一种牛奶和奶粉中三聚氰胺的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种检测方法，具体涉及一种牛奶和奶粉中三聚氰胺的检测方法。
【背景技术】
[0002]自2008年的“三鹿婴幼儿奶粉事件”起，人们对乳制品安全问题产生了极大的关注，但牛奶和奶粉中的三聚氰胺事件仍频频发生、屡禁不止。因此，迫切需要发展简便、高效的检测方法，以满足日益严峻的牛奶和奶粉制品中三聚氰胺检测要求。目前，国内外关于三聚氰胺的检测方法，主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法、离子色谱法、气质联用(GC-MS)以及液质联用(LC-MS)等，虽然这些方法可以准确地检测出牛奶和奶粉制品中的三聚氰胺，但都存在操作复杂、样品处理时间长、无法快速筛查、检测工作量大以及价格昂贵等问题。
[0003]咖啡环效应是由Deegan等人率先提出的一种分离富集新现象,具有简单、高效等特点。咖啡环效应不仅仅局限于咖啡溶液，还广泛地存在于多种溶液体系中，通过咖啡环效应的分离富集，可极大提高后续检测的灵敏度到lmg/L甚至更高。
[0004]共聚焦显微拉曼光谱是一种具有高分辨、高通量等优点的微区分析技术，其光谱峰的位置、数量和强度信息直接反映了分子的构成及构象信息，可直接对不同形态的微区样品进行测试。通过有机结合咖啡环效应的分离富集特性及拉曼光谱的精确检测，可高通量检测牛奶和奶粉制品中低浓度的三聚氰胺，因此具有十分广阔的应用前景。
【发明内容】
[0005]为解决上述问题，本发明提供了一种牛奶和奶粉中三聚氰胺的检测方法，操作简便、快速且结果准确，重现性好；可大大简化检测步骤，降低检测成本，对提高监管部门的工作效率、实现牛奶和奶粉的高通量检查具有重大的社会效益。
[0006]为实现上述目的，本发明采取的技术方案为:
[0007]—种牛奶和奶粉中三聚氰胺的检测方法，包括如下步骤:
[0008]S1、用蒸馏水或纯水配制不同浓度的三聚氰胺储备液；
[0009]S2、将步骤SI制备的不同浓度的三聚氰胺储备液分别加入本身不含三聚氰胺的牛奶或奶粉溶解液中，充分振荡混匀得到混合液；
[0010]S3、将步骤S2所得的混合液与无水乙醇以适当比例混合，振荡均匀后，离心得到上层澄清提取液；
[0011]S4、将步骤S3所得的澄清提取液滴在基底上，室温蒸发后得到咖啡环；
[0012]S5、对三聚氰胺进行共聚焦显微拉曼光谱检测，得到其拉曼光谱；
[0013]S6、对步骤S4形成的咖啡环物质进行共聚焦显微拉曼光谱检测，得到其拉曼光谱图；
[0014]S7、对比分析咖啡环物质的拉曼谱峰位置及三聚氰胺的拉曼谱峰位置，判断有无三聚氰胺存在。
[0015]所述的奶粉溶解液为奶粉的取样量为Ig,放入25ml的烧杯中用蒸馏水或纯水定容至1ml并磁力搅拌混匀得到溶解液。
[0016]所述步骤S2中所配置的混合液中三聚氰胺浓度分别为0mg/kg、lmg/kg、5mg/kg、10mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、500mg/kg 和 1000mg/kg。
[0017]所述步骤S3中所用无水乙醇为99.7%，所述混合液与无水乙醇混合比例为1:2。
[0018]所述步骤S3可替换为取步骤S2所得的混合液加酸调节PH至蛋白质变性析出。
[0019]所用酸为浓度为lmol/L的盐酸,调节PH为4.7。
[0020]所述步骤S4中的基底为金属片或金属镀膜玻璃。
[0021]本发明具有以下有益效果:
[0022]本发明充分结合了咖啡环效应的分离富集特性和共聚焦显微拉曼光谱的高分辨检测，提供了一种简便快捷、成本低且结果准确的牛奶和奶粉中低浓度三聚氰胺的检测新方法，只需通过正常蒸发过程即可实现低成本检测。该方法有利于实现大批量低成本的快速筛查，为牛奶和奶粉制品中三聚氰胺的检测提供了一种新技术手段。
