一种抗酸染色法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种细菌染色方法，尤其是涉及一种抗酸染色法。
【背景技术】
[0002]抗酸染色法(acid-faststaining method)是 1882 年由埃利希(F.Ehrlich)首创并经F.齐尔(Ziehl)改进而创造出的细菌染色法。其中最具代表性的为对结核菌的齐尔-尼尔森(Ziehl-Neelsen)染色法和齐尔_加贝特(Ziehl-Gabbet)染色法。用石炭酸复红染色后，用盐酸乙醇脱色，再用美蓝进行对比染色。
[0003]抗酸染色的原理如下:分枝杆菌(含结核菌)的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
[0004]齐尔-尼尔森抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美蓝复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
[0005]抗酸染色一般步骤如下:
[0006]I)初染:用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热5分钟，待标本冷却后用水冲洗。
[0007]2)脱色:3%盐酸酒精脱色3分钟；用水冲洗。
[0008]3)复染:用碱性美蓝溶液复染30秒，水洗，用吸水纸吸干后用油镜观察。
[0009]上述抗酸染色过程中染液的配制如下:
[0010]1、石炭酸复红:碱性品红酒精饱和溶液1mL及5%石炭酸90mL混合；
[0011]2、3%盐酸酒精:浓盐酸3mL与95%酒精97mL混合；
[0012]3、吕氏美蓝液:美蓝酒精饱和液30mL与氢氧化钾(1:10000) 10mL混合。
[0013]以上是常规的抗酸染色步骤,为三步染色和三次水洗,其操作比较复杂、浪费水和时间长。现代实验室工作繁忙和成本高，对各项技术方法有力求简便和节约的要求，以便在有限的时间和成本内完成更多的任务。
[0014]中国专利CN101126689A公开了一种革兰染色二步法，该方法是取洁净的载玻片，从试剂盒中取10?30ML(1小滴)初染剂(A剂)滴加到载玻片上，再取约与染液等量的待检材料均匀涂片，15秒后，涂片不用干，立即滴加30?60ML(2小滴)的复染剂(B剂)覆盖标本，15秒左右，水洗，干后镜检。在涂片处，可见到染成浅红色的革兰阴性菌和染成深紫色的革兰阳性菌，对比鲜明。与现有技术相比，本发明具有操作简便、方法可靠、性价比好、结果易于观察和判断、且不污染环境等优点。但是革兰染色与抗酸染色在细菌学上是两种不同的染色法，其用途和实际意义不一样，革兰染色法对于抗菌染色法的参考意义不大。
【发明内容】
[0015]本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种染色步骤简单、染色时间短、染色可不加热的抗酸染色法。
[0016]本发明的目的可以通过以下技术方案来实现:
[0017]一种抗酸染色法，包括以下步骤:
[0018](I)取洁净的玻片，将待检材料涂片在玻片上，并干燥、固定，得到标本；
[0019](2)滴加初染剂覆盖住标本，染色I?2分钟，可加热和不加热，倾去初染剂，不水洗；
[0020](3)滴加脱色复染剂，覆盖住标本，染色25?35秒，水洗，干后镜检。
[0021]进一步地，所述的初染剂为含1.0?2.0wt %的碱性品红和5?7wt%的苯酚的溶液。
[0022]更进一步地,所述的初染剂为含1.6wt%的碱性品红和6.4界1:%的苯酹的溶液。
[0023]进一步地，所述的溶液为蒸馏水、丙酮或体积分数为95%的乙醇。
[0024]进一步地，所述的脱色复染剂为0.6?0.8wt%的美蓝溶液。
[0025]更近一步地，所述的脱色复染剂为0.Swt %的美蓝溶液。
[0026]进一步地,所述的待检材料包括细菌培养物、送检分泌物或体液。
[0027]进一步地,所述的初染剂的滴加量为I?3ml,所述的脱色复染剂的滴加量为I?3ml。
[0028]进一步地，步骤(3)中镜检后，染成红色的待检材料为抗酸阳性菌，染成蓝色的待检材料为抗酸阴性菌，对比鲜明。
[0029]与现有技术相比，本发明具有以下优点及有益效果:
[0030](I)本发明的抗酸染色法，是只用二种染色液和只需二步染色及一次水洗，可做到快速简便节水的染色。而经典的抗酸染色三步法，染液有初染液、脱色液和复染液三种，染色需三步染色、三次水洗和加温，染色时间8分钟30秒，整个过程要10分钟左右。因此本发明的方法比常归使用的齐尔-尼尔森染色法，染色时间节省60%，水节省60%以上和染液生产及包装物流成本各降低25%。本发明的方法在染色时加热和不加热均可；可用于人工和自动化染色，有利于染色标准化和自动化。本发明的方法可靠、结果鲜明易于观察和判断。
[0031](2)本发明的抗酸染色法或试剂盒将有重要的实际应用价值和很好的市场前景，有利于生物或医疗实践，有利于商品化运输，且安全可靠，有很大的潜在市场，可产生明显的社会及经济效益。
