本发明属于蛋白质基因组数据分析方法，具体涉及一种快速分析真核生物蛋白质基因组学数据的方法。
背景技术：
随着人类基因组计划的完成，基因组测序技术也趋于成熟，越来越多的物种也相继完成了基因组测序。然而全基因组测序仅仅是解决问题的开始，从序列数据到生物本体，基因组的价值体现在其基因组的功能注释上。基因组的功能注释就是一个对基因组测序产生的原始dna序列添加分析和阐释的过程，这种分析和阐释是理解其生物代谢过程和生物学意义所必需的。高质量的基因组注释是对基因组的序列组织特征，特别对基因和基因产物进行详细的识别和鉴定。而在人类基因组计划完成的10年后，两个独立的研究组成功绘制了人类蛋白质组草图，这项研究利用蛋白质组学数据对基因组进行重注释，验证84％的预测编码蛋白，并发现808个新的蛋白编码区域，蛋白质组学直接用于基因组的注释已经越来越受到相关领域的关注，为基因组注释工作提供了新的研究方向-蛋白质基因组学(proteogenomics)。与其它基因组注释手段相比，基于质谱的蛋白质组注释，不仅结合了原始的dna和rna序列，使得信息更为完整；还直接在蛋白质水平对基因编码的蛋白质产物进行分析鉴定；而一些在蛋白质组学层面特有的现象比如翻译后修饰、信号肽，对蛋白质功能研究非常重要，也是其他传统注释手段不可替代的。另外，基于蛋白质基因组学的策略可以被用在通过分析蛋白质水平来鉴定一些基于个体的序列变异导致的癌症，并确定其中最相关的变异上。虽然目前蛋白质基因组学的研究发展较快，从2004年至今，蛋白质基因组学已经支持了几种重要的模式生物，以及大量的非模式生物，尤其是原核生物的基因组注释研究，但是也存在以下几个方面的问题：1)在数据库构建方面：相比于原核生物，真核生物基因组较大，直接使用其基因组构建数据库比较困难，以人类基因组为例，六阅读框翻译数据库大小约是传统蛋白质数据库的230倍左右；而转录组相比基因组，由于存在冗余，使其数据量则更大，使用从头组装的转录组建库，如何使用较好的存储结构来去除数据冗余性是非常值得研究的问题。2)数据质量控制问题，新肽段假阳率往往较高：目前绝大部分研究工作仅仅在谱图水平进行假阳性控制(fdr)从而直接获得鉴定蛋白质集合，且在假阳性控制方面仅采用全局fdr筛选，造成新肽段的实际假阳性率比较高。3)适用于真核生物的自动注释工具缺乏：目前的绝大多数蛋白质基因组学研究将重点放在新现象的解释上，并没有着眼于开发完整的流程支持更多研究的开展，尤其是真核生物，考虑到海量的质谱数据，使得数据的共享和传输非常不便，也极大地限制了蛋白质基因组学的推广。目前，仍然缺乏完整的适用于真核生物蛋白质基因组学数据的鉴定分析方法，尤其是真核生物基因组特有的可变剪切存在，使得其基因注释更加复杂；此外，点突变基因的存在也增加了注释的复杂性。针对真核生物蛋白质基因组数据分析的软件包括：pgtools，quilts，galaxy-p，ppline，pogo等；然而，这些软件设定的方法局限性比较高，或仅适用于人蛋白质基因组数据分析；或完全依赖于转录组预测可变剪切位点和点突变，而非基于蛋白质组数据直接鉴定；或仅支持数据统计，缺乏前期的数据处理与鉴定；或用户具有较深的蛋白质组学研究方面的背景，应用范围也受到很大的限制，并未实现数据的自动快速分析。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的在于克服了以往真核生物的海量质谱数据分析复杂繁琐的操作，提出了一套适用于真核生物的蛋白质基因组数据分析方法，使该方法能够用于预测新基因和校正已注释基因结构、预测新的可变剪切体和预测点突变基因。