步骤一分离并纯化得到的降解菌QX08在牛肉膏蛋白胨固体平板上生长 很快，呈圆形或近似圆形、质地软、稍有光泽的乳白色菌落，不粘稠易挑取。 (2) 生理生化特征分析， 参考《微生物学实验》(沈萍，范秀容，李广武.微生物学实验(第三版）.北京:高等教育 出版社，1999.)和《常见细菌系统鉴定手册》（东秀珠，蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册.北 京:科学出版社，2011.)测定降解菌QX08的生理生化特征。 测定结果显示，该菌株革兰氏阴性，精氨酸-精氨酸、甘氨酸-脯氨酸、戊二酰-甘氨酸-精氨酸、L-谷氨酸、L-亮氨酸、赖氨酸-丙氨酸、乙酸、核糖醇、枸橼酸、D-甘露醇、酮戊二酸、 丙二醇、甲基巴豆酸、L-Gamma-谷氨酸-PNP、PNP-BD-糖苷、PNP-磷酸盐反应为阳性;L-精氨 酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-焦谷氨酸、L-色氨酸、粘菌素、多粘菌素 B、4-甲基伞形酮脂、L-脯氨酸-PNP、Beta_阿洛糖、Beta-葡二糖、葡萄糖、D-果糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-蜜二糖、 D-山梨醇、D-蔗糖、D-半乳糖醛酸、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、甲基-B-葡糖苷、麦芽酮糖、N-乙 酰-2-氨基半乳糖、N-乙酰-氨基葡糖、鸟氨酸、尿素、七叶苷反应为阴性。所述降解菌QX08的 生理生化特征测定结果如表1所示。
(3)降解菌16S rDNA的同源性分析， DNA测序由上海英骏生物技术有限公司完成，测序结果用Blast软件Genbank中的16S rDNA序列进行同源性比较。 获得的XQ08的16S rDNA序列（SEQ ID N0.1)见后。 该菌株的16S rDNA rDNA序列已经提交到GenBank数据库(GenBank登录号:KU198337)， 发现该序列与Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637等菌株的基因序列同源性达 99% 0 3)生长特性分析， 进行了菌株最适温度和最适pH生长实验。采用无机盐培养基，分别在20°C、25 °C、30°C、 35°C和40°C培养、观察、记录菌株的温度适应性，每个处理3次重复。调整酸度分别为pH4、 ?耶、？!16、？!17、？!18、？!19，每个处理3次重复，培养、观察、记录菌株生长的最适?!1。结果表明， 所述降解菌XQ08的最适生长温度为30~35°C，最适生长pH为7~8。 鉴于上述菌株XQ08的形态、生理生化特性和16S rDNA序列分析结果，将降解菌QX08鉴 定为嗜麦芽寡养单胞菌（5〖6]1〇1：1'(^11011101133 1113 11：(^11；[113)。嗜麦芽寡养单胞菌 (Stenotrophomonas maltophi 1 ia)XQ08于2015年12月8日保存于中国典型培养物保藏中心 (CCTCC)，地址为中国武汉，武汉大学，保藏号为CCTCC Μ 2015726。 本发明的实施例2:降解溴氰菊酯制剂的制备， 包括如下步骤： 1) 将嗜麦芽寡养单胞菌XQ08的菌株于牛肉膏蛋白胨盐培养基中，30~35°C，150~200 rpm下振荡培养至对数生长期，获得菌种； 2) 将上述菌种按牛肉膏蛋白胨盐培养基的体积比的10%的接种量接种入种子瓶，30~ 35 °C，150~200 rpm下振荡培养至对数生长期，获得种子液； 3 )将获得的种子液按照10%的体积比的接种量接种入发酵培养基中，在30~35 °C、150 ~200 rpm下发酵培养45-50 h，获得发酵液，以紫外分光光度计检测发酵液的OD6qq大于 1.5，将发酵液直接稀释为液体菌剂，液体菌剂中的OD6QQ为0.6。 