(m, 1H)，3. 11 (m, 2H)，2. 98 (m, 2H)。图 18 是本实施例 中化合物邻苯二胺-苯丙氨酸-苯丙氨酸（Z)与一氧化氮反应得到的产物化合物苯并 三氮唑-苯丙氨酸-苯丙氨酸⑶的高分辨质谱图，理论计算值C 25H23N504[(M+H)+]= 458. 18283,观测值m/z 458. 18232。由图17-18可证明化合物邻苯二胺-苯丙氨酸-苯丙 氨酸（Z)与一氧化氮反应得到的化合物苯并三氮唑-苯丙氨酸-苯丙氨酸（B)的结构为
[0064] 通过上述实施例及其检测实验的结果可知：本发明的可用于检测以及去除甲基 乙二醛的超分子水凝胶，其前体化合物邻苯二胺-苯丙氨酸-苯丙氨酸（Z)在磷酸缓冲液 (pH 7. 4)可形成25毫摩尔/升的溶液，当加入等物质的量的甲基乙二醛并静置1小时后， 可得到略浑浊的超分子水凝胶，该可视化成胶过程可以用于甲基乙二醛的实时可视化定性 检测。该水凝胶的高效液相色谱图证明化合物邻苯二胺-苯丙氨酸-苯丙氨酸（Z)已经完 全反应，表明化合物邻苯二胺-苯丙氨酸-苯丙氨酸（Z)与甲基乙二醛的反应是高效的，证 明化合物邻苯二胺-苯丙氨酸-苯丙氨酸（Z)可用于甲基乙二醛的去除。相同条件下相同 浓度的化合物邻苯二胺-苯丙氨酸-苯丙氨酸（Z)的溶液在与一氧化氮反应后不形成水凝 胶，证明该检测甲基乙二醛的过程不会受到一氧化氮的干扰。本发明中提出的甲基乙二醛 的检测和去除方法不需要任何检测仪器辅助，方法直接方便，且反应简单，反应条件温和易 得，是一种简单直接的方法，其克服了传统检测甲基乙二醛方法对仪器的依赖和传统去除 甲基乙二醛方法过程繁琐条件苛刻的缺点。综上，本发明的可用于检测以及去除甲基乙二 醛的超分子水凝胶，可用于可视化定性检测和去除甲基乙二醛，该过程简便直接，不依赖检 测仪器，且不受到一氧化氮的干扰，从而可进一步应用于疾病的诊断和治疗。
【主权项】
1. 一种可检测和去除甲基乙二醛的超分子水凝胶的制备方法，包括依次通过氨基保护 反应、固相多肽合成和氨基脱保护反应得到水凝胶前体邻苯二胺-苯丙氨酸-苯丙氨酸然 后与甲基乙二醛反应成胶，其特征在于： 第一步，按：将1毫摩尔3, 4-二氨基苯甲酸溶于8毫升10 %碳酸氢钠溶液，加入7毫 升N，N-二甲基甲酰胺，于冰水浴中搅拌均匀；将2. 4毫摩尔氯甲酸-9-芴基甲酯溶于8毫 升N，N-二甲基甲酰胺逐滴加入溶液中，在0°C条件下反应1小时，然后在室温条件下反应 8小时；向反应混合液中加入30毫升水，用乙醚萃取两次；在冰水浴条件下向萃取得到的 水相中逐滴加入浓度为2摩尔/升的盐酸至溶液pH值为2 ;用乙酸乙酯萃取三次，所得有 机相用饱和氯化钠溶液洗涤并用硫酸钠固体干燥后旋转蒸发干燥；得到的固体即结构为的初产物N，N-双芴甲氧羰基-3, 4-二氨基苯甲酸； 第二步，将0. 5克2-氯三苯甲基氯树脂在2-3毫升N，N-二甲基甲酰胺里溶胀4-8分 钟后，加入0. 5毫摩尔N-芴甲氧羰基-苯丙氨酸，再加入0. 