一种用于检测人脂联素的磁微粒化学发光试剂盒的制作方法

1.本发明涉及免疫检测分析技术领域，具体来说，涉及一种用于检测人脂联素的磁微粒化学发光试剂盒，适用于人血清脂联素定量检测。


背景技术：

2.脂联素(adiponectin/adpn)是由脂肪细胞分泌的一种内源性生物活性多肽或蛋白质，具有多种生物学效应，在细胞增殖，胰岛素拮抗及炎症，免疫等过程中发挥重要调节作用。对人体的研究发现，脂联素水平能预示ii型糖尿病和冠心病的发展，并在临床试验表现出抗糖尿病、抗动脉粥样和炎症的潜力。
3.脂联素由位于染色体3q27位点的adipoq基因编码合成，该基因有3个外显子和2个内含子组成，人体内脂联素由244个氨基酸组成分为4个区域：球状域(活性关键部位)、胶原区、可变区和氨基末端信号序列。脂联素单体只存在于脂肪细胞中，脂联素在血浆中低分子质量三聚体、中分子质量六聚体和高分子质量聚合物形式存在。
4.脂联素作为一种胰岛素超敏化激素(an insulin
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sensitizing hormone),可以增加促进骨骼肌细胞的脂肪酸氧化和糖吸收，明显加强胰岛素的抑制糖原异生作用，抑制肝脏的糖生成,是机体的脂质代谢和血糖稳态的调控网络中的重要调节因子。脂联素可以降低单核细胞的粘附作用,单核细胞可以使thp-1细胞在人体大动脉内皮组织排列成行，而这种粘附作用发生在动脉粥样硬化血管壁损伤的早期。脂联素可以降低单核细胞的粘附作用,单核细胞可以使thp-1细胞在人体大动脉内皮组织排列成行，而这种粘附作用发生在动脉粥样硬化血管壁损伤的早期。脂联素可以抑制tnf的生成与释放，具有一定的抗炎症作用，对酒精性肝损伤有重要的细胞保护作用。
5.脂联素(adpn)是一种主要由脂肪细胞分泌的蛋白类激素，大量存在于血液循环中，约占人血浆总蛋白的0.01％(5-30μg/ml)在调节胰岛素敏感性，及葡萄糖代谢的过程中扮演重要角色。
6.脂联素(adpn)是一种可对2型糖尿病进行早期风险预测的新指标。
7.血液中脂联素(adpn)水平与体重、腹部肥胖、胰岛素抵抗均成负相关。
8.不同于血糖和糖化血红蛋白这两个糖尿病诊断指标，脂联素(adpn)是糖尿病的风险预测指标。通过脂联素(adpn)可筛查出血糖尚且正常，但机体生理代谢已经出现异常的糖尿病高风险人群，脂联素(adpn)可动态反映机体的胰岛素抵抗水平，与个体代谢健康息息相关。
9.目前已知的脂联素检测方法主要有酶联免疫法(elisa)、免疫比浊法、乳胶增强免疫比浊法。但是，这些方法都存在一定的缺陷，elisa法自动化程度低且操作复杂繁琐，免疫比浊法、乳胶增强免疫比浊法抗原或抗体量大大过剩，可出现可溶性复合物，造成误差，容易受到脂血的影响。因此，目前尚需一种灵敏度高、操作简单、自动化程度高、特异性好、成本低的脂联素的快速定量检测方法。
10.针对相关技术中的问题，目前尚未提出有效的解决方案。


