一种坤灵丸的质量检测方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种坤灵丸的质量检测方法，属于药物分析技术领域。
【背景技术】
[0002] 坤灵丸是一种中药复方制剂，其功能主治为调经养血，逐癒生新。用于月经不调， 或多或少，行经腹痛，子宫寒冷，久不受孕，习惯性流产，赤白带下，崩漏不止，病久气虚，肾 亏腰痛。
[0003] 坤灵丸的处方如下：
[0004] 【处方】
[0005] ( -）香附（制）37g甘草7g白薇14g益母草14g黄茂14g鸡冠花14g麦冬 14g北五味子14g地黄14g红花14g木通lOg白术（炒）14g赤石脂14g巧冬14g厚朴 lOg肉巧蓉（制）14g白巧（酒炒）14g
[0006] (二）香附（制）37g荆芥lOg牡丹皮14g阿胶14g当归14g蔓本lOg红参14g 鹿角胶14g川贝母14g没药（炒）14g砂仁14g延胡索14g小茵香（盐制）14g龟甲胶 14g川写14g
[0007] 【制法】W上处方（一）十走味，加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并 煎液，滤过，滤液放置24小时，取上清液加入米醋280g，浓缩成稠膏。W上处方（二）十五 味，粉碎成中粉，加入上述稠膏中，混匀，干燥，粉碎成细粉，过筛，混匀，用黄酒泛丸，制成 1800丸，包糖衣或薄膜衣，打光，干燥，即得。
[0008] 由于中药化学成分复杂，作用机制不明确，致使现有中药制药技术难W确保中药 产品质量稳定性，坤灵丸现行标准收载于中华人民共和国卫生部药品标准《中药成方制剂》 第十册，标准中未涉及任何针对药味的定性定量控制项目，发明人对坤灵丸的有效成分进 行了研究。发现其中含有多种水溶性与醇溶性成分，本发明人有针对性的对送些成分进行 了研究，建立了一种坤灵丸的检测方法，对生产中的坤灵丸进行质量监督，W确保产品质 量。
【发明内容】
[0009] 本发明目的在于提供一种坤灵丸的质量检测方法，为该制剂的质量控制提供更完 善的检测方法。
[0010] 本发明所述的质量检测方法，包括鉴别方法和含量测定方法。
[0011] 本发明首先提供一种坤灵丸的鉴别方法，该方法包括对W下中药的鉴别：
[0012] A牡丹皮鉴别
[0013] B当归-川写-蔓本鉴别
[0014] C延胡索鉴别 [001引 D白巧鉴别 [0016] E红参鉴别
[0017] F香附鉴别
[0018] 本发明的鉴别方法采用薄层色谱法，共有6项，可W使用其中一项作为对坤灵丸 的鉴别方法，也可W多项组合使用作为对坤灵丸的鉴别方法，优选的是多项组合使用，最优 选的是6项组合使用。
[0019] 其次，本发明还包括对坤灵丸中的有效成分丹皮酪进行含量测定，含量测定方法 采用高效液相色谱法。
[0020] 本发明的鉴别方法，优选采用W下方法：
[0021] A牡丹皮鉴别
[0022] 供试品溶液的制备；取坤灵丸薄膜衣丸8g~12g、糖衣丸12~18g，采用研细方 式，加稀盐酸1~4ml，加己離20~50ml，加热回流15~40min，滤过，滤液回收溶剂至干， 残渣加己酸己醋1~3ml使溶解，作为供试品溶液。
[0023] 对照药材溶液的制备：取牡丹皮对照药材0. 8~1. 2g，加稀盐酸1~4ml，加己離 20~50ml，加热回流15~40min，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加己酸己醋1~3ml使溶 解，作为对照药材溶液。
[0024] 对照品溶液的制备；取丹皮酪对照品适量，加己酸己醋制成每1ml含0. 8~1. 2mg 的溶液，摇匀，即得。
[00巧]阴性样品溶液的制备；通过查询文献，白巧中也含有微量的丹皮酪，故按处方配 比，取除牡丹皮、白巧外的其他药材，按制备工艺制备样品，再按供试品溶液制备方法制成 阴性样品溶液。
[002引鉴别；照薄层色谱法（附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液5~10 μ 1、对照药材 溶液、丹皮酪对照品溶液、阴性样品溶液各5~15 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，W石 油離化0~9(TC)-己酸己醋巧~3 : 1)为展开剂，展开，取出，瞭干，喷W盐酸酸性5% Η氯化铁己醇溶液（每100ml 5%H氯化铁己醇溶液中，加入盐酸1~5滴，混匀，即得）。 供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无 干扰。见附图（1)。
[0027] B当归-川写-蔓本鉴别
