一种青钱柳ɑ-葡萄糖苷酶抑制剂的提取方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种青钱柳α-葡萄糖苷酶抑制剂的提取方法，属于抑制剂制备领域。
【背景技术】
[0002]青钱柳，别名:摇钱树、麻柳，青钱李、山麻柳、山化树。胡桃科、青钱柳属植物，我国南方多省均有发现，多以零星分布。青钱柳乃冰川四纪幸存下来的珍稀树种，仅存于中国，是我国特有的单种属植物和速生树种。青钱柳被誉为植物界的大熊猫，医学界的第三棵树。江西民间长期取其叶制作饮料，因其味甜，有清热解暑、降血压、降血糖等功能，故又称甜茶、神茶。
[0003]国内对青钱柳的研究始于20世纪70年代。目前已有文献记载从青钱柳中分离出大量的化合物，主要有黄酮类化合物、萜类化合物、生物碱、糖、醇、酚、酸等。青钱柳具有明显的降血糖作用，有关青钱柳提取物降血糖作用的研究也多有报道，研究方式主要是通过注射四氧嘧啶获得实验性糖尿病小鼠，研究青钱柳粗提物对实验性糖尿病小鼠的降血糖作用。江西农业大学植物资源开发与利用研究室杨武等研究了青钱柳中提取的粗黄酮对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及对糖尿病小鼠的降血糖作用，但有关抑制作用有效成分的分离和分析却未见报道，同时又有很多利用青钱柳作为茶叶来作降低血糖，功效不明显，浪费了其中的很多的有效成分。
【发明内容】
[0004]本发明主要解决的技术问题:针对目前青钱柳大多数做成饮茶来降低人体血糖，功效不明显，有效成分被浪费，无法提取主要作用物的问题，提供了一种青钱柳α-葡萄糖苷酶抑制剂的提取方法，该方法主要先通过对青钱柳的层层处理，再通过层析柱法分离得出粗α-葡萄糖苷酶抑制剂，最后经过纯化即可。该方法制得的α-葡萄糖苷酶抑制剂，可有效的来降低血糖，特别适合“三高”人群和白领人士，同时还可以增强人体免疫力，制备步骤简单，成本低。
[0005]为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案:
(1)取青钱柳干树叶，对其进行气流粉碎5?lOmin，得粉碎叶，并按固液比1:6将粉碎叶和蒸馏水混合均匀，浸泡2?3h后，对其过滤，得滤液备用，再用10mL的煮沸的蒸馏水保温浸泡滤渣12?15h，再次对其过滤，合并备用滤液得深棕色提取液；
(2)将深棕色提取液分别量取并置于50mL离心管中，以2500?3000r/min的速度离心3?5min，随后提取上层清液置于真空旋转浓缩仪中浓缩至干，控制温度为45?50°C、压力2?5KPa，得深棕色固体浓缩物，并按固液比1:50溶于蒸馏水中，得深棕色液体，再按1:10的质量比将其和无水乙醇搅拌混合20?30min，混合完成后放置于5°C冰箱中静置I?2h ;
(3)待冷藏完成后，分别量取置于50mL离心管中，在2500?3000r/min转速下离心5?1min,随后除去沉淀合并上层亮黄色透明液体，使其置于真空旋转浓缩仪在温度为45?50°C、2?5KPa压力下浓缩至干燥的土黄色固体； (4)按固液比1:50，用蒸馏水将干燥的土黄色固体溶解并用孔径为0.4?0.5 μπι的滤膜对其层析，玻璃层析柱直径为15mm，装填高度为900mm，使流动相A为蒸馏水，流动相B为质量分数为50%的乙醇溶液，在流速0.5mL/min下，每1min收集α_葡萄糖苷酶抑制剂溶液一次；
