一种用于放流统计的牙鲆生态标记方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种放流牙鲆的评估方法，具体涉及一种用于放流统计的牙鲆生态标 记方法。
【背景技术】
[0002] 牙鲜(Paralichthys olivaceus)主要分布于我国渤海、黄海、东海、南海和朝鲜、 日本海域。生活环境多为靠近沿岸水深20-50m潮流畅通的海域。其栖息底质多为砂泥、砂石 或岩礁地带。牙鲆是名贵的暖温性、底栖海产经济鱼类，也是我国北方沿海重要的海水经济 鱼类之一。
[0003] 由于之前的过度拖网捕捞，导致我国的牙鲆野生资源曾衰退严重，为此，各级政府 高度重视，每年动用大量人力、物力在不同海域开展牙鲆增殖放流活动。通过这些年牙鲆增 殖放流活动的开展，野生牙鲆资源量有了一定程度的增加。
[0004] 近些年我国十分重视牙鲆种质资源的恢复，1998年至2003年我国农业部渔业局和 日本国水产厅，分别委派全国水产技术推广总站(本申请人)和日本栽培渔业协会在全国水 产技术推广总站日照海水良种示范基地开展为期5年的"中日水产增殖技术合作项目"，专 门从事牙鲆鱼的苗种培育和种质资源恢复工作。在合作项目的带动下，全国沿海省开始了 牙鲆的增殖放流。以山东省为例，2005年之前放流规模较小，不足20万尾，到2007年放流数 量已近每年1000万尾。
[0005] 然而，这些年，我们只片面的追求了牙鲆鱼苗培育数量和放流规模，却轻视了增殖 放流的后期评估，即到底增加了多少?放流牙鲆的成活率又如何?多少体长的牙鲆鱼苗最适 宜于放流等问题却一直没有让人信服的答案。究其原因，主要是因为没有找到合适的牙鲆 放流标记方法。即使进行放流效果评估，也因选择的标记方法的诸多缺陷，很难推广应用， 不同标记方法的优缺点详见表1所示。
[0006] 表1.增殖放流中不同标记技术的优缺点
[0008] 现行最常用的是"τ"型标记法，由上表可知，放流鱼苗个体太小就不能用，还易造 成继发感染，也不易于大规模放流使用;切除标记虽能大规模使用，但切的少了只能作为短 期标记，切得多了又影响放流鱼苗的运动和捕食;分子标记、荧光染色标记等"高、大、上"方 法，不仅费用昂贵，而且不易于后期回捕辨识。
[0009] 针对以上诸多问题，本发明申请人全国水产技术推广总站，发明人李刚等认真总 结多年牙鲆鱼苗培育和增殖放流经验。于2007年，提出了牙鲆生态标记的理念，得到了黄渤 海区渔政局有关领导的认可，并在随后的几年中一直从事生态标记的研究，开展了牙鲆生 态标记放流试验，旨在通过对牙鲆鱼苗变态前后的摄入营养进行人为干预，使放流牙鲆鱼 苗在无眼侧出现黑色素沉积斑以此和野生牙鲆无眼纯白形成鲜明对比，达到标记的目的。 并且这种标记方法不增加死亡率，不影响生长，保持时间长，不易脱标，技术成本低、易于量 化操作且回捕易辨识，具有广阔的推广和应用前景。2012年开始，本申请的申请人分别与多 家企业及个体老板合作进行了生态标记牙鲆的培育试验，试验成果得到了日照市海洋与渔 业局渔业分管局长的高度肯定。
[0010]所谓牙鲆生态标记就是在人工养殖过程中通过人为干预使放流牙鲆鱼苗无眼侧 出现黑色素沉积斑，以此与野生牙鲆无眼侧纯白进行区别达到标记目的牙鲆增殖放流标记 方法。本申请人研究发现，牙鲆孵出后3天，眼色素加深，视觉系统的形态结构形成，呈正趋 光性，开始主动摄食。随着视觉器官的进一步发育，视网膜通过视紫红质将视觉传递到中枢 神经系统，中枢神经再通过酪氨酸酶先将酪氨酸氧化成二羟苯丙氨酸(DOPA);二羟苯丙氨 酸生成多巴奎宁；多巴奎宁在酪氨酸酶的作用下聚合成黑色素。
[0011]正常情况下牙鲆幼鱼变态前，成色素细胞分布在身体两侧，二羟苯丙氨酸(DOPA) 阳性细胞均匀分布。一开始变态，有眼侧的黑色素细胞具有许多液胞，内含酪氨酸酶，逐步 移向皮肤的表面，迅速扩散;变态后数量增加;而无眼侧的成色素细胞则逐渐溶解，数量减 少，因此形成的牙鲆鱼苗有眼侧呈褐色或棕褐色，无眼侧因缺少黑色素细胞而呈白色。然 而，通过大量实验发现某些营养元素、营养元素的量以及摄入的时间，能够达到抑制其无眼 侧成色素细胞的减少，进而形成褐色或棕褐色的斑块，达到生态标记的目的。
【发明内容】
[0012] 本发明的目的是提供一种用于放流统计的牙鲆生态标记方法，解决了现有技术中 提到的不足。本发明的目的是通过以下技术方案来实现：
[0013] -种用于放流统计的牙鲆生态标记方法，所述用于放流统计的牙鲆生态标记方法 包括以下步骤：
[0014] Sl:在消毒处理后的培养池中加水，在15 °C下，布牙鲆鱼卵，其养殖密度为0.2~2 万尾/m3;
[0015] S2:仔鱼3日龄时，仔鱼开口，开始投喂营养强化后的轮虫，投喂至仔鱼26~30日龄 为止；