[0032](3)本发明的方法是更快速、更方便、更节约、更人性化的抗酸染色方法。
【具体实施方式】
[0033]下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
[0034]实施例1
[0035]取洁净的玻片和待检材料(体液)按常规要求涂片，干燥和火焰或丙酮固定。先滴加3ml初染剂(为含1.6wt%的碱性品红和6.4wt%的苯酚的蒸馏水溶液)覆盖标本，染色2分钟，顷斜去染液，不水洗，再滴加3ml脱色复染剂(0.8wt%的美蓝溶液)覆盖标本，染色30秒，水洗，干后镜检。在涂片中可见到，染成红色的为抗酸阳性菌和染成兰色的为抗酸阴性菌，对比鲜明。
[0036]实施例2
[0037]取洁净的玻片和待检材料(送检分泌物)按常规要求涂片，干燥和火焰或丙酮固定。先滴加2ml初染剂(为含1.0wt^的碱性品红和5.4wt%的苯酚的丙酮溶液)覆盖标本，染色I分钟，顷斜去染液，不水洗，再滴加2ml脱色复染剂(0.8wt%的美蓝溶液)覆盖标本，染色30秒，水洗，干后镜检。在涂片中可见到，染成红色的抗酸阳性菌和染成兰色的抗酸阴性菌，对比鲜明。
[0038]实施例3
[0039]取洁净的玻片和待检材料(细菌培养物)按常规要求涂片，干燥和火焰或丙酮固定。先滴加Iml初染剂(为含2.0wt%的碱性品红和7.0wt%的苯酚的乙醇溶液)覆盖标本，染色1.5分钟，顷斜去染液，不水洗，再滴加Iml脱色复染剂(0.8wt%的美蓝溶液)覆盖标本，染色30秒，水洗，干后镜检。在涂片中可见到，染成红色的为抗酸阳性菌和染成兰色的为抗酸阴性菌，对比鲜明。
[0040]实施例4
[0041]一种抗酸染色法，包括以下步骤:
[0042](I)取洁净的玻片，将待检材料(细菌培养物)涂片在玻片上，并干燥、固定，得到标本；
[0043](2)滴加Iml初染剂(为含1.0wt %的碱性品红和5wt%的苯酚的丙酮溶液)覆盖住标本，染色I分钟，倾去初染剂，不水洗；
[0044](3)滴加Iml脱色复染剂(0.6wt%的美蓝溶液)，覆盖住标本,染色25秒,/K洗，干后镜检，镜检后，染成红色的待检材料为抗酸阳性菌，染成蓝色的待检材料为抗酸阴性菌，对比鲜明。
[0045]实施例5
[0046]一种抗酸染色法，包括以下步骤:
[0047](I)取洁净的玻片，将待检材料(细菌培养物)涂片在玻片上，并干燥、固定，得到标本；
[0048](2)滴加3ml初染剂(为含2.0wt %的碱性品红和7wt %的苯酚的水溶液)覆盖住标本，染色2分钟，倾去初染剂，不水洗；
[0049](3)滴加3ml脱色复染剂(0.7wt%的美蓝溶液)，覆盖住标本,染色35秒,/K洗，干后镜检，镜检后，染成红色的待检材料为抗酸阳性菌，染成蓝色的待检材料为抗酸阴性菌，对比鲜明。
【主权项】
1.一种抗酸染色法，其特征在于，包括以下步骤: (1)将待检材料涂片在玻片上，并干燥、固定，得到标本； (2)滴加初染剂覆盖住标本，染色I?2分钟，倾去初染剂； (3)滴加脱色复染剂,覆盖住标本,染色25?35秒，水洗，干后镜检。
2.根据权利要求1所述的一种抗酸染色法，其特征在于，所述的初染剂为含1.0?.2.0wt%的碱性品红和5?7被％的苯酚的溶液。
3.根据权利要求2所述的一种抗酸染色法，其特征在于，所述的初染剂为含1.6wt%的碱性品红和6.4被％的苯酚的溶液。
4.根据权利要求2或3所述的一种抗酸染色法，其特征在于，所述的溶液为蒸馏水、丙酮或体积分数为95%的乙醇。
5.根据权利要求1所述的一种抗酸染色法，其特征在于，所述的脱色复染剂为0.6?.0.8wt%的美蓝溶液。
6.根据权利要求5所述的一种抗酸染色法，其特征在于，所述的脱色复染剂为0.8wt%的美蓝溶液。
7.根据权利要求1所述的一种抗酸染色法，其特征在于，所述的待检材料包括细菌培养物、送检分泌物或体液。
8.根据权利要求1所述的一种抗酸染色法，其特征在于，所述的初染剂的滴加量为I?.3ml，所述的脱色复染剂的滴加量为I?3ml。
9.根据权利要求1所述的一种抗酸染色法，其特征在于，步骤(3)中镜检后，染成红色的待检材料为抗酸阳性菌，染成蓝色的待检材料为抗酸阴性菌，对比鲜明。
【专利摘要】本发明涉及一种抗酸染色法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将待检材料涂片在玻片上，并干燥、固定，得到标本；(2)滴加初染剂覆盖住标本，染色1～2分钟，倾去初染剂；(3)滴加脱色复染剂，覆盖住标本，染色25～35秒，水洗，干后镜检；初染剂为含1.0～2.0wt％的碱性品红和5～7wt％的苯酚的溶液，脱色复染剂为0.6～0.8wt％的美蓝溶液。与现有技术相比，本发明的方法在染色时加热和不加热均可；可用于人工和自动化染色，有利于染色标准化和自动化，本发明的方法可靠、结果鲜明易于观察和判断。
【IPC分类】G01N1-30
【公开号】CN104568551
【申请号】CN201310495973
【发明人】叶鹰, 叶鸿, 杨玄墨, 徐燕萍, 徐晨
【申请人】苏州微利特生物科技有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2013年10月18日