[002引供试品溶液的制备；同牡丹皮供试品溶液的制备。
[0029] 对照药材溶液的制备；分别取当归对照药材、川写对照药材、蔓本对照药材各 0. 8~1. 2g，分别加己離20~50ml，水浴回流15~40min，取出，放冷，滤过，滤液回收己離 至干，残渣分别加己酸己醋1~3ml使溶解，作为当归对照药材溶液，川写对照药材溶液，蔓 本对照药材溶液。
[0030] 阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除当归、川写、蔓本外的其他药材，按制备工 艺制备样品，再按供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。
[0031] 鉴别；照薄层色谱法（中国药典2010版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液及 上述对照药材与阴性样品溶液各5~15 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，W正己焼-己 酸己醋-甲酸（95~70:5~30:1)为展开剂，展开，取出，瞭干，置紫外光灯（366nm)下检 视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的英光斑点，阴性样品无 干扰。见附图（2)。
[0032] C延胡索鉴别
[0033] 供试品溶液的制备；取坤灵丸适量，研成细粉，称取1. 5~2. 5g，加0. 1~0. 3mol/ L的氨氧化钢溶液5~15ml,超声15~25min后，加入己酸己醋5~20ml,振摇萃取，2000~ 3000转/min离必3~lOmin,取上清液，即得。
[0034] 对照药材溶液的制备：取延胡索对照药材0. 3~1. Og于20~100ml圆底烧瓶中， 加氨水0. 3~0. 8ml浸润，加二氯甲焼5~15ml，5(TC~7(TC水浴回流0. 5~比，滤过，挥 干，用甲醇1~3ml溶解，即得。
[0035] 对照品溶液的制备；取延胡索己素对照品适量，加甲醇制成每1ml含0. 15~ 0. 25mg的溶液，作为对照品溶液。
[0036] 阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除延胡索外的其他药材，按制备工艺制备样 品，再按供试品溶液制备方法，制成缺延胡索的阴性样品溶液。
[0037] 鉴别；照薄层色谱法（中国药典2010版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶 液、对照药材溶液与阴性样品溶液各5~10 μ 1、对照品溶液2~10 μ 1，分别点于同一硅胶 G薄层板上，W正己焼-二氯甲焼-甲醇-浓氨巧~8 : 2~5 : 0.5~1.5 : 0.1)为展 开剂，展开，取出，瞭干，置贿蒸气中熏至斑点显色清晰后取出，挥尽板上吸附的贿后，置紫 外光灯（366nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同 颜色的英光斑点，阴性样品无干扰。见附图（3)。
[0038] D白巧鉴别
[0039] 供试品溶液的制备；取坤灵丸适量，研细，称取薄膜衣丸12~18g(糖衣丸15~ 20g)，加甲醇30~70ml，加热回流0. 5~比，滤过，滤液蒸干，残渣加水15~25ml使溶解， 用水饱和的正了醇振摇提取2~3次，每次15~25ml，合并正了醇提取液，用氨试液3~ 8ml洗涂，用正了醇饱和的水洗2~3次，每次10~20ml，弃去水洗液，正了醇液蒸干，残渣 加无水己醇1~3ml溶解，作为供试品溶液。
[0040] 对照品溶液的制备；取巧药巧对照品，加甲醇制成每1ml含0. 8~1. 2mg的溶液， 作为对照品溶液。
[0041] 阴性样品溶液的制备：通过文献查阅发现，处方中牡丹皮与白巧同属毛畏科植物， 其主要成分中亦含巧药巧，故按处方配比，取除白巧、牡丹皮外的其他药材，按制备工艺制 备样品，再按供试品溶液制备方法制成白巧、牡丹皮双阴性样品溶液，结果阴性无干扰。
[0042] 鉴别；照薄层色谱法（中国药典2010版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液及阴 性样品溶液各10~20 μ 1、对照品溶液5~15 μ 1，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，W Η氯甲焼-己酸己醋-甲醇-甲酸（30~45:3~6:5~15:0.4)为展开剂，展开，取出，喷 W 1%~5%香草醒硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱图中，在与对照品 色谱图相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。见附图（4)。