为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：本发明提供了一种快速分析真核生物蛋白质基因组学数据的方法，包括以下步骤：1)将组装后的转录组数据、est序列和非编码rna序列合并后进行三阅读框翻译，对基因组序列进行六阅读框翻译；根据三阅读框翻译结果和六阅读框翻译结果，整合构建蛋白序列数据库，对原始质谱数据进行格式转化得到转化后的质谱数据，对数据库检索参数定义；2)用四种不同算法的数据检索引擎对所述步骤1)中转化后的质谱数据进行数据库检索，得到检索结果；3)整合所述步骤2)得到的检索结果，将鉴定到的肽段通过氨基酸匹配回贴基因组，能够完全匹配到已注释编码基因结构区域的已知肽段定义为i类肽段，将不能匹配的新肽段定义为ii类肽段；4)采用不同的假阳性概率计算方法，分别对所述步骤3)中的i类肽段和ii类肽段计算，删除假阳性肽段，获得i类可信肽段和ii类可信肽段；5)将所述步骤4)得到的ii类可信肽段，通过氨基酸匹配回帖至基因组，用于预测可变剪切体，预测点突变基因和预测新基因并校正已注释基因的结构；所述预测可变剪切体的回帖方法，包括以下步骤：①从ii类可信肽段的第二个氨基酸开始，将肽段分割为供体序列和受体序列，通过氨基酸序列匹配，分别将所述供体序列和受体序列比对到所述步骤1)中构建得到的蛋白序列数据库中，若所述供体序列和受体序列能够完全匹配且分别往两端延伸60个氨基酸，获取第一延长供体序列和第一延长受体序列；②将所述第一延长供体序列和第一延长受体序列比对到基因组中，再从ii类可信肽段的第三个氨基酸开始分割，并获得第二延长供体序列和第二延长受体序列，再比对到基因组中，以此类推，直至分割至ii类肽段的倒数第三个氨基酸为止，获得不同的延长供体序列和终延长受体序列；所述不同的延长供体序列和终延长受体序列能够完全比对到基因组中，再根据蛋白索引文件，查找ii类可信肽段在基因组中的起始和终止位置信息，预测得到新可变剪切体；所述预测点突变基因的回帖方法，包括以下步骤：将ii类可信肽段比对到所述步骤1)中构建的蛋白序列数据库，将所述ii类可信肽段分别往两端各延伸60个氨基酸，并将延长后的新肽段比对到基因组中，仅允许新肽段中发生1个氨基酸的突变，所述突变的位点位于ii类可信肽段第二个氨基酸和倒数第三个氨基酸之间，根据蛋白索引文件，查找所述发生突变的ii类可信肽段在基因组中的起始与终止位置信息，预测得到点突变基因；所述预测新基因并校正已注释基因的结构的回帖方法，包括以下步骤：通过氨基酸匹配，将ii类可信肽段比对到所述步骤1)中构建的蛋白序列数据库中，获取所述ii类可信肽段所对应的全蛋白序列信息，根据蛋白索引文件，查找全蛋白序列在基因组中的起始与终止位置信息，预测得到新蛋白编码基因和校正已注释基因结构。优选的，步骤5)中新蛋白编码基因的序列具有以下特征：新蛋白编码基因的序列长度大于150bp，蛋白匹配的unique肽段长度≥7个氨基酸，每个蛋白匹配的unique肽段数≥2，蛋白的起始密码子为常见的四种起始密码子或稀有密码子，所述常见的四种起始密码子为atg、gtg、ttg或ctg，所述稀有密码子为ata或att。优选的，步骤5)中已注释基因结构校正的序列具有以下特征：校正后的已注释基因结构的肽段和校正前的已注释基因结构的肽段有重叠；所述重叠的氨基酸数目＞50。优选的，步骤5)中预测的可变剪切体和点突变基因独立具有以下特征：每个蛋白匹配的unique肽段数≥2，蛋白序列匹配的unique肽段的长度≥10个氨基酸。优选的，所述步骤1)中整合构建蛋白序列数据库的方法，包括以下步骤：将三阅读框翻译结果和六阅读框翻译结果去除重复冗余数据，用得到的去冗余蛋白构建蛋白序列数据库的蛋白索引文件；所述索引文件包括蛋白的名称、蛋白在基因组中对应的起始与终止位置信息。优选的，所述去除重复冗余数据的方法是将三阅读框翻译结果和六阅读框翻译结果进行序列内同源比对。优选的，所述步骤2)中四种不同算法的数据检索引擎为pfind、comet、msgfplus和x！tandem。优选的，所述步骤4)中i类肽段的假阳性概率计算方法采用正-反库策略，并在谱图水平、肽段水平和蛋白水平筛选fdr值＜1％的可信肽段信息，用于鉴定已注释蛋白。优选的，所述步骤4)中ii类肽段的假阳性概率计算方法是单独采用类别fdr筛选策略，筛选fdr值小于1％的可信肽段信息。