喷他佐辛注射液中乳酸的检测方法与流程

1.本发明涉及分析检测技术领域，具体涉及喷他佐辛注射液中乳酸的检测方法。


背景技术：

2.喷他佐辛，化学名称为(2rs,6rs,11rs)-1,2,3,4,5,6-六氢6,11-二甲基-3-(3-甲基-2-丁烯基)-2,6-甲撑-3-苯并吖辛因-8-醇，是苯并吗啡类激动剂-拮抗剂阿片类药物中的一种合成镇痛剂，具有激动作用和弱阿片样物质拮抗活性。喷他佐辛注射液活性成分为喷他佐辛，非活性成分包括：乳酸、氯化钠以及注射用水。乳酸的主要作用是将喷他佐辛注射液的体系ph调节至4～5，同时作为助溶剂，以保证喷他佐辛注射液中有效成分喷他佐辛的浓度维持在30mg/ml，但是乳酸的存在，还会与喷他佐辛反应生成乳酸喷他佐辛，影响喷他佐辛注射液的疗效，因此，需要确定喷他佐辛注射液中乳酸的含量。
3.目前，文献报道的乳酸测定方法主要有气相色谱法。然而，气相色谱法测定乳酸有局限性，乳酸热稳定性差，在高温气化室中易分解，故需将乳酸衍生化为酯类后再进行测定，操作较为复杂，也可能会有基体干扰的存在，导致检测结果准确性不高。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供了一种喷他佐辛注射液中乳酸的检测方法。本发明提供的检测方法可以实现对喷他佐辛注射液中乳酸的准确测定。
5.为了实现上述发明目的，本发明提供了一种喷他佐辛注射液中乳酸的检测方法，包括以下步骤：
6.将待测样品和无机强酸混合，静置12～24h，得到待测样品液；
7.采用液相色谱对所述待测样品液进行检测，得到待测样品的色谱图；
8.将所述待测样品的色谱图与预定的标准谱图进行对比，采用外标法计算得到待测样品中乳酸的含量；
9.所述液相色谱的检测条件包括：流动相为磷酸水溶液-乙腈体系；所述流动相的流速为1ml/min；检测波长为215nm；洗脱方式为等度洗脱。
10.优选地，所述磷酸水溶液-乙腈体系中磷酸水溶液和乙腈的体积比为97.5：2.5。
11.优选地，所述磷酸水溶液中磷酸的体积浓度为0.1％。
12.优选地，所述液相色谱的色谱柱为capcell pak c
18
mg柱；柱温为35℃；进样量为20μl。
13.优选地，所述无机强酸包括盐酸、硫酸和硝酸中的一种或几种。
14.优选地，所述无机强酸的浓度为0.5～1.5mol/l。
15.优选地，所述喷他佐辛注射液和无机强酸的体积比为1：140～500。
16.本发明提供了一种喷他佐辛注射液中乳酸的检测方法，包括以下步骤：将待测样品和无机强酸混合，静置12～24h，得到待测样品液；采用液相色谱对所述待测样品液进行检测，得到待测样品的色谱图；将所述待测样品的色谱图与预定的标准谱图进行对比，采用
外标法计算得到待测样品中乳酸的含量；所述液相色谱的检测条件包括：流动相为磷酸水溶液-乙腈体系；所述流动相的流速为1ml/min；检测波长为215nm；洗脱方式为等度洗脱。本发明首先利用无机强酸和待测样品混合，静置12～24h，使得乳酸喷他佐辛(少量乳酸和喷他佐辛发生反应，生成的副产物)发生解离，形成乳酸和强酸喷他佐辛，消除因喷他佐辛与乳酸进行反应导致的基底效应，为液相色谱对乳酸的检测提供基础；然后，利用液相色谱对待测样品液进行检测，通过对液相色谱条件的限制，实现对喷他佐辛注射液中乳酸的高准确度检测。
附图说明
17.图1为实施例1中空白溶液的色谱图；
18.图2为实施例1中基底溶液的色谱图；
19.图3为实施例1中乳酸对照品溶液的色谱图；
20.图4为实施例1中供试品溶液的色谱图；
21.图5为乳酸对照品溶液的线性曲线图。
具体实施方式
22.本发明提供了一种喷他佐辛注射液中乳酸的检测方法，包括以下步骤，将待测样品和无机强酸混合，静置12～24h，得到待测样品液；
23.采用液相色谱对所述待测样品液进行检测，得到待测样品的色谱图；
24.将所述待测样品的色谱图与预定的标准谱图进行对比，采用外标法计算得到待测样品中乳酸的含量。
25.在本发明中，若没有特殊说明，所采用的试剂均为本领域技术人员所熟知的市售商品。
26.在本发明中，所述无机强酸优选包括盐酸、硫酸和硝酸中的一种或几种，进一步优选为盐酸。在本发明中，所述无机强酸的浓度优选为1mol/l。在本发明中，所述待测样品和无机强酸的体积比优选为1：140～500，进一步优选为1：200。
