一种通过测定糖酐含量来控制右旋糖酐铁生产投料比的方法与流程

1.本发明属于药品检测及生产技术领域，具体涉及一种通过测定糖酐含量来控制右旋糖酐铁生产投料比的方法。


背景技术：

2.右旋糖酐铁络合液是由右旋糖酐经水解、碱化后，与三氯化铁溶液发生化学(络合)反应而得，是右旋糖酐铁生产过程中的中间品。右旋糖酐铁(iron dextran)为注射用右旋糖酐铁原料，适用于驹、犊、仔猪、幼犬及毛皮兽的缺铁性贫血，是一种抗贫血药。铁为血红蛋白及肌红蛋白的主要组成成份，血红蛋白为红细胞中主要携氧者。肌红蛋白系肌肉细胞贮存氧的部位，以助肌肉运动时供氧需要。与三羧酸循环有关的大多数酶和因子均含铁，或仅在铁存在时才能发挥作用。所以对缺铁动物积极补充铁剂后，除血红蛋白合成加速外，与组织缺铁和含铁酶活性降低的有关症状如生长迟缓、行动异常、体力不足均能逐渐得以纠正。
3.右旋糖酐铁原料主要用于生产注射剂，其注射剂有多种规格：以fe计，有5％、10％、15％、20％。在右旋糖酐铁生产中，通常会有客户对右旋糖酐铁产品中的糖酐含量有一定的要求，目前尚无根据最终产品的糖酐含量要求来调整和控制右旋糖酐铁生产投料比方法。


技术实现要素：

4.针对上述问题，本发明提供一种通过测定糖酐含量来控制右旋糖酐铁生产投料比的方法。可用于右旋糖酐铁在生产络合过程中糖酐含量的测定，其能够检测右旋糖酐铁生产过程中不同投料比的右旋糖酐铁络合液的糖酐含量，并根据不同规格产品的糖酐含量要求，获得一种控制右旋糖酐铁生产投料比的方法。
5.本发明的技术方案如下：
6.一种通过测定糖酐含量来控制右旋糖酐铁生产投料比的方法，包括以下步骤：
7.(1)右旋糖酐经水解、碱化后，与三氯化铁溶液络合，获得右旋糖酐铁络合液，检测该右旋糖酐铁络合液中的含铁量；
8.(2)制备供试样品：精密称取1g右旋糖酐铁络合液，加水稀释至500ml，取此稀释后的溶液10ml再稀释至100ml，得供试样品；
9.(3)精密量取3ml上述供试样品放入冰水中冷却后再加入6ml预冷的蒽酮硫酸溶液，混匀，然后立刻浸入100℃的恒温水浴锅中进行沸水浴加热12min，取出，冷却后用分光光度计在625nm下测定吸光度；
10.(4)空白对照：用水代替右旋糖酐铁络合液，按照步骤(3)的方法测定吸光度，做空白对照；
11.(5)制备标准溶液：精密称取20mgd
‑
无水葡萄糖对照品，加水溶解并稀释至50ml，摇匀，分别精密量取0ml、1ml、2ml、3ml、4ml，稀释至25ml，获得五种不同浓度的标准溶液；
12.(6)建立标准曲线：分别精密量取3ml上述五种不同浓度的标准溶液，按照步骤(3)的方法分别测定吸光度，根据标准溶液葡萄糖浓度和吸光度制作出标准曲线，获得方程式；
13.(7)计算糖酐含量：将步骤(3)测得的供试样品的吸光度按照步骤(6)的方程式进行计算，获得葡萄糖的浓度，然后折算获得糖酐含量；
14.(8)根据步骤(1)中测得的含铁量和步骤(7)中测得的糖酐含量，折算出相应含铁量规格产品的糖酐含量，从而控制右旋糖酐铁生产过程中糖酐与铁的投料比。
15.进一步，步骤(1)中，所述的水解为将右旋糖酐原料分散于纯化水中，在酸性条件下进行水解；所述的碱化为以氢氧化钠溶液为碱化剂进行碱化。
16.进一步，所述的含铁量检测方法为：精密称取1g右旋糖酐铁络合液，依照《中华人民共和国兽药典》中检测右旋糖酐铁中含铁量的方法检测，测定样品的比重，计算出络合液中的含铁量。
17.进一步，步骤(3)中，供试样品放入冰水中冷却的温度为0℃。