[004引 E红参鉴别
[0044] 供试品溶液的制备；用白巧供试品溶液。
[0045] 对照品溶液的制备；取人参皂巧Rgl、人参皂巧化1、人参皂巧Re对照品适量，加甲 醇制成每1ml分别含有人参皂巧Rgl、人参皂巧化1、人参皂巧Re各0. 8~1. 2mg的溶液， 作为对照品溶液。
[0046] 对照药材溶液的制备：取红参对照药材0. 8~1. 2g，W下操作同供试品溶液处理 方法，作为对照药材溶液。
[0047] 阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除红参外的其他药材，按制备工艺制备样 品，再按供试品溶液制备方法制成红参阴性样品溶液。
[0048] 鉴别；照薄层色谱法（中国药典2010版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液及阴 性样品溶液各15~20 μ 1、对照药材溶液及对照品溶液5~20 μ 1，分别点于同一高效硅胶 G薄层板（烟台板）上，氯甲焼-甲醇-水巧0~70:20~40:5~20)5~1(TCW下 放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，喷W 5~10%硫酸己醇溶液，在105°C加热至斑 点显色清晰。供试品色谱图中，在与对照品及对照药材色谱图相应的位置上，显示相同颜色 的斑点。阴性样品无干扰。见附图巧）。
[004引 F香附鉴别
[0050] 供试品溶液的制备；用牡丹皮供试品溶液。
[0051] 对照品溶液的制备；取α -香附丽对照品适量，加甲醇制成每1ml含有α -香附丽 0. 8~1. 2mg的溶液，作为对照品溶液。
[0052] 对照药材溶液的制备：取香附对照药材0. 8~1. 2g，加入稀盐酸1~3ml，加己離 20~40ml回流20~40min，放至室温，滤过，回收溶剂至近干，W己醇1~3ml复溶，即得。
[0053] 阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除香附外的其他药材，按制备工艺制备样 品，再按供试品溶液制备方法制成香附阴性样品溶液。
[0054] 鉴别；照薄层色谱法（中国药典2010版一部附录VI B)试验，取上述薄膜衣丸供 试品溶液10-20 μ 1、糖衣丸供试品溶液20-25 μ 1、对照品溶液1-10 μ 1和对照药材溶液 10-20 μ 1点于同一高效硅胶G薄层板（Macher巧-Nagel F254高效薄层板）上，W甲苯-己 酸己醋-甲酸（85~95 ;3~8 ;3~8)为展开剂，展开，取出，瞭干，置紫外光灯（254nm)下 检视。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷W 二硝基苯阱试液，放置片刻，在日光下观察。在供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱 相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品无干扰。见附图化）。
[0055] 本发明的含量测定方法，所述的丹皮酪含量测定方法，步骤如下：
[0056] ①供试品溶液的制备：取坤灵丸，粉碎后加入50~70%甲醇溶液中，超声处理后 加50~70%甲醇溶液定容至刻度，过微孔滤膜，即得；
[0057] ②对照品溶液的制备；取丹皮酪对照品适量，加50%~70%甲醇溶液制成每1ml 含14~18 μ g丹皮酪的溶液，即得；
[0058] ⑨含量测定；分别吸取对照品溶液与供试品溶液各5~10 μ 1，注入高效液相色谱 仪，得到色谱图，经计算得到坤灵丸中丹皮酪的含量，必要时可W使用阴性对照品溶液W排 除干扰；
[0059] 其中色谱条件为：W十八烷基娃焼键合硅胶为填充剂为W下填充剂的一种 Shima化U VP-0DS150X4. 6mm 色谱柱、Dikma Diamomsi]_-C185 μ m, 250 X 4. 6mm 色谱柱、 Agilent ZORBAX SB-C185 μ m, 250X4. 6mm，色谱柱及 Waters2695-2489、Waters 2695-PDA; W 30~60 : 70~40的甲醇-水为流动相；检测波长为270~278皿；流速0. 6~1. 5ml/ min;柱温25~35°C，进样量5~15