27.得到待测样品液后，本发明采用液相色谱对所述待测样品液进行检测。在本发明中，所述液相色谱的检测条件包括：流动相为磷酸水溶液-乙腈体系；所述磷酸水溶液-乙腈体系中磷酸水溶液和乙腈的体积比优选为97.5：2.5；所述磷酸水溶液中磷酸的体积浓度优选为0.1％。在本发明中，所述流动相的流速为1ml/min；检测波长为215nm；洗脱方式为等度洗脱；色谱柱优选为capcell pak c18 mg柱；柱温优选为35℃；进样量优选为20μl。
28.在本发明中，所述预定的标准谱图的获取方法优选包括：
29.称取乳酸对照品，用无机强酸配置成浓度为0.035mg/ml、0.052mg/ml、0.069mg/ml、0.086mg/ml、0.104mg/ml和0.121mg/l的乳酸贮备液，然后按照液相色谱的检测条件进行检测；
30.以峰面积为横坐标，浓度为纵坐标，得到所述预定的标准谱图。
31.本发明实施例中，所述预定的标准谱图的获取方法中具体选择的无机强酸优选为盐酸。
32.下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显
然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
33.在本发明的实施例中，液相色谱的检测条件如下所示：
34.色谱柱为：资生堂提供的capcell pak c
18
mg柱(250mm
×
4.6mm，5μm)；柱温为35℃；进样量为20μl；流动相为磷酸水溶液-乙腈体系；所述磷酸水溶液-乙腈体系中磷酸水溶液和乙腈的体积比为97.5：2.5；所述磷酸水溶液中磷酸的体积浓度为0.1％；所述流动相的流速为1ml/min；检测波长为215nm；洗脱方式为等度洗脱。
35.实施例1
36.一、工作液的配制
37.1、空白溶液的配制：准确量取浓盐酸90ml，加水稀释至1000ml，混匀，得到空白溶液(1mol/l的盐酸)。
38.2、乳酸贮备液的配制：精密称量乳酸对照品16mg，置100ml量瓶中，加空白溶液溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为乳酸贮备液。
39.3、基底贮备液配制：精密称取喷他佐辛原料药15mg、氯化钠1.4mg，置同一10ml量瓶中，加空白溶液适量，超声溶解后，稀释至刻度，摇匀，作为基底贮备液。
40.4、基底溶液配制：精密量取基底贮备液0.5ml，置5ml量瓶中，加空白溶液溶解，并稀释至刻度，摇匀，室温放置24h，作为基底溶液。
41.5、乳酸对照品溶液配制：精密量取基底贮备液0.5ml、乳酸贮备液2.5ml，置5ml量瓶中，加空白溶液溶解，并稀释至刻度，摇匀，室温放置24h，作为乳酸对照品溶液。
42.6、供试品溶液的配制：精密量取待测样品0.5ml，置100ml量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，室温放置24h，得到供试品溶液。
43.二、专属性检测
44.取空白溶液、基底溶液、乳酸对照品溶液、供试品溶液，按照液相色谱的检测条件进行检测，检测色谱图见图1～4。其中图1为空白溶液的色谱图；
45.图2为基底溶液的色谱图；图3为乳酸对照品溶液的色谱图；图4为供试品溶液的色谱图。从图1～4可知：空白溶液不干扰乳酸的测定，供试品溶液中主峰保留时间与乳酸对照品溶液中乳酸保留时间一致，说明检测方法具有良好的专属性。
46.三、线性标准曲线
47.分别取浓度0.035mg/ml、0.052mg/ml、0.069mg/ml、0.086mg/ml、0.104mg/ml和0.121mg/l的乳酸贮备液各20μl按照液相色谱的检测条件进行检测。检测结果见图5，从图5可知，线性方程为y＝674.92x+0.4364，线性相关系数为0.9997，由此说明：乳酸在0.035mg/ml～0.121mg/ml范围内，线性关系良好。
48.四、准确度测试
49.取喷他佐辛原料药约15mg，氯化钠1.4mg，置100ml量瓶中，分别加入80％、100％和120％乳酸浓度的乳酸对照品，加空白溶液溶解，并稀释至刻度，摇匀。各平行制备3份，得到加标供试品溶液；将所得加标供试品溶液按照液相色谱的检测条件进行检测，得到检测结果，见表1。
50.表1准确度测试结果
[0051][0052]
由表1可知：加标供试品溶液的回收率在97.40％～101.6％之间，9份加标供试品溶液的回收率的rsd为1.3％，符合可接受标准。
