具有5,2’-二羟基-4’-甲氧基-3-香叶基黄酮骨架的衍生物及其制备方法和用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及具有5, 2' -二羟基-4' -甲氧基-3-香叶基黄酮骨架的衍生物，具体 涉及6位卤代5, 2' -二羟基-4' -甲氧基-3-香叶基黄酮及其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 宫颈癌是对女性健康和生活质量危险最大的疾病之一，因此寻求高效、高选择和 毒副作用小的抗宫颈癌药物是药物研究的主要方向。黄酮类化合物是一类存在于自然界 的、具有2-苯基色原酮结构的化合物，其生物活性多种多样，并具有很强的药理活性。有研 究表明，黄酮类化合物具有抗肿瘤活性，在肺癌、结肠癌、乳腺癌等治疗和预防中发挥重大 作用，其阻止癌细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、抗氧化活性、抑制新生血管形成等机制。但是 目前获取黄酮类化合物主要是通过中药提取，靠分离提取进行量产比较困难，并且黄酮类 化合物结构复杂，作用位点多，造成针对选择性差，其作用机制、物质基础均没有明确的理 论解释，故结构式、靶向性均具有不可操控性。
[0003] 因此，通过化学合成对其结构改造修饰，寻找一种活性更好、副作用更小的多靶 点、多环节、多效应的改性黄酮类化合物，增强其特定药理活性以治疗宫颈癌是目前亟需解 决的技术难题。
【发明内容】
[0004] 作为各种广泛且细致的研究和实验的结果，本发明的发明人已经发现，在合成过 程工艺中控制柱层析的体积比，所述化合物有助于提高治疗宫颈癌的性能。基于这种发现， 完成了本发明。
[0005] 本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优 点。
[0006] 本发明还有一个目的是提供一种具有5, 2' -二羟基-4' -甲氧基-3-香叶基黄酮 骨架的衍生物，其具有良好的抗宫颈癌活性，多靶点、多环节、多相应，毒性低，不易产生耐 药性。
[0007] 本发明还有一个目的是提供一种所述具有5, 2' -二羟基-4' -甲氧基-3-香叶基 黄酮骨架的衍生物的制备方法，通过甲基化、卤代、成酯、重排、香叶基化，制备方法简单、容 易控制，提高化合物的靶点，以便获得更好的选择性和活性。
[0008] 为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种具有5, 2' -二羟 基_4'_甲氧基-3-香叶基黄酮骨架的衍生物，该衍生物具有以下化学通式（I)或其药学上 可接受的盐；
[0009]
[0010]其中，R1表示-OCH 3或-OH，R 2为-Cl 或-Br，R 3为-OCH 3或-OH，R 4为-OCH 3或-OH。 [0011] 优选的是，所述的具有5, 2' -二羟基-4' -甲氧基-3-香叶基黄酮骨架的衍生物， 是结构式如下的化合物之一：
[0014] -种具有5, 2' -二羟基-4' -甲氧基-3-香叶基黄酮骨架的衍生物的制备方法， 包括以下步骤：
[0015] 步骤一、以2, 6-二羟基苯乙酮为起始原料，进行甲基化反应，采用柱层析，VWM): = 10:1，得黄色晶体状的弟一中间广物；
[0016] 步骤二、将所述第一中间产物溶解于醋酸中，进行卤代反应后，采用柱层析， 醚：):V(乙酸zjg：)= 8:1，得黄色液体状的弟-中间广物；
[0017] 步骤三、取2, 4-二甲氧基苯甲酸和二氯亚砜，回流，减压旋蒸后加入溶解有所述 第二中间产物的无水吡啶中，进行成酯反应，重排反应后，采用柱层析，VmM8i) :V }= 4:1，得到黄色油状的第三中间产物；
[0018] 步骤四、取所述第三中间产物进行香叶基化反应，采用柱层析，V^M8i):V =10:1，得黄色油状的第四中间产物；
[0019] 步骤五、将所述第四中间产物溶解在甲醇中，滴加2-4滴浓硫酸，回流2_4h，减压 蒸馏出溶剂，加入乙酸乙酯萃取有机相，用饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，采用 柱层析，:V ( = 5 : 1，得黄色液体状的弟五中间广物；
[0020] 步骤六、将所述第五中间产物溶解于六甲基磷酰三胺中，进行脱去甲基反应，柱层 析，:V (乙酸乙gw = 6:1，得到黄色液体状的目标广物。
[0021] 优选的是，所述的具有5, 2'-二羟基-4'-甲氧基-3-香叶基黄酮骨架的衍生物的 制备方法，所述步骤一中的甲基化反应具体包括：将90~110重量份2, 6-二羟基苯乙酮溶 解于600~700重量份无水丙酮中，于圆底烧瓶中搅拌3~6min，加入98~101重量份无 水碳酸钾搅拌8~12min，用恒压滴液漏斗25~35min内滴加88~92重量份硫酸二甲酯， 回流反应5~7h，冷却至室温，用盐酸调节PH值到2,用乙酸乙酯萃取有机相，依次用水、饱 和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，之后进行柱层析得所述第一中间产物，所述第一中 间产物结构经IR，NMR和MS分析确定。
