空间邻近化学发光法检测降钙素原的试剂盒及其检测方法和应用与流程

文档序号:26240485发布日期:2021-08-10 16:43阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种降钙素原的检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括:酶标记物、发光标记物、辅助剂、触发剂和校准品;

所述酶标记物的原料组分包括过氧化物酶标记的pct检测抗体和0.05m磷酸盐缓冲液;所述发光标记物的原料组分包括9,10-二氢吖啶标记的pct捕获抗体和0.05mtris缓冲液;所述校准品包括不同浓度pct抗原的校准品和0.1m校准品稀释液。

2.根据权利要求1所述的降钙素原的检测试剂盒,其特征在于:所述过氧化物酶标记的pct检测抗体包括辣根过氧化物酶hrp标记的pct检测抗体。

3.根据权利要求2所述的降钙素原的检测试剂盒,其特征在于:所述辣根过氧化物酶hrp标记的pct检测抗体的制备方法包括:称取5mghrp溶解于1ml蒸馏水中,之后加入0.2ml新配的0.1m过碘酸钠溶液,室温下避光搅拌20min,将上述溶液装入透析袋中,对1mmph4.4的醋酸钠缓冲液透析,4℃过夜;加入20μl0.2mph9.5碳酸盐缓冲液,然后立即加入1mg抗pct单克隆抗体室温避光轻轻搅拌2h,加新配的4mg/ml硼氢化钠液,混匀,于4℃放置2h,将上述液装入透析袋中,对0.15mph7.4pbs透析,4℃过夜;取出透析物,加适量甘油后置于-20℃冰箱保存。

4.根据权利要求1所述的降钙素原的检测试剂盒,其特征在于:所述辅助剂的组分包括发光辅助剂和ph6.0的枸橼酸盐缓冲液。

5.根据权利要求4所述的降钙素原的检测试剂盒,其特征在于:所述辅助剂的制备方法包括:称取枸橼酸1.82g,枸橼酸钠10.45g,加纯水溶解并定容至1000ml,在枸橼酸盐缓冲液中加入发光辅助剂,混匀后分装,置于4℃冰箱保存备用。

6.根据权利要求1所述的降钙素原的检测试剂盒,其特征在于:所述触发剂选用0.05mph8.0tris-hcl缓冲液。

7.根据权利要求6所述的降钙素原的检测试剂盒,其特征在于:所述触发剂的制备方法包括:称取tris6.06g,氯化钠9g,加适量纯水溶解,再加入浓hcl2.1ml混匀;之后加入吐温-202ml,混匀后定容至1000ml,分装,置于4℃冰箱保存备用。

8.根据权利要求1所述的降钙素原的检测试剂盒,其特征在于:所述发光标记物的的制备方法包括:将发光底物acridan用500μl的dmf溶解;吸取溶解的acridan41.3μl,加入0.05m硼酸钠缓冲液708.7μl,再加入250μl抗pct单克隆抗体,翻转混匀4~5次,室温静置30min;将标记反应管置于摇床上,于2~8℃下混合过夜,取出加入适量甘油后置于-20℃冰箱保存;

所述校准品的制备方法包括:配制校准品稀释液:称取磷酸二氢钾14.1g,nahpo·2ho3.0g,加超纯水溶解,proclin-3000.5~1ml,混匀后,加超纯水定容至1000ml,得到校准品稀释液,2~8℃储存备用;配制校准品:校准品的浓度为0、10ng/ml、50ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml、10000ng/ml,用所述校准品稀释液将纯化降钙素原稀释至相应浓度,2~8℃储存备用。

9.权利要求1~8任一项所述的检测试剂盒在空间邻近化学发光法非治疗目的的检测降钙素原中的应用。

10.权利要求1~8任一项所述的试剂盒在空间邻近化学发光法非治疗目的的检测降钙素原时的方法,包括步骤:s1:分别加入25μl标准品、25μl过氧化物酶标记的pct检测抗体和25μl发光标记物至化学发光反应管;s2:于37℃恒温箱反应15min;s3:分别加入5μl辅助剂至化学发光反应管,震荡混匀,静置1~2min;之后分别加入触发剂75μl,震荡混匀,立即检测,读取信号值;s4:对校准品的浓度和发光值进行logistic四参数拟合,通过样本发光值计算样本浓度。


技术总结
本发明涉及一种空间邻近化学发光法检测降钙素原的试剂盒及其检测方法和应用。试剂盒包括:酶标记物、发光标记物、辅助剂、触发剂和校准品;其中,酶标记物的原料组分包括过氧化物酶标记的PCT检测抗体和0.05M磷酸盐缓冲液;发光标记物的原料组分包括9,10‑二氢吖啶标记的PCT捕获抗体和0.05MTris缓冲液;校准品包括不同浓度PCT抗原的校准品和0.1M校准品稀释液;辅助剂的组分包括发光辅助剂和枸橼酸盐缓冲液;触发剂选用0.05MTris缓冲液。本发明提供的以非治疗为目的的检测方法作为一种真正意义上的均相化学发光技术,无需载体,没有包被、洗涤过程,试剂盒组分少,且灵敏度高、重复性好、操作简单。

技术研发人员:奚伟红;张平;廖鸳鸯;朱丹丹
受保护的技术使用者:无锡壹闪生物科技有限公司
技术研发日:2018.09.25
技术公布日:2021.08.10
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