18.进一步，步骤(3)中，所述的蒽酮硫酸溶液的制备方法为：将硫酸与水混合后放入冰浴中冷却至温度为0℃，再将蒽酮加入，搅拌使之溶解完全，即得。
19.进一步，所述的硫酸和水的体积比为19:1。
20.进一步，所述的蒽酮硫酸溶液中蒽酮的浓度为0.2％w/v。
21.进一步，步骤(7)中，所述的折算方法为按照每1g葡萄糖相当于0.94g右旋糖酐进行折算。
22.进一步，步骤(8)中，所述的折算方法为：以测得的右旋糖酐铁络合液的含铁量，折算出相应铁含量规格产品的糖酐含量，按照折算出的糖酐含量结合其投料比，进而调整与控制生产过程中糖酐与铁的投料比。
23.本发明的有益效果为：
24.1、本发明可用于右旋糖酐铁在生产络合过程中糖酐含量的测定，其能够检测右旋糖酐铁生产过程中不同投料比的右旋糖酐铁络合液的糖酐含量，为根据不同规格产品的糖酐含量要求，获得一种控制右旋糖酐铁生产投料比的方法。其通过检测生产投料过程中不同投料比的右旋糖酐铁络合液中含铁量和糖酐含量，折算出相应产品规格的糖酐含量，根据客户要求相应规格产品的糖酐含量来控制右旋糖酐铁生产投料比。
25.2、本发明的右旋糖酐铁络合液的糖酐含量检测方法中，右旋糖酐铁络合液的取样量为1g、沸水浴加热时间为12min，稳定性和线性良好，线性方程为a＝14.1363c+0.0012，相关系数r2＝0.99983；rsd小于0.5％，供试液2h内相对稳定，该方法用于右旋糖酐铁络合液的糖酐含量测定，准确度高，误差小，为右旋糖酐铁生产过程中的中间品右旋糖酐铁络合液的糖酐含量的检测提供了一种可行的方法。
26.3、本发明的检测方法能够简单、快速、准确地将右旋糖酐铁络合液中糖酐含量测定出来；对于溶剂的制备，先将硫酸与水混合后放入冰浴中冷却后再将称好的蒽酮加入，避免了出现颜色偏深现象或者放置时间偏长，导致颜色明显加深，从而影响吸光度的测定精度，进而影响糖酐含量的检测结果。
27.4、本发明采用分光光度法测定吸光度，由于随着沸水浴加热时间的延长，测定液颜色会随之加深，故直接影响最终检测结果，假如按每个样都加热至沸腾后才开始计时，容易造成人为因素引起误差。本发明直接设置水浴锅为100℃，保持恒温状态，从放入试管即
开始计时到取出为止，选择沸水浴加热时间为12min，这样处理的检测结果平行性好，精密度高。本发明的检测糖酐含量的方法重复性好，按分光光度法检测，相对偏差均小于0.5％，故检测结果可靠；耐用性好，测定结果稳定。
具体实施方式
28.下面通过具体实施例对本发明进行详细说明。
29.实施例1
30.一种通过测定糖酐含量来控制右旋糖酐铁生产投料比的方法，包括以下步骤：
31.(1)在生产环节的络合过程中，根据右旋糖酐的投料量来确定三氯化铁溶液的投料量，通过三氯化铁溶液的含铁量来确定其投料量，在正好投料到糖酐与铁比为1:0.7时，精密称取1g其右旋糖酐铁络合液，依照《中华人民共和国兽药典》中检测右旋糖酐铁中含铁量的方法，测定样品的比重，计算出络合液中的含铁量；
32.(2)制备供试样品：精密称取1g上述右旋糖酐铁络合液，加水稀释至500ml，取此稀释后的溶液10ml再稀释至100ml，得供试样品；
33.(3)量取3ml供试样品于试管中，放入冰水中冷却至0℃；将体积比为19:1的硫酸和水混合后放入冰浴中冷却至0℃，再将蒽酮加入，搅拌使之溶解完全，获得浓度为0.2％w/v的蒽酮硫酸溶液；将6ml蒽酮硫酸溶液加入上述试管中，混匀，然后立刻浸入100℃的恒温水浴锅中进行沸水浴加热12min，取出，冷却后用分光光度计在625nm下测定吸光度；
34.(4)空白对照：用水代替右旋糖酐铁络合液，按照步骤(3)的方法测定吸光度，做空白对照；