本发明提供一种快速分析真核生物蛋白质基因组学数据的方法，适用于任何一个已经完成测序的真核生物；本发明中的可变剪切体与点突变基因预测的新方法，有助于提高鉴定的覆盖度；本发明采用不同的较为严格的假阳性控制策略，在谱图、肽段、蛋白、新肽段等多个水平进行假阳性控制，从而提高了鉴定的可信度；同时，本发明可以实现从原始质谱数据到最后新基因、可变剪切体以及点突变基因的预测，校正已注释基因结构等一系列分析，真正实现真核生物质谱数据的快速鉴定分析。附图说明图1为一种快速分析真核生物蛋白质基因组学数据的方法的流程图。具体实施方式本发明提供了一种快速分析真核生物蛋白质基因组学数据的方法，包括以下步骤：1)将组装后的转录组数据、est序列和非编码rna序列合并后进行三阅读框翻译，对基因组序列进行六阅读框翻译，根据三阅读框翻译结果和六阅读框翻译结果，整合构建蛋白序列数据库，对原始质谱数据进行格式转化得到转化后的质谱数据，对数据库检索参数定义；2)用四种不同算法的数据检索引擎对所述步骤1)中转化后的质谱数据进行数据库检索，得到检索结果；3)整合所述步骤2)得到的检索结果，将鉴定到的肽段通过氨基酸匹配回贴基因组，能够完全匹配到已注释编码基因结构区域的已知肽段定义为i类肽段，将不能匹配的新肽段定义为ii类肽段；4)采用不同的假阳性概率计算方法，分别对所述步骤3)中的i类肽段和ii类肽段计算，删除假阳性肽段，获得i类可信肽段和ii类可信肽段；5)将所述步骤4)得到的ii类可信肽段，通过氨基酸匹配回帖至基因组，用于预测可变剪切体，预测点突变基因和预测新基因并校正已注释基因的结构；所述预测可变剪切体的回帖方法，包括以下步骤：①从ii类可信肽段的第二个氨基酸开始，将肽段分割为供体序列和受体序列，通过氨基酸序列匹配，分别将所述供体序列和受体序列比对到所述步骤1)中构建得到的蛋白序列数据库中，若所述供体序列和受体序列能够完全匹配且分别往两端延伸60个氨基酸，获取第一延长供体序列和第一延长受体序列；②将所述第一延长供体序列和第一延长受体序列比对到基因组中，再从ii类可信肽段的第三个氨基酸开始分割，并获得第二延长供体序列和第二延长受体序列，再比对到基因组中，以此类推，直至分割至ii类肽段的倒数第三个氨基酸为止，获得不同的延长供体序列和终延长受体序列；所述不同的延长供体序列和终延长受体序列能够完全比对到基因组中，再根据蛋白索引文件，查找ii类可信肽段在基因组中的起始和终止位置信息，预测得到新可变剪切体；所述预测点突变基因的回帖方法，包括以下步骤：将ii类可信肽段比对到所述步骤1)中构建的蛋白序列数据库，将所述ii类可信肽段分别往两端各延伸60个氨基酸，并将延长后的新肽段比对到基因组中，仅允许新肽段中发生1个氨基酸的突变，所述突变的位点位于肽段第二个氨基酸值倒数第三个氨基酸之间，根据蛋白索引文件，查找发生突变的ii类可信肽段在基因组中的起始与终止位置信息，预测点突变基因；所述预测新基因并校正已注释基因的结构的回帖方法，包括以下步骤：通过氨基酸匹配，将ii类可信肽段比对到所述步骤1)中构建的蛋白序列数据库中，获取所述ii类可信肽段所对应的全蛋白序列信息，根据蛋白索引文件，查找全蛋白序列在基因组中的起始与终止位置信息，预测新蛋白编码基因和校正已注释基因结构。本发明将组装后的转录组数据、est序列和非编码rna序列合并后进行三阅读框翻译，对基因组序列进行六阅读框翻译，根据三阅读框翻译结果和六阅读框翻译结果，整合构建蛋白序列数据库，对原始质谱数据进行格式转化得到转化后的质谱数据，对数据库检索参数定义。在本发明中，所述真核生物包括任何一个已经完成测序的真核生物。在本发明实施例中，以斑马鱼和三角褐指藻为例说明本发明的技术方案实施。本发明对组装转录组数据用的软件没有特殊限制，采用本领域所熟知的组装转录组数据用软件即可。在本发明实施例中，所述组装转录组数据用的软件为trinity。