【具体实施方式】
[0023]为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0024]本发明的检测原理为:
[0025]三聚氰胺具有不饱和键结构，拉曼信号强度大，且特征谱峰尖锐，通过咖啡环效应，可以使牛奶或奶粉制品中的物质得到分离富集。用共聚焦显微拉曼光谱判断咖啡环上待测物质的位置，并测定其拉曼光谱，通过与三聚氰胺标准样品的谱峰比较判断待测样品中是否含有三聚氰胺。
[0026]本具体实施所使用的仪器设备为:
[0027]磁力搅拌器，离心机，pH计，共聚焦显微拉曼光谱仪。可调移液器(1-50 μ L, 20-200 μ L, 100-1000 μ L)，移液器头 20-200 μ L 和 100-1000 μ L, 25ml 烧杯，1ml
离心管。
[0028]所用试剂如下:
[0029](I)三聚氰胺粉末标准品，市售。
[0030](2)无水乙醇，99.7%，市售；盐酸，11.9mol/L，市售。
[0031](3)金属片，市售；镀膜玻璃，自制。
[0032](4)蒸馏水或纯水，市售。
[0033]实施例1
[0034]SI 1、牛奶处理方法如下:
[0035]分别取2ml含不同浓度三聚氰胺(l、5、10、50、100、500、1000mg/kg)的牛奶样品至1ml离心管中，准确加入无水乙醇4ml，充分振荡混匀得到混合液。将混合液在离心机中离心5min后，取上层澄清提取液。
[0036]本方法的检出限是lmg/kg。
[0037]S12、样品咖啡环的制备
[0038]用移液器吸取得到的澄清提取液，滴于金属基底或镀膜玻璃基底上，室温条件下蒸发后，得到待测样品所形成的咖啡环。
[0039]S13、咖啡环物质的共聚焦显微拉曼光谱检测
[0040]将得到的待测样品所形成的咖啡环，置于共聚焦显微拉曼光谱仪的显微镜下，观察咖啡环物质的分布，对咖啡环物质进行拉曼光谱检测，得到咖啡环上不同区域的拉曼光谱图。对比标准三聚氰胺样品的共聚焦显微拉曼光谱，根据谱峰位置找出三聚氰胺在咖啡环上的位置，并判断三聚氰胺是否存在。
[0041]实施例2
[0042]S21、牛奶处理方法如下:
[0043]取1ml含不同浓度三聚氰胺(l、5、10、50、100、500、1000mg/kg)的牛奶样品至25ml烧杯中。配制lmol/L的盐酸(蒸馏水或纯水稀释)，向牛奶样品中加入适量盐酸，调节PH至4.7，使蛋白质变性析出，充分振荡混匀得到混合液。取混合液5ml置于1ml离心管中，离心机离心5min后，取上层澄清提取液。
[0044]本方法的检出限是lmg/kg。
[0045]S22、样品咖啡环的制备
[0046]用移液器吸取得到的澄清提取液，滴于金属基底或镀膜玻璃基底上，室温条件下蒸发后，得到待测样品所形成的咖啡环。
[0047]S23、咖啡环物质的共聚焦显微拉曼光谱检测
[0048]取得到的待测样品所形成的咖啡环，置于共聚焦显微拉曼光谱仪的显微镜下，观察咖啡环物质的分布，对咖啡环物质进行拉曼光谱检测，得到咖啡环上不同区域的拉曼光谱图。对比标准三聚氰胺样品的共聚焦显微拉曼光谱，根据谱峰位置找出三聚氰胺在咖啡环上的位置，并判断三聚氰胺是否存在。
[0049]实施例3
[0050]S31、奶粉处理方法如下:
[0051]取Ig奶粉样品至25ml烧杯中，准确加入蒸馏水或纯水9ml，磁力搅拌得到溶解液。将不同浓度的三聚氰胺储备液加入溶解液中，使其中三聚氰胺的浓度为1、5、10、50、100、500、1000mg/kg。配制lmol/L的盐酸(蒸馏水或纯水稀释)，向含三聚氰胺的奶粉溶解液中加入适量盐酸，调节PH至4.7，使蛋白质变性析出，充分振荡混匀得到混合液。取混合液5ml置于1ml离心管中，离心机离心5min，取上层澄清提取液。