35.(5)制备标准品溶液：精密称取20mg d
‑
无水葡萄糖对照品加水溶解并稀释至50ml，得稀释后的d
‑
无水葡萄糖水溶液；分别取样0ml、1ml、2ml、3ml、4ml，定容至25ml，得五种不同浓度的标准品溶液；
36.(6)建立标准曲线：分别量取上述五种不同浓度的标准品溶液3ml于试管中，按照步骤(3)的方法分别测定吸光度，根据标准溶液葡萄糖浓度和吸光度制作出标准曲线，获得方程式；
37.(7)计算右旋糖酐含量：将步骤(3)测得的供试样品的吸光度按照步骤(6)的方程式进行计算，获得葡萄糖的浓度，然后按照每1g葡萄糖相当于0.94g右旋糖酐进行折算，即得右旋糖酐的含量。
38.实施例2
39.一种通过测定糖酐含量来控制右旋糖酐铁生产投料比的方法，包括以下步骤：
40.(1)在生产环节的络合过程中，根据右旋糖酐的投料量来确定三氯化铁溶液的投料量，通过三氯化铁溶液的含铁量来确定其投料量，在正好投料到糖酐与铁比为1:0.8时，精密称取1g其右旋糖酐铁络合液，依照《中华人民共和国兽药典》中检测右旋糖酐铁中含铁量的方法，测定样品的比重，计算出络合液中的含铁量；
41.(2)制备供试样品：精密称取1g上述右旋糖酐铁络合液，加水稀释至500ml，取此稀释后的溶液10ml再稀释至100ml，得供试样品；
42.(3)量取3ml供试样品于试管中，放入冰水中冷却至0℃；将体积比为19:1的硫酸和水混合后放入冰浴中冷却至0℃，再将蒽酮加入，搅拌使之溶解完全，获得浓度为0.2％w/v
的蒽酮硫酸溶液；将6ml蒽酮硫酸溶液加入上述试管中，混匀，然后立刻浸入100℃的恒温水浴锅中进行沸水浴加热12min，取出，冷却后用分光光度计在625nm下测定吸光度；
43.(4)空白对照：用水代替右旋糖酐铁络合液，按照步骤(3)的方法测定吸光度，做空白对照；
44.(5)制备标准品溶液：精密称取20mg d
‑
无水葡萄糖对照品加水溶解并稀释至50ml，得稀释后的d
‑
无水葡萄糖水溶液；分别取样0ml、1ml、2ml、3ml、4ml，定容至25ml，得五种不同浓度的标准品溶液；
45.(6)建立标准曲线：分别量取上述五种不同浓度的标准品溶液3ml于试管中，按照步骤(3)的方法分别测定吸光度，根据标准溶液葡萄糖浓度和吸光度制作出标准曲线，获得方程式；
46.(7)计算右旋糖酐含量：将步骤(3)测得的供试样品的吸光度按照步骤(6)的方程式进行计算，获得葡萄糖的浓度，然后按照每1g葡萄糖相当于0.94g右旋糖酐进行折算，即得右旋糖酐的含量。
47.实施例3
48.一种通过测定糖酐含量来控制右旋糖酐铁生产投料比的方法，包括以下步骤：
49.(1)在生产环节的络合过程中，根据右旋糖酐的投料量来确定三氯化铁溶液的投料量，通过三氯化铁溶液的含铁量来确定其投料量，在正好投料到糖酐与铁比为1:0.9时，精密称取1g其右旋糖酐铁络合液，依照《中华人民共和国兽药典》中检测右旋糖酐铁中含铁量的方法，测定样品的比重，计算出络合液中的含铁量；
50.(2)制备供试样品：精密称取1g上述右旋糖酐铁络合液，加水稀释至500ml，取此稀释后的溶液10ml再稀释至100ml，得供试样品；
51.(3)量取3ml供试样品于试管中，放入冰水中冷却至0℃；将体积比为19:1的硫酸和水混合后放入冰浴中冷却至0℃，再将蒽酮加入，搅拌使之溶解完全，获得浓度为0.2％w/v的蒽酮硫酸溶液；将6ml蒽酮硫酸溶液加入上述试管中，混匀，然后立刻浸入100℃的恒温水浴锅中进行沸水浴加热12min，取出，冷却后用分光光度计在625nm下测定吸光度；