5毫摩尔N，N-二异丙基乙胺， 反应2-3小时后，用100微升甲醇反应5-10分钟；去除反应溶液，加入3毫升20%哌啶的 N，N-二甲基甲酰胺溶液，反应12分钟，切去苯丙氨酸的保护基9-芴甲氧羰基；加入活化的 〇. 6毫摩尔N-芴甲氧羰基-苯丙氨酸反应2-3小时，去除反应溶液，加入3毫升20 %哌啶的 N，N-二甲基甲酰胺溶液，反应12分钟，切去苯丙氨酸的保护基9-芴甲氧羰基；加入活化的 0. 6毫摩尔化合物N，N-双芴甲氧羰基-3, 4-二氨基苯甲酸反应2-3小时，去除反应溶液， 使用异丙醇和正己烷洗涤；最后用体积浓度为1 %的三氟乙酸的二氯甲烷溶液从该树脂上 切下合成的化合物，使用高效液相色谱纯化后得到结构为合物N，N-双芴甲氧羰基邻苯二胺-苯丙氨酸-苯丙氨酸； 以上固相合成所用的氨基酸都是以9-芴甲氧羰基作为α-氨基保护基；其中活化氨 基酸的试剂是与氨基酸等物质的量的N，N-二异丙基乙胺、1-羟基苯并三唑和苯并三氮 唑-Ν，Ν，Ν'，Ν' -四甲基脲六氟磷酸盐；在每接上一个氨基酸和切去9-芴甲氧羰基保护基 时，都采用凯氏测试试剂检测氨基存在与否：若阳性，显蓝色，即表明已脱除9-芴甲氧羰基 保护基；若阴性，显黄色，则表明氨基酸已接上； 第三步，将N，N-双芴甲氧羰基邻苯二胺-苯丙氨酸-苯丙氨酸加入10 %哌啶 的N，N-二甲基甲酰胺溶液中反应5分钟，用高效液相色谱纯化得到的固体即结构为的产物邻苯二胺-苯丙氨酸-苯丙氨酸； 再将5微摩尔邻苯二胺-苯丙氨酸-苯丙氨酸溶于200微升的0. 2摩尔/升pH 7. 4 的磷酸缓冲液，加热至完全溶解，冷却至室温后得到无色澄清的溶液；加入等物质的量的甲 基乙二醛，静置1小时，得到略浑浊的超分子水凝胶。2. -种可用于检测以及去除甲基乙二醛的超分子水凝胶的前体化合物邻苯二胺-苯 丙氨酸-苯丙氨酸，特征在于其结构为：3. 权利要求2所述可用于检测以及去除甲基乙二醛的超分子水凝胶的前体化合物邻 苯二胺-苯丙氨酸-苯丙氨酸的制备方法，其特征在于： 第一步，按：将1毫摩尔3, 4-二氨基苯甲酸溶于8毫升10 %碳酸氢钠溶液，加入7毫 升N，N-二甲基甲酰胺，于冰水浴中搅拌均匀；将2. 4毫摩尔氯甲酸-9-芴基甲酯溶于8毫 升N，N-二甲基甲酰胺，逐滴加入前述溶液中；混合溶液在(TC条件下反应1小时，然后在室 温条件下反应8小时；向反应混合液中加入30毫升水，并使用乙醚萃取两次；在冰水浴条 件下向萃取得到的水相中逐滴加入2摩尔/升盐酸溶液至pH值为2 ;使用乙酸乙酯萃取三 次，所得有机相用饱和氯化钠溶液洗涤并用硫酸钠固体干燥后旋转蒸发干燥；得到的固体 即结构为的初产物N，N-双芴甲氧羰基-3, 4-二氨基苯甲酸； 第二步，将0. 5克2-氯三苯甲基氯树脂在2-3毫升N，N-二甲基甲酰胺里溶胀4-8分 钟后，加入0. 5毫摩尔N-芴甲氧羰基-苯丙氨酸，再加入0. 5毫摩尔N，N-二异丙基乙胺， 反应2-3小时后，用100微升甲醇反应5-10分钟；去除反应溶液，加入3毫升20%哌啶的 N，N-二甲基甲酰胺溶液，反应12分钟，切去苯丙氨酸的保护基9-芴甲氧羰基；加入活化的 〇. 6毫摩尔N-芴甲氧羰基-苯丙氨酸反应2-3小时，去除反应溶液，加入3毫升20 %哌啶的 N，N-二甲基甲酰胺溶液，反应12分钟，切去苯丙氨酸的保护基9-芴甲氧羰基；加入活化的 0. 