[0052]本方法的检出限是lmg/kg。
[0053]S32、样品咖啡环的制备
[0054]用移液器吸取得到的澄清提取液，滴于金属基底或镀膜玻璃基底上，室温条件下蒸发后，得到待测样品所形成的咖啡环。
[0055]S33、咖啡环物质的共聚焦显微拉曼光谱检测
[0056]取得到的待测样品所形成的咖啡环，置于共聚焦显微拉曼光谱仪的显微镜下，观察咖啡环物质的分布，对咖啡环物质进行拉曼光谱检测，得到咖啡环上不同区域的拉曼光谱图。对比标准三聚氰胺样品的共聚焦显微拉曼光谱，根据谱峰位置判断三聚氰胺在咖啡环上的位置，并判断三聚氰胺的存在。
[0057]综上所述，本具体实施充分结合了咖啡环效应的分离富集特性和共聚焦显微拉曼光谱的高分辨检测，提供了一种简便快捷、成本低且结果准确的牛奶和奶粉中低浓度三聚氰胺的检测新方法，只需通过正常蒸发过程即可实现低成本检测。该方法有利于实现大批量低成本的快速筛查，为牛奶和奶粉制品中三聚氰胺的检测提供了一种新技术手段。
[0058]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种牛奶和奶粉中三聚氰胺的检测方法，其特征在于，包括如下步骤: 51、用蒸馏水或纯水配制不同浓度的三聚氰胺储备液； 52、将步骤SI制备的不同浓度的三聚氰胺储备液分别加入本身不含三聚氰胺的牛奶或奶粉溶解液中，充分振荡混匀得到混合液； 53、将步骤S2所得的混合液与无水乙醇以适当比例混合，振荡均匀后，离心得到上层澄清提取液； 54、将步骤S3所得的澄清提取液滴在基底上，室温蒸发后得到咖啡环； 55、对三聚氰胺进行共聚焦显微拉曼光谱检测，得到其拉曼光谱； 56、对步骤S4形成的咖啡环物质进行共聚焦显微拉曼光谱检测，得到其拉曼光谱图； 57、对比分析咖啡环物质的拉曼谱峰位置及三聚氰胺的拉曼谱峰位置，判断有无三聚氰胺存在。2.根据权利要求1所述的一种牛奶和奶粉中三聚氰胺的检测方法，其特征在于，所述的奶粉溶解液为奶粉的取样量为lg，放入25ml的烧杯中用蒸馏水或纯水定容至1ml并磁力搅拌混匀得到溶解液。3.根据权利要求1所述的一种牛奶和奶粉中三聚氰胺的检测方法，其特征在于，所述步骤S2中所配置的混合液中三聚氰胺浓度分别为0mg/kg、lmg/kg、5mg/kg、10mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、500mg/kg 和 1000mg/kg。4.根据权利要求1所述的一种牛奶和奶粉中三聚氰胺的检测方法，其特征在于，所述步骤S3中所用无水乙醇为99.7%，所述混合液与无水乙醇混合比例为1:2。5.根据权利要求1所述的一种牛奶和奶粉中三聚氰胺的检测方法，其特征在于，所述步骤S3可替换为取步骤S2所得的混合液加酸调节PH至蛋白质变性析出。6.根据权利要求5所述的一种牛奶和奶粉中三聚氰胺的检测方法，其特征在于，所用酸为浓度为111101/1的盐酸，调节？!1为4.7。7.根据权利要求1所述的一种牛奶和奶粉中三聚氰胺的检测方法，其特征在于，所述步骤S4中的基底为金属片或金属镀膜玻璃。
【专利摘要】本发明公开了一种牛奶和奶粉中三聚氰胺的检测方法，本发明充分结合了咖啡环效应的分离富集特性和共聚焦显微拉曼光谱的高分辨检测，提供了一种简便快捷、成本低且结果准确的牛奶和奶粉中低浓度三聚氰胺的检测新方法，只需通过正常蒸发过程即可实现低成本检测。该方法有利于实现大批量低成本的快速筛查，为牛奶和奶粉制品中三聚氰胺的检测提供了一种新技术手段。
【IPC分类】G01N21/65
【公开号】CN105628669
【申请号】CN201410591241
【发明人】陈达, 闫孟雨
【申请人】河北伊诺光学科技有限公司
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2014年10月28日