52.(4)空白对照：用水代替右旋糖酐铁络合液，按照步骤(3)的方法测定吸光度，做空白对照；
53.(5)制备标准品溶液：精密称取20mg d
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无水葡萄糖对照品加水溶解并稀释至50ml，得稀释后的d
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无水葡萄糖水溶液；分别取样0ml、1ml、2ml、3ml、4ml，定容至25ml，得五种不同浓度的标准品溶液；
54.(6)建立标准曲线：分别量取上述五种不同浓度的标准品溶液3ml于试管中，按照步骤(3)的方法分别测定吸光度，根据标准溶液葡萄糖浓度和吸光度制作出标准曲线，获得方程式；
55.(7)计算右旋糖酐含量：将步骤(3)测得的供试样品的吸光度按照步骤(6)的方程式进行计算，获得葡萄糖的浓度，然后按照每1g葡萄糖相当于0.94g右旋糖酐进行折算，即得右旋糖酐的含量。
56.实施例4
57.一种通过测定糖酐含量来控制右旋糖酐铁生产投料比的方法，包括以下步骤：
58.(1)在生产环节的络合过程中，根据右旋糖酐的投料量来确定三氯化铁溶液的投
料量，通过三氯化铁溶液的含铁量来确定其投料量，在正好投料到糖酐与铁比为1:1.0时，精密称取1g其右旋糖酐铁络合液，依照《中华人民共和国兽药典》中检测右旋糖酐铁中含铁量的方法，测定样品的比重，计算出络合液中的含铁量；
59.(2)制备供试样品：精密称取1g上述右旋糖酐铁络合液，加水稀释至500ml，取此稀释后的溶液10ml再稀释至100ml，得供试样品；
60.(3)量取3ml供试样品于试管中，放入冰水中冷却至0℃；将体积比为19:1的硫酸和水混合后放入冰浴中冷却至0℃，再将蒽酮加入，搅拌使之溶解完全，获得浓度为0.2％w/v的蒽酮硫酸溶液；将6ml蒽酮硫酸溶液加入上述试管中，混匀，然后立刻浸入100℃的恒温水浴锅中进行沸水浴加热12min，取出，冷却后用分光光度计在625nm下测定吸光度；
61.(4)空白对照：用水代替右旋糖酐铁络合液，按照步骤(3)的方法测定吸光度，做空白对照；
62.(5)制备标准品溶液：精密称取20mg d
‑
无水葡萄糖对照品加水溶解并稀释至50ml，得稀释后的d
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无水葡萄糖水溶液；分别取样0ml、1ml、2ml、3ml、4ml，定容至25ml，得五种不同浓度的标准品溶液；
63.(6)建立标准曲线：分别量取上述五种不同浓度的标准品溶液3ml于试管中，按照步骤(3)的方法分别测定吸光度，根据标准溶液葡萄糖浓度和吸光度制作出标准曲线，获得方程式；
64.(7)计算右旋糖酐含量：将步骤(3)测得的供试样品的吸光度按照步骤(6)的方程式进行计算，获得葡萄糖的浓度，然后按照每1g葡萄糖相当于0.94g右旋糖酐进行折算，即得右旋糖酐的含量。
65.对比例1
66.与实施例3基本相同，唯有不同的是沸水浴加热时间为5min。
67.对比例2
68.与实施例3基本相同，唯有不同的是将体积比为19:1的硫酸与水混合后将蒽酮加入，搅拌使之溶解完全，再放入冰浴中冷却至0℃，获得浓度为0.2％w/v的蒽酮硫酸溶液。
69.糖酐含量测定结果
70.1、采用上海光谱仪器有限公司的紫外可见分光光度计sp
‑
1920，以实施例1～4和对比例1～2为对照，分别测定其五种浓度标准品溶液的吸光度，并计算出葡萄糖浓度，根据标准品溶液的吸光度和浓度，制作标准曲线，获取曲线方程式，结果如表1所示。