技术实现要素：

11.本发明的目的在于提供一种用于检测人脂联素的磁微粒化学发光试剂盒，以解决上述背景技术中提出的问题。
12.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于检测人脂联素的磁微粒化学发光试剂盒，包括磁性微球溶液、发光标记物、荧光素标记物、脂联素标准品a、脂联素标准品b、脂联素标准品c、脂联素标准品d、脂联素标准品e、脂联素标准品f、脂联素质控和浓缩洗液，具体成分及含量如下：
13.磁性微球溶液：tris缓冲液，0.6％(w/v)，0.2％nan3,包被兔抗fitc多克隆抗体；
14.发光标记物：抗脂联素单克隆抗体标记abei，含牛血蛋白，0.2％nan3；
15.荧光素标记物：抗脂联素单克隆抗体标记fitc，含牛血清蛋白，0.2％nan3；
16.脂联素标准品a：0.00ng/ml,含牛血清蛋白，0.2％nan3；
17.脂联素标准品b：2.00ng/ml,含牛血清蛋白，0.2％nan3；
18.脂联素标准品c：6.00ng/ml,含牛血清蛋白，0.2％nan3；
19.脂联素标准品d：30.00ng/ml,含牛血清蛋白，0.2％nan3；
20.脂联素标准品e：150.00ng/ml,含牛血清蛋白，0.2％nan3；
21.脂联素标准品f：300.00ng/ml,含牛血清蛋白，0.2％nan3；
22.脂联素质控：牛血清蛋白，0.2％nan
3；
23.浓缩洗液：tris缓冲液，室温保存；
24.其具体测试步骤如下：
25.1)分别将100μl标准品、质控品、标本加入到各自试管中，加入发光标记物40μl，加荧光素标记物40μl，混匀，37℃温育30分钟；
26.2)加磁性微球溶液40μl，混匀，37℃温育5分钟，上磁分离器分离4分钟，弃上清液；
27.3)加工作洗液400μl，混匀，上磁分离器分离4分钟，弃上清液；
28.4)重复步骤3，加入鲁米诺和过氧化氢，检测相对光强度；
29.5)上机测试，脂联素浓度与相对光强度成一定的比例关系；
30.6)计算和结果借助于主曲线定标而得到的一条定标曲线，自动地计算每个样本中脂联素蛋白的浓度，结果以ng/ml表示。
31.进一步的，所述工作洗液为浓缩洗液加水稀释至100ml制得。
32.进一步的，所述标准品包括脂联素标准品a、脂联素标准品b、脂联素标准品c、脂联素标准品d、脂联素标准品e、脂联素标准品f。
33.进一步的，所述质控品为脂联素质控。
34.与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明提供的一种用于检测人脂联素的磁微粒化学发光试剂盒简便快速、耗时短，本发明试剂盒孵育过程和洗涤过程简单，整个过程操作时间在1h内，步骤少。
附图说明
35.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获
得其他的附图。
36.图1是根据本发明实施例的一种用于检测人脂联素的磁微粒化学发光试剂盒的成分及计量示意框图。
具体实施方式
37.下面，结合附图以及具体实施方式，对本发明做出进一步的描述：
38.请参阅图1，根据本发明实施例的一种用于检测人脂联素的磁微粒化学发光试剂盒,包括磁性微球溶液、发光标记物、荧光素标记物、脂联素标准品a、脂联素标准品b、脂联素标准品c、脂联素标准品d、脂联素标准品e、脂联素标准品f、脂联素质控和浓缩洗液，具体成分及含量如下：
39.磁性微球溶液：tris缓冲液，0.6％(w/v)，0.2％nan3,包被兔抗fitc多克隆抗体；
40.发光标记物：抗脂联素单克隆抗体标记abei，含牛血蛋白，0.2％nan3；
41.荧光素标记物：抗脂联素单克隆抗体标记fitc，含牛血清蛋白，0.2％nan3；
42.脂联素标准品a：0.00ng/ml,含牛血清蛋白，0.2％nan3；
43.脂联素标准品b：2.00ng/ml,含牛血清蛋白，0.2％nan3；
44.脂联素标准品c：6.00ng/ml,含牛血清蛋白，0.2％nan3；
45.脂联素标准品d：30.00ng/ml,含牛血清蛋白，0.2％nan3；
46.脂联素标准品e：150.00ng/ml,含牛血清蛋白，0.2％nan3；
47.脂联素标准品f：300.00ng/ml,含牛血清蛋白，0.2％nan3；
48.脂联素质控：牛血清蛋白，0.2％nan
3；
49.浓缩洗液：tris缓冲液，室温保存；
50.其具体测试步骤如下：
51.1)分别将100μl标准品、质控品、标本加入到各自试管中，加入发光标记物40μl，加荧光素标记物40μl，混匀，37℃温育30分钟；
52.2)加磁性微球溶液40μl，混匀，37℃温育5分钟，上磁分离器分离4分钟，弃上清液；
53.3)加工作洗液400μl，混匀，上磁分离器分离4分钟，弃上清液；
54.4)重复步骤3，加入鲁米诺和过氧化氢，检测相对光强度；
55.5)上机测试，脂联素浓度与相对光强度成一定的比例关系；
56.6)计算和结果借助于主曲线定标而得到的一条定标曲线，自动地计算每个样本中脂联素蛋白的浓度，结果以ng/ml表示。
57.最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限定本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。