在本发明中，所述整合构建蛋白序列数据库的方法，优选包括以下步骤：将组装后的转录组数据、est序列和非编码rna序列合并在同一个文件内进行三阅读框翻译，得到三阅读框翻译结果；将基因组序列单独在另外一个文件内进行六阅读框翻译，得到六阅读框翻译结果；将所述三阅读框翻译结果和六阅读框翻译结果去除重复冗余数据，用得到的去冗余蛋白构建蛋白序列数据库的蛋白索引文件；所述索引文件包括蛋白的名称、蛋白在基因组中对应的起始与终止位置信息。所述去除重复冗余数据的方法优选是将三阅读框翻译结果和六阅读框翻译结果进行序列内同源比对。本发明对格式转化用软件没有特殊限制，采用本领域所熟知的格式转化用软件即可。在本发明实施例中，所述格式转化用软为proteowizard。本发明对所述数据库检索参数没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的定义方法即可。得到化后的质谱数据后，本发明用四种不同算法的数据检索引擎对所述步骤1)中转化后的质谱数据进行数据库检索，得到检索结果。在本发明中，所述四种不同算法的数据检索引擎包为pfind、comet、msgfplus和x！tandem。本发明对所述数据库检索的方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的数据库检索方案即可。得到检索结果后，本发明整合所述检索结果，将鉴定到的肽段通过氨基酸匹配回贴基因组，能够完全匹配到已注释编码基因结构区域的已知肽段定义为i类肽段，将不能匹配的新肽段定义为ii类肽段。在本发明中，所述整合的方法优选为将四种不同的检索结果放在同一个文件。得到i类肽段和ii类肽段后，本发明采用不同的假阳性概率计算方法，分别对所述i类肽段和ii类肽段计算，删除假阳性肽段，获得i类可信肽段和ii类可信肽段。在本发明中，所述i类肽段的假阳性概率计算方法优选采用正-反库策略，并在谱图水平、肽段水平和蛋白水平筛选fdr值＜1％的可信肽段信息，用于鉴定已注释蛋白。所述ii类肽段的假阳性概率计算方法优选单独采用类别fdr筛选策略，筛选fdr值小于1％的可信肽段信息。获得i类可信肽段和ii类可信肽段后，本发明将所述ii类可信肽段，通过氨基酸匹配回帖至基因组，用于预测可变剪切体，预测点突变基因和预测新基因并校正已注释基因的结构；所述预测可变剪切体的回帖方法，包括以下步骤：①从ii类可信肽段的第二个氨基酸开始，将肽段分割为供体序列和受体序列，通过氨基酸序列匹配，分别将供体序列和受体序列比对到所述步骤1)中构建得到的蛋白序列数据库中，所述供体序列和受体序列能够完全匹配且分别往两端延伸60个氨基酸，获取延长后的新供体序列和新受体序列；②将新的两种序列比对到基因组中，再从ii类可信肽段的第三个氨基酸开始分割，并获得延长后的供体序列和受体序列，再比对到基因组中，以此类推，直至分割至ii类肽段倒数第三个氨基酸为止；延长后的新供体序列和新受体序列能够完全比对到基因组中，再根据蛋白索引文件，查找ii类可信肽段在基因组中的起始和终止位置信息，预测得到新的可变剪切体；所述预测点突变基因的回帖方法，包括以下步骤：将ii类可信肽段比对到所述步骤1)中构建的蛋白序列数据库，将所述ii类可信肽段分别往两端各延伸60个氨基酸，并将延长后的新肽段比对到基因组中，仅允许新肽段中发生1个氨基酸的突变，所述突变的位点位于肽段第二个氨基酸值倒数第三个氨基酸之间，根据蛋白索引文件，查找所述发生突变的ii类可信肽段在基因组中的起始与终止位置信息，预测点突变基因；所述预测新基因并校正已注释基因的结构的回帖方法，包括以下步骤：通过氨基酸匹配，将ii类可信肽段比对到所述步骤1)中构建的蛋白序列数据库中，获取所述ii类可信肽段所对应的全蛋白序列信息，根据蛋白索引文件，查找全蛋白序列在基因组中的起始与终止位置信息，预测得到新蛋白编码基因和校正已注释基因结构。