71.表1实施例1～4和对比例1～2的标准曲线情况
[0072][0073]
由表1可知，当沸水浴加热时间为12min时，相关系数为0.99983，线性相对较好。
[0074]
2、将实施例1～4和对比例1～2中步骤(3)测得的供试样品的吸光度按照对应的线性方程进行计算，获得葡萄糖的浓度；然后按照1g葡萄糖相当于0.94g右旋糖酐进行折算，获得糖酐含量，结果如表2所示。
[0075]
计算公式为：c％＝(c1/1000
×
5000
×
0.94)/(w/d)
×
100；
[0076]
式中，c为糖酐含量，％；
[0077]
c1为测得的葡萄糖的浓度，mg/ml；
[0078]
w为右旋糖酐铁络合液取样量，g；
[0079]
d为右旋糖酐铁络合液的比重，g/ml。
[0080]
表2实施例1～4和对比例1～2的右旋糖酐铁络合液中的糖酐含量
[0081][0082][0083]
由表2可知，根据本发明的检测方法可以检测出右旋糖酐铁络合液中的糖酐含量；由实施例1～4的数据可知，当糖酐和铁的投料比增大时，实际测得的糖酐含量随之降低；由实施例3和对比例1～2的数据可知，在对比例1和对比例2的检测条件下，与实施例3结果比较，实际测得的糖酐含量偏低，相对偏差均大于0.5％(分光光度法检测法相对偏差应小于0.5％)。可见，沸水浴加热时间和蒽酮硫酸溶液的制备方法对检测结果有一定的影响。
[0084]
3、根据实施例1～4和对比例1～2的步骤(1)中测得的含铁量和步骤(7)中测得的糖酐含量，以其测定的含铁量推算出注射液规格为100mg/ml和200mg/ml的产品时的糖酐含量，即获得产品含铁量为10％或20％时的糖酐含量，结果如表3所示。
[0085]
表3根据表1的结果推算出产品含铁量为10％或20％时的糖酐含量
[0086][0087][0088]
由表3可知，根据本发明的方法测得的铁含量和糖酐含量，以其测定的含铁量推算出注射液规格为100mg/ml和200mg/ml的产品时的糖酐含量，即获得产品含铁量为10％或20％时的糖酐含量，按照推算出的糖酐含量结合其投料比，即可调整与控制实际生产过程中的糖酐与铁投料比。
[0089]
由实施例3和对比例1～2的数据可知，对比例1和对比例2的检测方法，使得实际测得的糖酐含量均偏低，推算成fe含量为10％或20％时的糖酐含量结果也偏低。
[0090]
重复性实验
[0091]
根据某客户要求含铁量为20％(即200mg/ml)的右旋糖酐铁注射液的糖酐含量应达到15％以上，按照表3的推算结果，投料比为1:0.85时可确保糖酐含量符合要求。按照本发明实施例1～4的方法分别进行三批次的投料和检测，并增加对投料比为1:0.85进行取样验证，各检测结果相对偏差情况如表4所示：
[0092]
表4三个批次生产过程右旋糖酐铁络合液的糖酐含量检测情况
[0093]
[0094][0095]
由表4可知，按分光光度法的检测，平行样的相对偏差均小于0.5％，投料1:0.85时，糖酐含量为15.31％～15.43％，符合客户的质量要求，检测结果可靠，验证结果相符。
[0096]
耐用性实验
[0097]
取实施例3供试样品分别放置0.5h，1h，1.5h，2.0h，再次上机检测，结果如表5所示。
[0098]
表5不同放置时间的检测情况
[0099][0100]
由表5可知，溶液放置2小时后，测试溶液相对稳定，但与首次测定结果含量下降0.08％，相对偏差为0.45％，因此，尽量在冷却后及时测定。