L-丙氨酰-l-丙氨酸的定量检测方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及L-丙氨酰-L-丙氨酸的定量检测技术领域。
【背景技术】
[0002] L-丙氨酰-L-丙氨酸是重要的生化试剂和化工中间体，同时也是一种正在开发的 氨基酸类药物，为了能够利用L-丙氨酰氨基丙酸，就需要对其含量进行检测，从而判断产品 质量情况。但是，目前为止，现有技术中还没有一种检测L-丙氨酰-L-丙氨酸含量的方法。
【发明内容】
[0003] 本发明要解决的技术问题是提供一种L-丙氨酰-L-丙氨酸的定量检测方法，采用 高效液相色谱外标法，能够快速、准确的测定化工生产产物中L-丙氨酰-L-丙氨酸的含量， 适于工业生产中使用。
[0004] 为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是:L-丙氨酰-L-丙氨酸的定量检 测方法，使用高效液相色谱法检测，所用色谱柱为氨基键合硅胶柱，柱温为30°C;以乙腈_ 0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液645:350为流动相，其磷酸二氢钾缓冲盐用磷酸调PH=4.0， 流速为0.7 ml/min;检测波长为215nm; 检测步骤为： 1) 将待测样品用流动相稀释制备成为样品待测液，将L-丙氨酰-L-丙氨酸标准品溶于 流动相制备成为标准溶液； 2) 将样品待测液、标准溶液分别采用相同的检测条件用高效液相色谱仪检测，得到样 品待测液色谱图、标准溶液色谱图，通过外标法测算出待测样品中L-丙氨酰-L-丙氨酸的含 量。
[0005] 所述外标法测算待测样品中L-丙氨酰-L-丙氨酸的含量方法为： X = C样X待测样品的稀释倍数=(CkXAft/AW X待测样品的稀释倍数， 式中:C*t为标准溶液中L-丙氨酰-L-丙氨酸的浓度，单位为mg/ml; A*t为标准溶液色谱图的峰面积或峰高； A#为样品待测液色谱图的峰面积或峰高； C样为样品待测液中待测溶液的浓度，单位为mg/ml。
[0006] 进一步地，样品待测液和标准溶液的色谱柱进样量均为20 μL。
[0007] 进一步地，样品待测液和标准溶液均经过0.45 μπι的有机滤膜过滤 采用上述技术方案所产生的有益效果在于:本发明能够简便、快速、准确的测定化工生 产产物中L-丙氨酰-L-丙氨酸的含量，可以检测化工生产中L-丙氨酰-L-丙氨酸的含量，从 而有针对性的对L-丙氨酰-L-丙氨酸进行回收，从而起到提高收益的积极效果，具有显著的 社会效益，适于工业生产中使用。
【具体实施方式】
[0008] 为了解决现有技术化工生产中没有一种快速、准确检测L-丙氨酰-L-丙氨酸含量 的方法，导致不能对化工产品或中间产物中L-丙氨酰-L-丙氨酸含量的有效检测和控制，本 发明提供了一种L-丙氨酰-L-丙氨酸的定量检测方法，采用高效液相色谱外标法，能够快 速、准确的测定化工生产产物中L-丙氨酰-L-丙氨酸的含量，适于工业生产中使用，便于对 化工产品或中间产物中L-丙氨酰-L-丙氨酸进行监测，从而调整生产工艺，提高生产效益。
[0009] 下面对本发明作进一步详细的说明。
[0010] -种L-丙氨酰-L-丙氨酸的检测方法，其步骤如下： 1)标准溶液的制备:称取标品L-丙氨酰-L-丙氨酸固体25 mg至25 ml容量瓶中，用流动 相定容；将溶液用0.45 μπι的有机滤膜过滤，取1 ml滤液至100 ml容量瓶中并用流动相定 容，即得标准溶液。
[0011] 2)样品待测溶液的制备:将液相待测样品用0.45 μπι的有机滤膜过滤，然后用流动 相稀释为样品待测溶液。