[0053]
五、稳定性测试
[0054]
分别取乳酸对照品溶液和供试品溶液于不同时间点进行液相色谱检测，记录检测结果，见表2。从表2可知：27小时内乳酸对照品溶液中乳酸峰面积相对于0h的峰面积，回收率在100.0～108.0％之间；16h内供试品溶液中乳酸峰面积相对于0h峰面积回收率在100.0％～100.5％之间，说明对照品溶液和供试品溶液稳定性良好。
[0055]
表2稳定性测试结果
[0056][0057][0058]
六、重复性试验
[0059]
取6份供试品溶液按照液相色谱的检测条件进行检测，记录检测结果，见表3。
[0060]
表3重复性试验检测结果
[0061][0062]
从表3可知，6份供试品溶液峰面积rsd％为0.2％，符合要求。
[0063]
注：实施例1中的所有供试品溶液测试均是在工作液进行高温灭菌后进行的测试，所述高温灭菌的温度为121℃，时间为15min。
[0064]
实施例2
[0065]
一、溶液的配置：
[0066]
①
按照实施例1基底贮备液的配制，配置得到基底贮备液；
[0067]
在所述基底贮备液加入100％乳酸浓度的乳酸对照品，作为待测制剂(灭菌前)，然后，将部分待测制剂进行高温灭菌(温度为121℃，时间为15min)，得到灭菌后的待测制剂。
[0068]
②
精密量取待测制剂(灭菌前)0.5ml，置100ml量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，室温放置24h，得到供试品溶液(灭菌前)；
[0069]
精密量取待测制剂(灭菌后)0.5ml，置100ml量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，室温放置24h，得到供试品溶液(灭菌后)。
[0070]
③
与
②
的区别仅仅在于，将配置过程中的盐酸替换为等量的水。
[0071]
二、检测：
[0072]
将
②
～
③
制备的供试品溶液按照液相色谱的检测条件进行检测，检测结果见表4。
[0073]
表4供试品溶液、灭菌前、后的检测结果
[0074]
供试品溶液灭菌前峰面积灭菌后峰面积水稀释32.5840.95酸稀释45.6545.56
[0075]
从表4可知：用盐酸配制的供试品溶液灭菌前和灭菌后的峰面积几乎一致。而用水配制的供试品溶液灭菌前和灭菌后峰面积存在较大差异，证明用强酸处理待测样品可以有效的消除基底效应。
[0076]
实施例3
[0077]
按照实施例2“一、溶液的配置”的供试品溶液的配置方法，得到灭菌前后的供试品溶液，并将其分别静置不同的时间段后，进行检测，得到的检测结果，见表5。
[0078]
表5不同时间供试品溶液的检测结果
[0079][0080]
从表5可知：0h供试品溶液(灭菌前)与供试品溶液(灭菌后)峰面积差异较大，在强酸环境中放置24h后，供试品溶液(灭菌前)与供试品溶液(灭菌后)峰面积已趋于稳定，证明在强酸环境中放置24h后可以消除因喷他佐辛与乳酸进行酸碱反应导致的基底效应。
[0081]
实施例4
[0082]
加标供试品溶液的配制：
[0083]
①
按照实施例1基底贮备液的配置，得到基底贮备液；
[0084]
在所得基底贮备液中分别加入90％、100％和110％乳酸浓度的乳酸对照品后进行高温灭菌(温度为121℃，时间为15min)，得到灭菌后的加标制剂溶液。
[0085]
②
精密量取灭菌后的加标制剂溶液0.5ml，置100ml量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，室温放置24h，得到加标供试品溶液。
[0086]
③
与
②
的区别仅仅在于，将盐酸替换为水。
[0087]
将
②
、
③
获得的加标供试品溶液按照液相色谱的检测条件进行检测，记录检测结果，见表6，用水稀释后的加标供试品溶液回收率在117.3％～125.9％之间，回收率均值为122.2％，3份回收试验溶液回收率的rsd为3.6％；用1m hcl稀释放置24h后，每个水平下的加标供试品溶液回收率在99.63％～102.7％之间，回收率均值为101.0％，3份回收试验溶液回收率的rsd为1.6％，符合要求。
[0088]
表6加标供试品溶液的检测结果
[0089][0090]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。