本发明的实施例3:降解菌QX08对溴氰菊酯的降解效能， 在无机盐培养基（同实施例1)中加入溴氰菊酯，使其终浓度为50.0 mg/L;加入降解菌 QX08的菌剂使其OD600为0.6,并设不接菌的培养基为对照，30°C(150 rpm)黑暗培养0~5 d， 定期取样。应用HPLC法测定溴氰菊酯的残留量并计算降解率，结果如图2所示，结果表明，降 解菌QX08在短时间内可有效降解溴氰菊酯，5 d内对50.0 mg/L溴氰菊酯的降解率达到 67.04%，具有较好的生物降解效果。试验结果表明，降解菌QX08对50.0 mg/L的溴氰菊酯具 有很好的降解能力。这一结果表明，本发明所提供的降解菌QX08可高效降解溴氰菊酯，在修 复溴氰菊酯污染的水体和土壤方面具有广阔的应用前景。 上述实施例中使用的培养基如下： 无机盐培养基:ΚΗ2Ρ〇4〇·4 g，K2HP〇4 0.4 g，NH4Cl 1 g，MgCl2 0.1 g，Na2S〇4l.425 g， FeS〇4.7H20 0.025 g，微量元素液10.0 mL，加蒸馏水定容至1000 mL，pH 7.0,高压蒸汽灭 菌（121°C，20 min)。其中微量元素液组成如下：ZnS〇4.7H20 1.1 g，MgS〇4.H20 0.58 g， (ΝΗ4)6Μ〇7〇24·4Η20 0.18 g，CoS〇4*7H20 0.024 g，CuS〇4*5H20 0.077 g，H3B03 0.029 g， NaN03.4H20 0.074 g，蒸馏水1 L。 分离培养基：无机盐培养基中按实验设计要求添加不同浓度溴氰菊酯唯一碳源，pH 7.0(固体培养基添加20 g琼脂）。 牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉膏3.0 g，NaCl 5.0 g，蛋白胨10.0 g，蒸馏水1000 mL，琼 脂20.0 g，pH7.0。 以上培养基均在高压锅中121°C灭菌20~30 min。培养基中，30~35°C，150~200 rpm下 振荡培养至对数生长期，获得菌种。 当然，以上只是本发明的具体应用范例，本发明还有其他的实施方式，凡采用等同替换 或等效变换形成的技术方案，均落在本发明所要求的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种高效降解溴氰菊酯的嗜麦芽寡养单胞菌XQ08，其特征在于:其保藏号为CCTCC Μ 2015726〇2. 根据权利要求1所述的高效降解溴氰菊酯的嗜麦芽寡养单胞菌XQ08，其特征在于:该 菌株16S rDNA序列如SED ID N0.1所示。3. 含有权利要求1所述的嗜麦芽寡养单胞菌XQ08的生物菌剂。4. 一种如权利要求1所述的菌株在降解溴氰菊酯残留中的应用。5. -种采用如权利要求1所述的菌株生产降解溴氰菊酯制剂的方法，其特征在于:将嗜 麦芽寡养单胞菌XQ08的菌株作为活体成分，制备获得降解溴氰菊酯的菌剂。
【专利摘要】本发明公开了一种高效降解溴氰菊酯的嗜麦芽寡养单胞菌XQ08及其应用，所述菌株已于2015年12月8日保存于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为中国武汉，武汉大学，保藏号为CCTCC？M？2015726。本发明提供的蜡状芽孢杆菌(<i>Stenotrophomonas</i><i>？maltophilia</i>)XQ08在无机盐培养基中5d对溴氰菊酯(50.0mg/L)的降解率达到67.04%，这表明该菌株能够高效降解溴氰菊酯，可有效修复溴氰菊酯污染的土壤和水体，解决农产品生产中农药残留超标问题及环境污染问题，保护生态环境和人类健康。CCTCC NO:M 201572620151208
【IPC分类】B09C1/10, C12R1/01, C02F3/34, C12N1/20, C02F101/38
【公开号】CN105602871
【申请号】CN201610078808
【发明人】吴小毛, 侯少锋, 李荣玉, 张承, 龙友华, 尹显慧
【申请人】贵州大学
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2016年2月4日