用于阑尾炎的诊断和预后及腹痛病因的区分的方法和组合物的制作方法
【专利说明】用于阑尾炎的诊断和预后及腹痛病因的区分的方法和组合物
[0001 ]本申请要求2013年9月20日提交的美国临时专利申请61/880,765的优先权，其在 此以其整体并入，包括所有表格、图片和权利要求。
[0002] 发明背景
[0003] 仅提供对本发明背景的以下讨论以帮助读者理解本发明并且不应认为是描述或 构成本发明的现有技术。
[0004] 急性阑尾炎是一种炎性疾患，其通常由阑尾腔的原发性阻塞导致。一旦阻塞，阑尾 随后膨胀、腔内和阑尾壁内压力升高，从而导致血栓形成和小血管闭塞及淋巴回流郁积。阑 尾炎的致病因子包括异物、创伤、肠蠕虫、淋巴腺炎及最常见的被称为阑尾石或粪石的钙化 粪便沉积物。诊断基于病史、症状和体检。典型的阑尾炎通常包括在肚脐区域开始的持续数 小时的与厌食症、恶心或呕吐相关的腹痛。所述疼痛通常停留在右下腹内。
[0005]通常使用的诊断字首组合词是PALF:疼痛、厌食症、白血球增多症和发烧。非典型 的病史缺乏这种典型进展，并且可能包括右下腹疼痛作为起始症状。非典型的病史通常需 要用超声和/或CT扫描成像。在50%的病例中，用于阑尾炎的血液测试是正常的，但诊断不 是如此。这些测试倾向于相对简单。血液中白细胞数目异常增多是体内发生感染或炎症的 粗略指标。此类增多并非仅对阑尾炎是特异性的。如果其异常升高而良好的病史和检查结 果指向阑尾炎，那么患有所述疾病的可能性更高。成像测试诸如CT尽管有用，但是使得接受 者暴露于诊断水平的辐射。
[0006] 就生物标志物而言，C-反应蛋白（CRP)，一种急性-期反应蛋白，由肝响应于炎性过 程而产生，如已由临床医师使用。类似地，其它常见炎性标志物诸如原降钙素、白细胞介素_ 6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、高迀移率族蛋白盒-1 (HMGB1)S100A8/A9等已被临床医师研 究。然而，就像白细胞那样，不存在阑尾炎的特异性生物标志物，并因此展现了使用中较差 的特异性。富亮氨酸α-2-糖蛋白（LRG)最近表明是小儿族群中阑尾炎的一种更特异性的指 标。Kentsis 等，Ann · Emerg .Med.55:62-70.e4.Epub 2009年 6 月 25 日；Kharbanda 等， Academic Emerg.Med.19:56-62,2012〇
[0007] 本领域仍然需要一种有助于诊断和护理阑尾炎的快速、客观、临床上精确、可用的 诊断工具。
[0008] 发明概述
[0009] 本发明涉及鉴定和使用阑尾炎的诊断标志物。本文所述的方法和组合物可满足本 领域对用于诊断和区分腹痛及鉴定阑尾炎的快速、灵敏且特异性诊断测定的需求。在各个 方面，本发明涉及用于鉴定与相关诊断、预后或区分患者阑尾炎的标记物的材料和程序;涉 及使用此类标记物诊断并治疗患者和/或监测治疗方案过程;涉及使用标记物鉴定处于一 种或多种与阑尾炎相关的不利结果风险的受试者;及用于筛选可提供治疗或预防此类疾患 益处的化合物和药物组合物。
[0010]在第一方面，本发明公开了用于确定与阑尾炎相关的诊断或预后或用于区分腹痛 病因的方法。如本文所述，测量一种或多种选自由以下组成的组的生物标志物:72kDa IV型 胶原酶、脂联素、高度糖基化终产物-特异性受体、α-2巨球蛋白、α-2-HS-糖蛋白、甲胎蛋白、 血管生成素-1、抗白细胞蛋白酶、载脂蛋白（a)、癌抗原15-3、癌抗原19-9、碳酸酐酶9、癌胚 抗原-相关细胞粘附分子5、C-C基序趋化因子1、C-C基序趋化因子13、C-C基序趋化因子15、 C-C基序趋化因子17、C-C基序趋化因子19、C-C基序趋化因子20、C-C基序趋化因子21、C-C基 序趋化因子22、C-C基序趋化因子23、C-C基序趋化因子24、C-C基序趋化因子26、C-C基序趋 化因子27、C-C基序趋化因子3、C-C基序趋化因子4、C-C基序趋化因子7、C-C基序趋化因子8、 