6毫摩尔化合物N，N-双芴甲氧羰基-3, 4-二氨基苯甲酸反应2-3小时，去除反应溶液，使 用异丙醇和正己烷洗涤；最后用体积浓度为1%的三氟乙酸的二氯甲烷溶液从该树脂上切 下合成的化合物，使用高效液相色谱纯化后得到的即为结构为的化合物N，N-双芴甲氧羰基邻苯二胺-苯丙氨酸-苯丙氨酸； 以上固相合成所用的氨基酸都是以9-芴甲氧羰基作为α-氨基保护基；其中活化氨 基酸的试剂是与氨基酸等物质的量的N，N-二异丙基乙胺、1-羟基苯并三唑和苯并三氮 唑-Ν，Ν，Ν'，Ν' -四甲基脲六氟磷酸盐；在每接上一个氨基酸和切去9-芴甲氧羰基保护基 时，都采用凯氏测试试剂检测氨基存在与否：若阳性，显蓝色，即表明已脱除9-芴甲氧羰基 保护基；若阴性，显黄色，则表明氨基酸已接上； 第三步，将N，N-双芴甲氧羰基邻苯二胺-苯丙氨酸-苯丙氨酸加入10 %哌啶 的N，N-二甲基甲酰胺溶液中反应5分钟，用高效液相色谱纯化得到的固体即结构为的产物邻苯二胺-苯丙氨酸-苯丙氨酸。4. 一种化合物甲基喹喔啉-苯丙氨酸-苯丙氨酸，其特征在于结构为：5. 权利要求4所述化合物甲基喹喔啉-苯丙氨酸-苯丙氨酸的制备方法，其特征在于：把可用于检测以及去除甲基乙二醛的超分子水凝胶前体化 合物邻苯二胺-苯丙氨酸-苯丙氨酸与甲基乙二醛反应得到水凝胶，使用高效液相色谱纯 化，即得到化合物甲基喹喔啉-苯丙氨酸-苯丙氨酸。6. -种化合物苯并三氮唑-苯丙氨酸-苯丙氨酸，特征在于其结构为：7.权利要求6所述化合物苯并三氮唑-苯丙氨酸-苯丙氨酸的制备方法，其特征在于：将5微摩尔化合物邻苯二胺-苯丙氨酸-苯丙氨酸溶于200 微升的0. 2摩尔/升pH 7. 4的磷酸缓冲液，加热至完全溶解，冷却至室温后得到无色澄清 的溶液；将5倍物质的量的一氧化氮气体分5次每次5微摩尔通过该溶液，将溶液加热至澄 清后冷却至室温，静置1小时，得到暗红色的溶液，高效液相色谱纯化，得到的产物即为化 合物苯并三氮唑-苯丙氨酸-苯丙氨酸。
【专利摘要】本发明公开了一种可检测和去除甲基乙二醛的超分子水凝胶及制备方法，特征是依次通过氨基保护反应、固相多肽合成和氨基脱保护反应得到水凝胶的前体，该水凝胶的前体在磷酸缓冲液中与等物质的量甲基乙二醛反应形成超分子水凝胶；由于该溶液-凝胶转换过程是可视化的，可实现甲基乙二醛的实时可视化定性检测；由于该水凝胶的前体在磷酸缓冲液中与甲基乙二醛的反应高效，可实现甲基乙二醛的去除；根据该水凝胶的前体在磷酸缓冲液中与一氧化氮反应得到暗红色溶液，证明一氧化氮对甲基乙二醛的检测不构成干扰。与传统方法相比，采用本发明方法不依赖仪器且反应简单直接方便、条件易得，可用于检测和去除甲基乙二醛，从而可进一步应用于疾病的诊断和治疗。
【IPC分类】C07K1/04, C07K5/065, C07K1/06
【公开号】CN105175489
【申请号】
【发明人】梁高林, 刘爽, 罗宇峰
【申请人】中国科学技术大学
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年10月15日