[0022] 优选的是，所述的具有5, 2' -二羟基-4' -甲氧基-3-香叶基黄酮骨架的衍生物 的制备方法，所述步骤二中的卤代反应具体指：将8~12重量份所述第一中间产物溶解于 醋酸中，缓慢加入7~11重量份N-氯代丁二酰亚胺于70~85°C反应5~7h，冷却加入碳 酸氢钠直至无气泡产生，加入乙酸乙酯萃取有机相，用饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠 干燥，之后进行柱层析得所述第二中间产物，所述第二中间产物结构经IR，NMR和MS分析确 定。
[0023] 优选的是，所述的具有5, 2' -二羟基-4' -甲氧基-3-香叶基黄酮骨架的衍生物 的制备方法，所述N-氯代丁二酰亚胺可以用N-溴代丁二酰亚胺代替。
[0024] 优选的是，所述的具有5, 2' -二羟基-4' -甲氧基-3-香叶基黄酮骨架的衍生物 的制备方法，所述步骤三中，所述成酯反应，重排反应具体指：称取10~15重量份2, 4-二 甲氧基苯甲酸于圆底烧瓶中，加入33~37重量份二氯亚砜回流0. 8~I. 2h，减压旋蒸除去 过量二氯亚砜，然后将其加入到溶解8~12重量份所述第二中间产物的无水吡啶中，70~ 90°C反应1. 5~2. 5h，冷却到室温加入乙酸乙酯萃取有机相，依次用稀盐酸、水、饱和食盐 水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，得中间化合物，所述中间化合物不经纯化， 将其溶解在吡啶中，加入4~6重量份预热过的氢氧化钾粉末，95~105°C反应20~40min， 冷却到室温，加入乙酸乙酯萃取有机相，依次用稀盐酸、水、饱和食盐水洗涤有机相，无水硫 酸钠干燥，之后进行柱层析得所述第三中间产物，所述第三中间产物结构经IR，NMR和MS分 析确定。
[0025] 优选的是，所述的具有5, 2' -二羟基-4' -甲氧基-3-香叶基黄酮骨架的衍生物 的制备方法，所述步骤四中所述香叶基化反应具体指：将5~8. 5重量份所述第三中间产物 溶解于无水丙酮中，加入6~7重量份无水碳酸钾回流8~12min，滴加3. 5~5重量份香 叶基溴，回流2~4h，冷却旋干溶剂，加入乙酸乙酯萃取有机相，分别水、饱和食盐水洗涤有 机相，无水硫酸钠干燥，之后柱层析得所述第四中间产物，所述第四中间产物结构经IR，NMR 和MS分析确定。
[0026] 优选的是，所述步骤五中，所述第四中间产物的用量为1~4重量份，所述第五中 间产物结构经IR，NMR和MS分析确定；所述的具有5,2'_二羟基-4'-甲氧基-3-香叶基黄 酮骨架的衍生物的制备方法，所述步骤六中所述去甲基反应具体指：氩气保护下将〇. 5~ 0. 9重量份乙硫醇溶解于18~23重量份六甲基磷酰三胺于0~2°C搅拌8~12min，加入 2~4重量份浓度为2~3M的正丁基锂反应25~35min，将溶解有1~2. 5重量份所述第 五中间产物的六甲基磷酰三胺溶液加入到新制备的乙硫基锂中，60~80°C反应5~7h，加 入50~70重量份饱和氯化铵淬灭反应，用乙酸乙酯萃取有机相，饱和氯化锂洗涤有机相， 无水硫酸钠干燥，之后柱层析得目标产物，目标产物结构经IR，NMR和MS分析确定。
[0027] -种具有5, 2' -二羟基-4' -甲氧基-3-香叶基黄酮骨架的衍生物的用途，用于 制备治疗宫颈癌的药物。
[0028] 本发明至少包括以下有益效果：
[0029] 第一、黄酮类化合物干预细胞转到过程中的酶活性，从而抑制宫颈癌细胞增殖，且 对正常细胞无毒害作用，能够表现出抗氧化作用和正向免疫调节作用，由于具有多个可被 取代的位置，可被改性以获取能够增强其特定药理活性的抗宫颈癌药物；
[0030] 第二、取消A环7位的氧代，引入C环3位香叶基，选择性碳代香叶基化，提高了黄 酮类化合物的生物活性，具有好的抗宫颈癌的功效和微弱的细胞毒性；
[0031] 第三、卤素药物对恶性肿瘤细胞尤为敏感，引入6位卤代，避免与香叶基形成较大 的斥力，保证化合物的稳定性，并且与骨架协同作用，能够很好地抑制、消除宫颈癌细胞活 性；
[0032] 第四、本发明使用的制备方法操作简单、反应时间短，制备的化合物纯度高、形态 好。
[0033] 本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本 发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
【附图说明】
[0034] 图1为本发明所述的具有5, 2' -二羟基-4' -甲氧基-3-香叶基黄酮骨架的衍生 物（质量浓度）体外抑制宫颈癌细胞株（Hela)抑制率（ICJ图。
【具体实施方式】
[0035] 下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书 文字能够据以实施。
[0036] 实施例1 :
[0037] 具有5, 2' -二羟基-4' -甲氧基-3-香叶基黄酮骨架的衍生物，目标产物III、目 标产物IV，结构式如下：
[0038]
[0039] 制备方法如下：
