试剂原料预先进行降温冻结成固体，在低温减压条件下利用水的升华性能，使试剂原料低温脱水而达到干燥目的的一种干燥方法。冷冻干燥后，第一试剂和第二试剂中的各组分留在冻结时的冰架中，因此，冷冻干燥后的总胆固醇检测试剂疏松多孔，且其体积与冻干前基本保持不变。由于总胆固醇检测试剂干燥前始终处于冻结状态，同时冰晶均匀分布于试剂原料各组份中。升华过程中，各组份不会因脱水而发生浓缩现象。故冷冻干燥后的总胆固醇检测试剂呈海绵状疏松多孔，极易溶于水而恢复原状。
[0067]
为进一步阐述本发明的技术方案，以下提供本发明的总胆固醇检测芯片的若干实施例。
[0068]
实施例1：
[0069]
本实施例中的总胆固醇检测芯片包括由第一试剂制备而成的第一冻干试剂球和由第二试剂制备而成的第二冻干试剂球。
[0070]
第一试剂包括以下组分：
[0071][0072]
第二试剂包括以下组分：
[0073][0074]
实施例2：
[0075]
本实施例与实施例1的区别如下：
[0076]
第一试剂包括以下组分：
[0077][0078]
第一试剂包括以下组分：
[0079][0080]
下面结合表格对本发明实施例1所得的检测芯片的性能进行说明。需要说明的是，通过vp10便携式生化分析仪测定37℃下，注入血清样本的测定芯片在340nm波长吸光度的变化值。使用英国朗道公司提供的校准品进行定标，可计算得到血清样本中总胆固醇的浓度。
[0081]
(1)、精密度测试：采用本发明实施例1提供的检测芯片测试已知血清总胆固醇浓度为4.02mmol/l的血清样本中的总胆固醇浓度20次，并通过以下公式计算测得浓度值的平均值标准差(sd)和变异系数(cv)：
[0082][0083]
[0084][0085]
其中，x
i
为第i次测得浓度值，n为测试次数。
[0086]
得到测试同一血清样本20次获得的测得浓度值的平均值＝4.07mmol/l，标准差sd＝0.075，变异系数cv＝1.83％。通常，若标准差较大，代表大部分测试结果和其平均值之间差异较大；若标准差较小，则代表这些测试结果较接近平均值。
[0087]
(2)、准确度测试：采用本发明实施例1提供的检测芯片测试已知总胆固醇浓度为7.32mmol/l的血清样本三次，获取测得的总胆固醇浓度值，计算出3次测得总胆固醇浓度值的平均值为7.39mmol/l，相对偏差为0.96％。
[0088]
(3)、临床相关性分析：
[0089]
采用本发明实施例1提供的检测芯片与abaxis试剂盘同时测定对多个总胆固醇浓度不同的血清样本的总胆固醇含量。相应的测得总胆固醇浓度值(单位mmol/l)如表一所示，表一中，x列数值为abaxis试剂盘测得的血清样品中的总胆固醇浓度，y列数值为本发明实施例1提供的检测芯片测得的血清样品中的总胆固醇浓度。例如，对于1号血清样本，采用为abaxis试剂盘测试的总胆固醇浓度为4.73mmol/l，而采用本发明实施例1提供的总胆固醇检测芯片测试的1号血清样本中的总胆固醇浓度为4.75mmol/l。
[0090]
本发明实施例提供的检测芯片与abaxis试剂盘的两组测试结果之间的相关方程如下：
[0091]
y＝0.9589x+0.5667
[0092]
相关系数r＝0.9907，相关系数越接近1代表两组数据之间的相关性越强。因此，本发明实施例提供的检测芯片与abaxis试剂盘的测试结果相关性强。
[0093]
表一：总胆固醇检测芯片的临床相关系分析表。
[0094]
样本序号xy样本序号xy14.734.75264.734.7524.885.14274.885.1437.317.73287.317.7346.337.00296.337.00511.7811.403011.7811.4066.386.54316.386.5473.644.15323.644.1584.815.45334.815.4596.657.42346.657.42103.464.29353.464.29118.248.50368.248.50126.126.41376.126.41131.862.53381.862.53146.907.00396.907.00158.098.54408.098.54
168.048.36418.048.36173.133.88423.133.88188.148.06438.148.06195.876.54445.876.54209.109.28459.109.28217.347.57467.347.572211.5212.974711.5212.97236.025.92486.025.92243.624.22493.624.22256.748.04506.748.04
[0095]
(4)、线性范围测试
[0096]
测试方法如下：用接近线性范围([2，14]mmol/l)上限的高浓度(活性)样本和接近线性范围下限的低浓度(活性)样本，按表二所示，将高浓度检测样本和低浓度检测样本以不同比例混合成6个稀释浓度的检测样本。由于低浓度(活性)样本难以收集，可以以生理盐水代替。
[0097]
表二：
[0098]
样本号123456高浓度(活性)血清样本0份1份2份3份4份5份低浓度(活性)样本5份4份3份2份1份0份
[0099]
采用本发明实施例1提供的检测芯片分别测试6个血清样本的总胆固醇浓度，每个血清样本测试3次，分别求出6个血清样本中总胆固醇测得浓度值的平均值(y
i
)。以每个样本稀释后的浓度(x
i
)为自变量，以每个样本的测得浓度值均值(y
i
)为因变量求出线性回归方程。按公式(4)计算线性回归的相关系数r；公式(4)如下：
[0100][0101]
其中，n为测定样品的数量，x
i
为稀释浓度，y
i
为测定结果的平均值。
[0102]
如图2所示，得到的线性回归方程为y＝1.0254x
‑
0.0514，相关系数 r＝0.9987。
[0103]