血浆铜蓝蛋白、绒毛膜促性腺激素β亚基、胶原酶3、C-肽、肌酸激酶-MB、C-X-C基序趋化因子 10、C-X-C基序趋化因子11、C-X-C基序趋化因子13、C-X-C基序趋化因子16、C-X-C基序趋化 因子5、C-X-C基序趋化因子6、C-X-C基序趋化因子9、半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C、内皮蛋白C 受体、嗜酸细胞活化趋化因子、表皮生长因子受体、铁蛋白、纤维蛋白原、抑胃多肽、胰高血 糖素、胰高血糖素-样肽1、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、生长调控α、β和γ蛋白、肝素结 合生长因子2、肝细胞生长因子、免疫球蛋白Α、免疫球蛋白Μ、免疫球蛋白G1、免疫球蛋白G2、 免疫球蛋白G3、免疫球蛋白G4、胰岛素、胰岛素-样生长因子-结合蛋白1、胰岛素-样生长因 子-结合蛋白2、胰岛素-样生长因子-结合蛋白3、胰岛素-样生长因子-结合蛋白4、胰岛素-样生长因子-结合蛋白5、胰岛素-样生长因子-结合蛋白6、胰岛素-样生长因子-结合蛋白7、 干扰素α-2、干扰素γ、白细胞介素-1α、白细胞介素-1β、白细胞介素-1受体诘抗剂蛋白、白 细胞介素-1受体I型、白细胞介素-1受体Π型、白细胞介素-11、白细胞介素-12、白细胞介 素-12β亚基、白细胞介素-13、白细胞介素-15、白细胞介素-2、白细胞介素-20、白细胞介素-21、白细胞介素-23、白细胞介素-28Α、白细胞介素-29、白细胞介素-3、白细胞介素-33、白细 胞介素-4、白细胞介素-5、白细胞介素-6受体α亚基、白细胞介素-6受体β亚基、白细胞介素-7、白细胞介素_9、间质胶原酶、胰岛淀粉样多肽、角蛋白、I型细胞骨架19(aa311-367)、Kit 配体、瘦蛋白、白血病抑制因子、淋巴细胞趋化因子、淋巴毒素-α、巨噬细胞集落刺激因子1、 巨噬细胞金属弹性蛋白酶、巨噬细胞迀移抑制因子、基质溶解因子、金属蛋白酶抑制剂1、金 属蛋白酶抑制剂2、金属蛋白酶抑制剂3、金属蛋白酶抑制剂4、肌红蛋白、胰腺激素原、肽ΥΥ、 促-表皮生长因子、促-白细胞介素-16、催乳素、前列腺-特异性抗原、蛋白质S100-A12、促转 化生长因子α、分泌型免疫球蛋白Α、血清淀粉样蛋白Ρ-组分、SL细胞因子、基质细胞衍生因 子1、溶基质素-1、血小板生成素、胸腺基质淋巴细胞生成素、肿瘤坏死因子、肿瘤坏死因子 配体超家族成员10、肿瘤坏死因子配体超家族成员6、肿瘤坏死因子受体超家族成员1Α、月中 瘤坏死因子受体超家族成员1Β、血管内皮生长因子受体1、血管内皮生长因子受体2、血管内 皮生长因子受体3、冯威利布兰德因子(von Willebrand ?8(：1:〇1')和14?四二硫核心结构域 蛋白质2(为了方便，各自在本文中被称为"阑尾炎生物标志物"）可用于诊断、预后、风险分 级、监测、分类和确定患有或疑似患有阑尾炎的患者的进一步的诊断和治疗方案。本发明的 阑尾炎生物标志物可单独使用或在包括多种阑尾炎生物标志物的群组中使用。在获自受试 者的样品中此类标志物的存在或此类标志物的量可用于划入或排除阑尾炎，并监测受试者 改善或恶化与阑尾炎相关的疾患。
[0011]在第一方面，本发明涉及评估阑尾炎患者或正评估可能诊断的患者的方法。这些 方法包括进行测定方法，所述方法经配置以检测一种或多种选自由以下组成的组的生物标 志物:72kDa IV型胶原酶、脂联素、高度糖基化终产物-特异性受体、α-2巨球蛋白、α-2-HS-糖蛋白、甲胎蛋白、血管生成素-1、抗白细胞蛋白酶、载脂蛋白（a)、癌抗原15-3、癌抗原 ?