[0016] 轮虫中营养强化剂的添加量为:3日龄~11日龄，每1亿轮虫用13~18g的营养强化 剂强化营养；12日龄-20日龄每1亿轮虫用20~30g的营养强化剂强化营养;20日龄以后为1 亿轮虫13~18g营养强化剂的用量；
[0017] S3:仔鱼12日龄时，开始投喂营养强化后的卤虫，投喂至仔鱼35~50日龄为止； [0018]步骤S2和S3中进行营养强化的营养强化剂的成份包括DHA、EPA、维生素和氨基酸； [0019] S4:仔鱼15~19日龄时，开始投喂配合饲料，用量为仔鱼体重的3~10% ;
[0020]由此，得到生态标记型牙鲆，该牙鲆无眼侧出现形态、特征稳定的黑色素沉积斑， 其用于放流牙鲆统计研究。
[0021 ]进一步地，轮虫中营养强化剂的添加量为：3日龄~11日龄，每1亿轮虫用15g的营 养强化剂强化营养；12日龄-20日龄每1亿轮虫用25g的营养强化剂强化营养;20日龄以后又 恢复至1亿轮虫15g营养强化剂的用量。
[0022]进一步地，卤虫中营养强化剂的添加量为：12日龄-15日龄，每1亿卤虫用50g的营 养强化剂强化营养；15日龄以后为每1亿齒虫用100g的营养强化剂强化营养，直至35~50日 龄，优选40~46日龄。
[0023] 进一步地，步骤S2中，营养强化后的轮虫的投喂量为:仔鱼3~4日龄，每日的投喂 量为0.4~0.6亿个/50m3，再由5日龄每日1.2~1.8亿个/50m 3 (本发明中提到的50m3均指 50m3的培养池)逐渐增加至21日龄或22日龄或23日龄的18~19亿个/50m 3，此后，再由18~19 亿个/50m3递减至投喂结束时的6~7亿个/50m3。
[0024] 进一步地，5~6日龄每日1.5或1.6亿个/50m3培养池，7~8日龄每日2.8~3.1亿 个/50m 3，9~13日龄每日4 · 8~5 · 2亿个/50m3，14~15日龄每日8 · 0~8 · 2亿个/50m3，16~17 日龄每日11.8~12.0亿个/50m3,18~19日龄每日15.0~15.5亿个/50m 3，20~21日龄每日 17.0~17.5亿个/50m3,22日龄每日18.0~18.4亿个/50m 3,23~25日龄每日17.0~17.9亿 个/50m3，26~28日龄每日6 · 5~7 · 0亿个/50m3。
[0025] 进一步地，5~6日龄每日1 · 5亿个/50m3，7~8日龄每日3 · 0亿个/50m3，9~13日龄每 日5 · 0或5 · 1亿个/50m3，14~15日龄每日8 · 1或8 · 2亿个/50m3，16~17日龄每日11 · 8或11 · 9或 12 ·0亿个/50m3,18~19日龄每日15.2或15.3或15.4或15.5亿个/50m3，20~21日龄每日17.0 或17 · 1或17 · 2或17 · 3亿个/50m3，22日龄每日18 · 2亿个/50m3，23日龄每日17 · 9亿个/50m3，24 日龄每日17 · 7亿个/50m3，25日龄每日17 · 4亿个/50m3; 26~28日龄每日6 · 6~7 · 0亿个/50m3。 [0026]进一步地，步骤S3中，营养强化后的卤虫的投喂量为：由12日龄每日0.7~0.8亿 个/50m 3培养池逐渐增加至20~31日龄的2.9~3.1亿个/50m3培养池，此后，再由2.9~3.1亿 个/50m 3培养池递减至投喂结束时的1.3~1.5亿个/50m3培养池。
[0027] 进一步地，从仔鱼3日龄开始投喂小球藻，投喂量为：1亿个/50m3,投喂至14~16日 龄，此后，其投喂量增加至:3亿个/50m3，投喂至26~30日龄。
[0028]进一步地，所述营养强化剂中DHA的质量百分比为:24~25 %，所述EPA的质量百分 比分别为：17~19%，所述维生素的含量为：IU/lOOg 450~530，所述氨基酸的含量为:5000 ~6000mg/100g。优选地，所述营养强化剂中DHA的质量百分比分别为:24.6%，EPA的质量百 分比为：18.05%，维生素的含量为：IU/lOOg 460~500，氨基酸的含量为：5600~5900mg/ 100g0
[0029] 进一步地，维生素包括VA、VD和VE，其含量为:VA: IU/100g< 100，VD: IU/lOOg 377， VE: IU/100g<0.5;所述氨基酸的成份包括丙氨酸750mg/100g;天门冬氨酸1260mg/100g;甘 氨酸640mg/100g;组氨酸240mg/100g;异亮氨酸400mg/100g;亮氨酸700mg/100g;赖氨酸 530mg/100g;苯丙氨酸420mg/100g;脯氨酸400mg/100g;丝氨酸460mg/100g。
[0030] 进一步地，步骤S5中，所述配合饲料的用量为仔鱼体重呈反比例关系，3~5日龄按 体重的8~10%投喂，5日龄以后逐渐递减，到30日龄以后按3~5%投喂，