[0040] 步骤一、将9. 123g 2, 6-二羟基苯乙酮溶解于70mL无水丙酮中，于250mL的圆底 烧瓶中搅拌3min，加入9. 812g无水碳酸钾搅拌8min，用恒压滴液漏斗25min内滴加8. 845g 硫酸二甲酯，回流反应5h，冷却至室温，用盐酸调节PH值到2,用乙酸乙酯萃取有机相，依次 用水、饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，之后进行柱层析V wmso:V dSZigi) = 10: 1， 得黄色晶体状的第一中间产物（9. 857g，产率90. 32% )，结构经IR，NMR和MS分析确定，结 构式如下：
[0041 ]
[0042] 步骤二、将0. 821g第一中间产物溶解于醋酸中，缓慢加入0. 744g N-氯代丁二酰 亚胺于70°C反应5h，冷却加入碳酸氢钠直至无气泡产生，加入乙酸乙酯萃取有机相，用饱 和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，之后进行柱层析:V = 8:1得黄色液 体状的第二中间产物（〇. 456g，产率37. 86 % )，结构经IR，NMR和MS分析确定，结构式如下：
[0043]
[0044] 步骤三、称取I. 024g 2, 4-二甲氧基苯甲酸于IOOmL圆底烧瓶中，加入3. 321g二 氯亚砜回流0. 8h，减压旋蒸除去过量二氯亚砜，然后将其加入到溶解0. Sg第二中间产物 的无水吡啶中，70°C反应I. 5h，冷却到室温加入乙酸乙酯萃取有机相，依次用稀盐酸、水、 饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，得中间化合物，所述中间化合物 不经纯化，将其溶解在吡啶中，加入0. 421g预热过的氢氧化钾粉末，95°C反应20min，冷却 到室温，加入乙酸乙酯萃取有机相，依次用稀盐酸、水、饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸 钠干燥，之后进行柱层析VmM8i):V = 4:1，得黄色油状的第三产物（0. 926g产率 50. 35% )，结构经IR，NMR和MS分析确定，结构式如下：
[0045]
[0046] 步骤四、将0. 532g第三中间产物溶解于无水丙酮中，加入0. 645g无水碳酸钾回流 8min，滴加0. 351g香叶基溴，回流2h，冷却旋干溶剂，加入乙酸乙酯萃取有机相，分别水、饱 和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，之后柱层析:V (= 10:1，得黄色油状 的第四中间产物（〇. 321g产率42. 23% )，结构经IR，NMR和MS分析确定，结构式如下：
[0047]
[0048] 步骤五、将0. 253g第四中间产物溶解在8mL甲醇中，滴加2滴浓硫酸，回流2h，减 压蒸馏出溶剂，加入乙酸乙酯萃取有机相，用饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，采 用柱层析，得黄色液体状的第五中间产物（0. 106g产率33. 13%); 结构经IR，NMR和MS分析确定，结构式如下：
[0049]
[0050] 第五中间产物：IR(KBr) :3102,3010, 2957, 2925, 2843, 1641，1506, 1472 ，1410, 1309, 1272, 1025, 813cm-l。lHNMR(300MHz，Chloroform-d) S 7.57 (d，J = 9. 0Hz, 1H), 7. 33 (d, J = 9. 0Hz, 1H), 6. 73 (d, J = 8. 7Hz, 1H), 6. 67 - 6. 47 (m, 2H), 5. 18 (t, J =6. 3Hz, 1H), 5. 05 (t, J = 6. 6Hz, 1H), 3. 89 (s, 3H), 3. 82 (s, 3H), 3. 09 (d, J = 6. 6Hz, 2H), 2. 13 - I. 82(m, 4H), I. 66(s, 3H), I. 58(s, 3H), I. 41 (s, 3H). 13C匪R(75MHz, CD C13) 8 177. 518, 162. 590, 159. 308, 158. 579, 158. 274, 154. 485, 136. 043, 135. 128, 131. 665 ,131. 139, 124. 436, 124. 342, 121. 791, 115. 083, 114. 849, 106. 487, 104. 629, 101. 968, 98. 8 39, 56. 506, 55. 651, 55. 482, 39. 680, 26. 703, 25. 637, 24. 853, 17. 647, 15. 906 ； (ESI) -MS, m/ z: 505. 1759 [M+Na] + (理论值 505. 1758)。
[0051] 步骤六、氩气保护下将0. 070mL乙硫醇溶解于ImL六甲基磷酰三胺于0°