碳酸酐酶 9、癌胚抗原-相关细胞粘附分子 5、C-C 基序趋化因子 1、C-C 基序趋化因子 13、C-C 基序趋化因子15、C-C基序趋化因子17、C-C基序趋化因子19、C-C基序趋化因子20、C-C基序 趋化因子21、C-C基序趋化因子22、C-C基序趋化因子23、C-C基序趋化因子24、C-C基序趋化 因子26、C-C基序趋化因子27、C-C基序趋化因子3、C-C基序趋化因子4、C-C基序趋化因子7、 C-C基序趋化因子8、血浆铜蓝蛋白、绒毛膜促性腺激素β亚基、胶原酶3、C-肽、肌酸激酶-MB、 C-X-C基序趋化因子10、C-X-C基序趋化因子11、C-X-C基序趋化因子13、C-X-C基序趋化因子 16、C-X-C基序趋化因子5、C-X-C基序趋化因子6、C-X-C基序趋化因子9、半胱氨酸蛋白酶抑 制剂-C、内皮蛋白C受体、嗜酸细胞活化趋化因子、表皮生长因子受体、铁蛋白、纤维蛋白原、 抑胃多肽、胰高血糖素、胰高血糖素-样肽1、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、生长调控α、β 和γ蛋白、肝素结合生长因子2、肝细胞生长因子、免疫球蛋白Α、免疫球蛋白Μ、免疫球蛋白 G1、免疫球蛋白G2、免疫球蛋白G3、免疫球蛋白G4、胰岛素、胰岛素-样生长因子-结合蛋白1、 胰岛素-样生长因子-结合蛋白2、胰岛素-样生长因子-结合蛋白3、胰岛素-样生长因子-结 合蛋白4、胰岛素-样生长因子-结合蛋白5、胰岛素-样生长因子-结合蛋白6、胰岛素-样生长 因子-结合蛋白7、干扰素α-2、干扰素γ、白细胞介素-1α、白细胞介素-1β、白细胞介素-1受 体拮抗剂蛋白、白细胞介素-1受体I型、白细胞介素-1受体Π型、白细胞介素-11、白细胞介 素-12、白细胞介素_12β亚基、白细胞介素-13、白细胞介素-15、白细胞介素-2、白细胞介素-20、白细胞介素_21、白细胞介素-23、白细胞介素-28Α、白细胞介素-29、白细胞介素-3、白细 胞介素-33、白细胞介素-4、白细胞介素-5、白细胞介素-6受体α亚基、白细胞介素-6受体β亚 基、白细胞介素-7、白细胞介素-9、间质胶原酶、胰岛淀粉样多肽、角蛋白、I型细胞骨架19 (aa311-367)、Kit配体、瘦蛋白、白血病抑制因子、淋巴细胞趋化因子、淋巴毒素-α、巨噬细 胞集落刺激因子1、巨噬细胞金属弹性蛋白酶、巨噬细胞迀移抑制因子、基质溶解因子、金属 蛋白酶抑制剂1、金属蛋白酶抑制剂2、金属蛋白酶抑制剂3、金属蛋白酶抑制剂4、肌红蛋白、 胰腺激素原、肽ΥΥ、促-表皮生长因子、促-白细胞介素-16、催乳素、前列腺-特异性抗原、蛋 白质S100-A12、促转化生长因子α、分泌型免疫球蛋白Α、血清淀粉样蛋白Ρ-组分、SL细胞因 子、基质细胞衍生因子1、溶基质素-1、血小板生成素、胸腺基质淋巴细胞生成素、肿瘤坏死 因子、肿瘤坏死因子配体超家族成员10、肿瘤坏死因子配体超家族成员6、肿瘤坏死因子受 体超家族成员1Α、肿瘤坏死因子受体超家族成员1Β、血管内皮生长因子受体1、血管内皮生 长因子受体2、血管内皮生长因子受体3、冯威利布兰德因子和WAP四二硫核心结构域蛋白质 2,然后使所述测定的结果与患者状态相关联。这种与状态的关联性可包括以下的一种或多 种:诊断急性阑尾炎；由急性阑尾炎导致的预后的指征。为了方便起见，正在以这种方式评 估的患者在本文中被称为"阑尾炎患者"，无论阑尾炎诊断是否在评估时得以确认。
[0012] 在某些实施方案中，评估本文所述的患者的方法是用于对患者进行风险分级的方 法；即向患者指定健康状况一种或多种未来改变的可能性。在这些实施方案中，测定结果与 一种或多种此类未来变化相关。继而与发病或死亡增加的可能性相关的一种或多种阑尾炎 生物标志物的水平或水平的改变，在患者中被称为"与增加的不良结果倾向相关"。
[0013] 在此类风险分级实施方案中，优选地指定的可能性或风险是目标事件或多或少可 能在从阑尾炎患者获得体液样本的180天内发生。在特别优选的实施方案中，指定的可能性 或风险涉及目标事件在更短的时间段内发生，诸如18个月、120天、90天、60天、45天、30天、 21天、14天、7天、5天、96小时、72小时、48小时、3