D-3-羟丁酸酶法检测试剂盒及其制备方法

D-3-羟丁酸酶法检测试剂盒及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物试剂，具体涉及一种检测试剂盒，尤其涉及一种酶法检测D-3-羟 丁酸的试剂盒及其制备方法。
【背景技术】
[0002] D-3-羟丁酸是血中酮体的主要成份（占78%)，可以反映酮体生成的情况。当酮症 酸中毒时，D-3-羟丁酸明显升高，因而，D-3-羟丁酸可用于酮症酸中毒早期诊断与治疗监 控，并可指导糖尿病的灭酮治疗及疗效监控。在酮症酸中毒时，患者对胰岛素产生拮抗作 用，导致蛋白质合成障碍和蛋白质讲解代谢，这就可通过测定早晨空腹血糖，来了解严重损 伤、急重疾病、败血症以及营养支持的病人体内脂肪蛋白质的动员情况。对减肥、限食或妊 娠呕吐者，测定D-3-羟丁酸有助于监测饥饿酮症酸中毒的发生。
[0003] -般，D-3-羟丁酸测定方法有酶法、气相色谱法、放射化学法、毛细管等速电泳法 等。放射化学方法由于辐射，化学物质难以接受，毛细管等速电泳操作时间长，操作复杂， 不适合临床应用。酶法试剂配成液体试剂后不能长期保存，而且酶的价格很昂贵，难以大 量使用，因此，需要改进测定方法。D-3-羟基丁酸测定有显色法，气相色谱法，放射化学法， 毛细管等速电泳法等。D-3-羟基丁酸测定有显色法，气相色谱法，放射化学法，毛细管等速 电泳法等。
[0004] 本实验采用酶动力学法来测定血液或血清中的D-3-羟丁酸。在D-3-羟丁酸脱 氢酶的催化作用下，D-3-羟丁酸被氧化，生成乙酰乙酸，同时NAD +被还原为NADH，NADH在 340nm处有最大吸收峰，其吸光度值与D-3-羟丁酸的浓度呈正相关。通过添加 D-3-羟丁酸 脱氢酶稳定剂，从而使D-3-羟丁酸试剂盒成本大大降低，满足临床使用的要求。
[0005] 糖尿病酮症酸中毒是一临床常见病，多发病，原因是血酮体增高引起，D-3-羟基丁 酸酮体重要组成部分，占酮体总量70 %，酮症诊断治疗不及时将有生命危险，D-3-羟基丁 酸测定有显色法，气相色谱法，放射化学法，毛细管等速电泳法等。糖尿病酮症酸中毒是一 临床常见病，多发病，原因是血酮体增高引起，D-3-羟基丁酸酮体重要组成部分，占酮体总 量70 %，酮症诊断治疗不及时将有生命危险，D-3-羟基丁酸测定有显色法，气相色谱法，放 射化学法，毛细管等速电泳法等。糖尿病酮症酸中毒是一临床常见病，多发病，原因是血酮 体增高引起，D-3-羟基丁酸酮体重要组成部分，占酮体总量70%，酮症诊断治疗不及时将 有生命危险，D-3-羟基丁酸测定有显色法，气相色谱法，放射化学法，毛细管等速电泳法等。

【发明内容】

[0006] 本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，研究设计采用酶动力学法的 试剂，测定血液或血清中的D-3-羟丁酸。
[0007] 本发明提供了一种酶法检测D-3-羟丁酸试剂盒，该试剂盒由下列试剂1和试剂2， 按3份：1份的比例组成：
[0008] 试剂I :(3L)(试剂体积）
[0013] 所述试剂1的缓冲液选自TRIS (三轻甲基氨基甲烧）tris (hydroxymethyl) aminomethane)、MOPS (3-(N_ 吗啉）丙横酸 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid)、 BICINE(N，N-双（2-羟乙基甘氨酸）或HEPES (4-羟乙基哌嗪乙磺酸4-(2-hydroxyethyl) -1-piperazineethanesulfonic acid)。
【主权项】
1. 酶法检测D-3-羟丁酸试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由下列试剂1和试剂2,按3 份：1份的比例组成： 试剂I :3L试剂体积 缓冲液 10 -200丨腦〇1/1, D-3-MT 酸脱:M+酶 50-200U/L 聚氣W烯聚鉍乙烯共聚物 ]-3g/L 0.1-2g/L 太-离了水加至总体积为 3L ； 试剂2 : IL试剂体积 1Y(酸盐 10-200 mmol/L %〔化型辅酶 0.卜IOmmo 1/1, 佥紙钠 〇. l-2g/L 去离子水加至总体枳为 IL 〇
2. 根据权利要求1所述的酶法检测D-3-羟丁酸试剂盒，其特征在于， 所述试剂1的缓冲液选自三羟甲基氨基甲烷、3-(N-吗啉）丙磺酸、N，N-双（2-羟乙基 甘氨酸）或4-羟乙基哌嗪乙磺酸。
3. 根据权利要求1所述的酶法检测D-3-羟丁酸试剂盒，其特征在于， 所述试剂1的聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物选自F108、F127或F68。
4. 根据权利要求3所述的酶法检测D-3-羟丁酸试剂盒，其特征在于，所述试剂1的聚 氧丙烯聚氧乙烯共聚物为F108。
5. 制备权利要求1所述酶法检测D-3-羟丁酸试剂盒的方法，其特征在于，该方法包括 下列步骤： (一） 制备试剂1: 3L试剂体积 (1) 先向容器内加入为总量80%的去离子水； (2) 依次加入缓冲液、D-3-羟丁酸脱氢酶、聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物、叠氮钠； (3) 加入D-3-羟丁酸脱氢酶； (4) 最后加入剩余量的去离子水至总体积为3L混合均匀，即得； (二） 制备试剂2: IL试剂体积 向容器内依次加入草酸盐、氧化型辅酶、叠氮钠，去离子水加至总体积为IL混合均匀， 即得。
【专利摘要】本发明提供了一种酶法检测D-3-羟丁酸试剂盒，该试剂盒由下列试剂1和试剂2，按3份∶1份的比例组成：试剂1：（3L）（试剂体积）缓冲液10-200mmol/L、D-3-羟丁酸脱氢酶50-200U/L、聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物1-3g/L、叠氮钠0.1-2g/L、去离子水加至总体积为3L；试剂2：（1L）（试剂体积）草酸盐10-200mmol/L、氧化型辅酶0.1-10mmol/L、叠氮钠0.1-2g/L、去离子水加至总体积为1L。本发明通过添加D-3-羟丁酸脱氢酶稳定剂，对试剂中的酶有很强的保护作用，从而使D-3-羟丁酸试剂盒的稳定性提高，成本大大降低，有较大的临床应用价值。
【IPC分类】G01N21-31, G01N33-52, G01N21-78
【公开号】CN104730230
【申请号】CN201310714654
【发明人】景晟, 孙卫兵, 张跃建
【申请人】上海复星医药（集团）股份有限公司, 上海复星长征医学科学有限公司
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2013年12月23日