通常，当试剂盒检测总胆固醇浓度在[2，14]mmol/l区间内的检测样本时，其线性相关系数r≥0.990，则满足要求。故，本发明实施例提供的总胆固醇检测试剂球具备线性范围宽的特点。
[0104]
(5)、热稳定性测试
[0105]
在8％空气湿度环境中，将本发明实施例1提供的总胆固醇检测试剂球装入芯片本体内形成多个检测芯片，并装入铝箔袋进行密封。
[0106]
将实施例1提供的多个检测芯片在37℃避光环境中贮存0、2、3、 4、6和8天后，分别对英国朗道公司提供的两组校准品(样本1和样本 2)中的总胆固醇浓度进行多次检测，以分析多次检测的结果的平均值和相对偏差(单位为mmol/l)，从而分析检测芯片的检测准确度，检测结果请参阅表三和表四。
[0107]
表三和表四分别为存储不同时间后的检测芯片对样本1和样本2中总胆固醇浓度
检测3次的检测结果，以及计算出的检测结果的平均值和相对偏差，其中，各个表中的靶值为相应地为样本1和样本2中总胆固醇的实际浓度。为了确保检测结果的准确度，相对偏差的绝对值应在10.0％以内。从表三和表四中可以看出，本发明实施例提供的检测芯片在37℃环境中储存2、3、4、6或8天后检测结果的相对偏差的绝对值仍在
±
10.0％以内，因此，本实施例提供的检测芯片热稳定性好。
[0108]
表三：热稳定性分析表。
[0109]
样本1123平均值靶值相对偏差0天6.996.997.127.037.030.07％2天6.826.806.916.847.03
‑
2.66％3天6.726.706.556.667.03
‑
5.31％4天6.526.416.526.487.03
‑
7.78％6天6.356.536.396.427.03
‑
8.63％8天6.326.466.376.387.03
‑
9.21％
[0110]
表四：热稳定性分析表。
[0111]
样本2123平均值靶值相对偏差0天4.164.083.964.074.050.41％2天3.873.954.023.954.05
‑
2.55％3天3.843.943.963.914.05
‑
3.37％4天3.863.743.953.854.05
‑
4.94％6天3.723.633.763.704.05
‑
8.56％8天3.733.753.683.724.05
‑
8.15％
[0112]
(6)、长期稳定性测试
[0113]
将实施例1提供的多个检测芯片在2
‑
8℃避光环境中贮存0、3、6、9、12和15个月后，分别对英国朗道公司提供的两组校准品(样本3和样本4) 中的总胆固醇浓度进行多次检测，以分析多次检测的结果的平均值和相对偏差(单位为mmol/l)，从而分析检测芯片的检测准确度，检测结果请参阅表五和表六。
[0114]
表五：长期稳定性分析表。
[0115]
样本3123平均值靶值相对偏差0月6.886.877.116.957.03
‑
1.09％3月7.006.786.846.877.03
‑
2.23％6月6.746.636.656.677.03
‑
5.07％9月6.576.616.506.567.03
‑
6.69％12月6.776.506.556.617.03
‑
6.02％15月6.286.546.476.437.03
‑
8.53％
[0116]
表六：长期稳定性分析表。
[0117]
样本4123平均值靶值相对偏差0月4.324.274.254.284.280.00％3月4.123.964.094.064.28
‑
5.22％
6月4.074.093.874.014.28
‑
6.31％9月3.954.124.014.034.28
‑
5.92％12月3.943.854.073.954.28
‑
7.63％15月3.833.973.903.904.28
‑
8.88％
[0118]
表五和表六分别为存储不同时间后的检测芯片对样本3和样本4中总胆固醇浓度检测3次的检测结果，以及计算出的检测结果的平均值和相对偏差，其中，各个表中的靶值为相应地为样本3和样本4中总胆固醇的实际浓度。为了确保检测结果的准确度，相对偏差的绝对值应在10.0％以内。从表五和表六中可以看出，本发明实施例提供的检测芯片在2
‑
8℃环境中储存3、6、9、12和15个月后，检测结果的相对偏差的绝对值仍在
±
10.0％以内，因此，本实施例提供的检测芯片在2
‑
8℃环境中长期储存后仍能确保其检测结果的准确性，长期稳定性好。
[0119]
(7)抗干扰能力测试
[0120]
取同批次同一患者的新鲜血清样本，分为对照组和实验组，其中，对照组无人为添加的干扰物，而实验组分别添加如表七所示的5种干扰物质。采用本发明实施例提供的总胆固醇检测芯片，分别对实验组和对照组的检测样本进行检测。每个检测样本重复检测三次，检测结果取平均值。对照组总胆固醇的测得浓度为7.00mmol/l，实验组的测定结果表七。
[0121]
表七：抗干扰能力分析表。
[0122][0123]
表七中相对偏差(％)＝(实验组的测得值－对照组的测得值)/对照组测得值
×
100％。从表七可以看出，实验组测得的总胆固醇的浓度与对照组测得的总胆固醇的浓度之间的偏差均不超过
±
10.0％。本发明实施例提供的总胆固醇检测试剂球和检测芯片对抗坏血酸、胆红素、血红蛋白、甘油三酯和乳酸脱氢酶均具有较强的抗干扰能力。
[0124]
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；在本发明的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，步骤可以以任意顺序实现，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为了简明，它们没有在细节中提供；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技
术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。