(5)将收集的α-葡萄糖苷酶抑制剂溶液在液相色谱柱中进行纯化，在温度30?40°C、流速为0.6mL/min下进行分离纯化30?40min，最终收集得亮黄色纯化α_葡萄糖苷酶抑制剂溶液，最后将其置于温度50?60°C下干燥至黄色粉末即为一种青钱柳α-葡萄糖苷酶抑制剂。
[0006]本发明的应用:所制得的α-葡萄糖苷酶抑制剂每片0.2mg，早晚各一次，饭后食用，每次食入量为0.4mg，持续服用10?15天即可，按量食用后，发现高血糖者血糖明显降低，经测得空腹血糖值降低到6.lmmol/L以下。
[0007]本发明的有益效果是:
(1)有效的来降低血糖，特别适合“三高”人群和白领人士；
(2)增强人体免疫力，对人体无副作用；
(3)制备步骤简单，成本低。
【具体实施方式】
[0008]首先取青钱柳干树叶，对其进行气流粉碎5?lOmin，得粉碎叶，并按固液比1:6将粉碎叶和蒸馏水混合均匀，浸泡2?3h后，对其过滤，得滤液备用，再用10mL的煮沸的蒸馏水保温浸泡滤渣12?15h，再次对其过滤，合并备用滤液得深棕色提取液；将深棕色提取液分别量取并置于50mL离心管中，以2500?3000r/min的速度离心3?5min，随后提取上层清液置于真空旋转浓缩仪中浓缩至干，控制温度为45?50°C、压力2?5KPa，得深棕色固体浓缩物，并按固液比1:50溶于蒸馏水中，得深棕色液体，再按1:10的质量比将其和无水乙醇搅拌混合20?30min，混合完成后放置于5°C冰箱中静置I?2h ;待冷藏完成后，分别量取置于50mL离心管中，在2500?3000r/min转速下离心5?lOmin，随后除去沉淀合并上层亮黄色透明液体，使其置于真空旋转浓缩仪在温度为45?50°C、2?5KPa压力下浓缩至干燥的土黄色固体；按固液比1:50，用蒸馏水将干燥的土黄色固体溶解并用孔径为
0.4?0.5 μ m的滤膜对其层析，玻璃层析柱直径为15mm，装填高度为900mm，使流动相A为蒸馏水，流动相B为质量分数为50%的乙醇溶液，在流速0.5mL/min下，每1min收集α-葡萄糖苷酶抑制剂溶液一次；将收集的α-葡萄糖苷酶抑制剂溶液在液相色谱柱中进行纯化，在温度30?40°C、流速为0.6mL/min下进行分离纯化30?40min，最终收集得亮黄色纯化α-葡萄糖苷酶抑制剂溶液，最后将其置于温度50?60°C下干燥至黄色粉末即为一种青钱柳α-葡萄糖苷酶抑制剂。
[0009]实例I
首先取青钱柳干树叶，对其进行气流粉碎lOmin，得粉碎叶，并按固液比1:6将粉碎叶和蒸馏水混合均匀，浸泡3h后，对其过滤，得滤液备用，再用10mL的煮沸的蒸馏水保温浸泡滤渣15h，再次对其过滤，合并备用滤液得深棕色提取液；将深棕色提取液分别量取并置于50mL离心管中，以3000r/min的速度离心5min，随后提取上层清液置于真空旋转浓缩仪中浓缩至干，控制温度为50°C、压力5KPa，得深棕色固体浓缩物，并按固液比1:50溶于蒸馏水中，得深棕色液体，再按1:10的质量比将其和无水乙醇搅拌混合30min，混合完成后放置于5°C冰箱中静置2h ;待冷藏完成后，分别量取置于50mL离心管中，在3000r/min转速下离心lOmin，随后除去沉淀合并上层亮黄色透明液体，使其置于真空旋转浓缩仪在温度为50°C、5KPa压力下浓缩至干燥的土黄色固体；按固液比1:50，用蒸馏水将干燥的土黄色固体溶解并用孔径为0.5 μ m的滤膜对其层析，玻璃层析柱直径为15mm，装填高度为900mm，使流动相A为蒸馏水，流动相B为质量分数为50 %的乙醇溶液，在流