在本发明中，所述新蛋白编码基因的序列优选具有以下特征：新蛋白编码基因的序列长度大于150bp，蛋白匹配的unique肽段长度≥7个氨基酸，每个蛋白匹配的unique肽段数≥2，蛋白的起始密码子为常见的四种起始密码子或稀有密码子，所述常见的四种起始密码子为atg、gtg、ttg或ctg，所述稀有密码子为ata或att。在本发明中，已注释基因结构校正的序列优选具有以下特征：校正后的已注释基因结构的肽段和校正前的已注释基因结构的肽段有重叠；所述重叠的氨基酸数目＞50。在本发明中，预测的可变剪切体和点突变基因优选独立具有以下特征：每个蛋白匹配的unique肽段数≥2，蛋白序列匹配的unique肽段的长度≥10个氨基酸。下面结合实施例对本发明提供的一种快速分析真核生物蛋白质基因组学数据的方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。实施例1中质谱数据来自已发表的文章[kelkards,provoste,chaerkadyr,muthusamyb,mandass,subbannayyat,selvanldn,wangch,dattakk,woos,dwivedisb,renuses,getnetd,huangtc,kimms,pintosm,mitchellcj,madugunduak,kumarp,sharmaj,advanij,deyg,balakrishnanl,syedn,nanjappav,subbannayyay,goelr,prasadtsk,bafnav,sirdeshmukhr,gowdah,wangc,leachsd,pandeya,“annotationofthezebrafishgenomethroughanintegratedtranscriptomicandproteomicanalysis”,molecular&cellularproteomics,2014,13:3184-3198]实施例1斑马鱼基因组重注释，步骤如下：从ensembl网站下载斑马鱼全基因组序列，gff格式文件，蛋白质组的蛋白库序列(预测有46260个已知的蛋白序列)，从ncbi下载斑马鱼转录组序列。将组装后的转录组数据、est序列和非编码rna序列合并后进行三阅读框翻译，对基因组序列进行六阅读框翻译；根据三阅读框翻译结果和六阅读框翻译结果，整合构建蛋白序列数据库，本发明采用proteowizard将原始数据转化为标准的mgf格式文件，对数据库检索参数定义；用pfind、comet、msgfplus和x！tandem四种不同算法的数据检索引擎对所述转化后的质谱数据进行数据库检索，得到检索结果；整合所述检索结果，将鉴定到的肽段通过氨基酸匹配回贴基因组，能够完全匹配到已注释编码基因结构区域的已知肽段定义为i类肽段，将不能匹配的新肽段定义为ii类肽段；采用不同的假阳性概率计算方法，分别对所述i类肽段和ii类肽段计算，删除假阳性肽段，获得i类可信肽段和ii类可信肽段；将所述ii类可信肽段，通过氨基酸匹配回帖至基因组，用于预测可变剪切体，预测点突变基因和预测新基因并校正已注释基因的结构；所述预测可变剪切体的回帖方法，包括以下步骤：①从ii类可信肽段的第二个氨基酸开始，将肽段分割为供体序列和受体序列，通过氨基酸序列匹配，分别将供体序列和受体序列比对到所述步骤1)中构建得到的蛋白序列数据库中，所述供体序列和受体序列能够完全匹配且分别往两端延伸60个氨基酸，获取延长后的新供体序列和新受体序列；②将新的两种序列比对到基因组中，再从ii类可信肽段的第三个氨基酸开始分割，并获得延长后的供体序列和受体序列，再比对到基因组中，以此类推，直至分割至ii类肽段倒数第三个氨基酸为止；延长后的新供体序列和新受体序列能够完全比对到基因组中，再根据蛋白索引文件，查找ii类可信肽段在基因组中的起始和终止位置信息，预测新的可变剪切体；所述预测点突变基因的回帖方法，包括以下步骤：将ii类可信肽段比对到所述步骤1)中构建的蛋白序列数据库，将所述ii类可信肽段分别往两端各延伸60个氨基酸，并将延长后的新肽段比对到基因组中，仅允许新肽段中发生1个氨基酸的突变，所述突变的位点位于肽段第二个氨基酸值倒数第三个氨基酸之间，根据蛋白索引文件，查找其在基因组中的起始与终止位置信息，预测点突变基因；所述预测新基因并校正已注释基因的结构的回帖方法，包括以下步骤：通过氨基酸匹配，将ii类可信肽段比对到所述步骤1)中构建的蛋白序列数据库中，获取所述ii类可信肽段所对应的全蛋白序列信息，根据蛋白索引文件，查找全蛋白序列在基因组中的起始与终止位置信息，预测新蛋白编码基因和校正已注释基因结构。