[0012] 3)将标准溶液和样品待测溶液分别用高效液相色谱法检测，检测条件为： 用氨基键合硅胶柱为填充剂，以乙腈-〇. 〇5mol/L磷酸二氢钾溶液(645:350)为流动相， 检测波长为215nm，其磷酸二氢钾缓冲盐用磷酸调PH=4.0，柱温为30°C，流速为0.7 ml/min; 4)含量计算:待测样品液中L-丙氨酰-L-丙氨酸的含量为： X = C#X待测样品的稀释倍数=(Q^XA#/Ast) X待测样品的稀释倍数， 式中:C*t为标准溶液中L-丙氨酰-L-丙氨酸的浓度，单位为mg/ml; A*t为标准溶液色谱图的峰面积或峰高； A#为样品待测液色谱图的峰面积或峰高； C样为样品待测液中待测溶液的浓度，单位为mg/ml。
[0013] 实施例1-3 实施例1-3分别取不同的L-丙氨酰-L-丙氨酸样品，按上述方法测量，测量数据见下表。
[0014]
【主权项】
1. L-丙氨酰-L-丙氨酸的定量检测方法，其特征在于:使用高效液相色谱法检测。2. 根据权利要求1所述的L-丙氨酰-L-丙氨酸的定量检测方法，其特征在于，所用色谱 柱为氨基键合硅胶柱，柱温为30°C;以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液645:350为流动 相，其磷酸二氢钾缓冲盐用磷酸调PH=4.0，流速为0.7 ml/min;检测波长为215nm; 检测步骤为： 1) 将待测样品用流动相稀释制备成为样品待测液，将L-丙氨酰-L-丙氨酸标准品溶于 流动相制备成为标准溶液； 2) 将样品待测液、标准溶液分别采用相同的检测条件用高效液相色谱仪检测，得到样 品待测液色谱图、标准溶液色谱图，通过外标法测算出待测样品中L-丙氨酰-L-丙氨酸的含 量。3. 根据权利要求2所述的L-丙氨酰-L-丙氨酸的定量检测方法，其特征在于所述外标法 测算待测样品中L-丙氨酰-L-丙氨酸的含量方法为： X = C#X待测样品的稀释倍数=(Q^XA#/A*t) X待测样品的稀释倍数 式中:C*t为标准溶液中L-丙氨酰-L-丙氨酸的浓度，单位为mg/ml; A*t为标准溶液色谱图的峰面积或峰高； A#为样品待测液色谱图的峰面积或峰高； C样为样品待测液中待测溶液的浓度，单位为mg/ml。4. 根据权利要求2所述的L-丙氨酰-L-丙氨酸的定量检测方法，其特征在于样品待测液 和标准溶液的色谱柱进样量均为20 μL。5. 根据权利要求2所述的L-丙氨酰-L-丙氨酸的定量检测方法，其特征在于样品待测液 和标准溶液均经过0.45 μπι的有机滤膜过滤。
【专利摘要】本发明涉及L-丙氨酰-L-丙氨酸的定量检测技术领域，具体公开了一种L-丙氨酰-L-丙氨酸的定量检测方法，使用高效液相色谱法检测，所用色谱柱为氨基键合硅胶柱，柱温为30℃；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液645:350为流动相，其磷酸二氢钾缓冲盐用磷酸调PH=4.0，流速为0.7？ml/min；检测波长为215nm；通过外标法测算出待测样品中L-丙氨酰-L-丙氨酸的含量。本发明能够简便、快速、准确的测定化工生产产物中L-丙氨酰-L-丙氨酸的含量，能够用于化工生产中检测L-丙氨酰-L-丙氨酸的含量，适于工业生产中使用。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105510497
【申请号】CN201510851390
【发明人】李斌水, 何连顺
【申请人】精晶药业股份有限公司
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2015年11月30日