采用四种不同的数据检索引擎自动进行搜库检索，并进行新基因与结构改变的基因的鉴定结果如表1所示。通过本发明的方法，共鉴定到230个新的蛋白编码基因与8个基因结构修正的基因，共鉴定到55,850个新的unique肽段，且每个蛋白均包括了2个及以上新的unique肽段；本方法得到的鉴定结果与原文献鉴定的结果进行比较，新肽段与新基因的鉴定数目都有很大的提高，比较结果见表1。表1本发明与常规方法鉴定到的新基因与结构改变的基因的数目通过本发明的方法，利用蛋白质组学数据在斑马鱼中鉴定到53个新的可变剪切体，修正了229个可变剪切体；原文献中则无法利用蛋白质组学数据实现新的可变剪切体的预测(见表2)。通过本发明的方法，共鉴定到17200个已注释的蛋白，且每个蛋白均包括了2个及以上的unique肽段(见表2)，而原文献中仅鉴定到6975个已注释蛋白，利用本发明的方法鉴定率提高了约2.5倍。表2本发明方法鉴定到的已注释蛋白、可变剪切体以及新蛋白数目实施例2三角褐指藻基因组重注释，步骤如下：1)按照文献的实验方法[yangmk,yangyh,chenz,zhangj,liny,wangy,xiongq,lit,gef,bryantda,zhaojd,“proteogenomicanalysisandglobaldiscoveryofposttranslationalmodificationsinprokaryotes”,2014,111(52):e5633-e5642]，提取三角褐指藻蛋白，并对总蛋白进行酶切消化，获得肽段混合溶液，采用thermoltqexactive质谱仪检测获得的肽段溶液，采集质谱数据，共采集1555391张质谱图。2)采用与实施例1同样的方法，从jgigenomeportal网站下载三角褐指藻全基因组序列，转录组序列，gff格式文件，蛋白质组的蛋白库序列(10567个已知的蛋白序列)，并利用proteowizard将原始数据转化为标准的mgf格式文件；最后统一配置检索引擎搜库参数。3)四种不同的数据检索引擎自动进行搜库检索，并进行新基因与结构改变的基因的鉴定，通过本发明的方法，共鉴定到73043个unique肽段，其中3958个属于新的unique肽段；通过本发明方法，共鉴定到已注释蛋白8369个，606个新基因，506个修正的已注释基因，95个新的可变剪切体以及471个点突变的基因。表3本发明已注释蛋白、新蛋白、可变剪切体以及点突变蛋白数目类型蛋白数目已注释蛋白8369新蛋白606修正的已注释蛋白506可变剪切体95新的可变剪切体蛋白21新的点突变蛋白56已注释的点突变蛋白415由以上实施例可知，采用本发明的方法，在新基因与结构改变的基因的鉴定数量方面均有大幅提高，同时还实现了新的可变剪切体与点突变基因的鉴定。最后所应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制。尽管参照实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当了解，本发明适用于所有真核生物蛋白质基因组学的数据，对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，都不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。当前第1页12