作为二肽基肽酶Ⅳ抑制剂及制备方法和用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药化学领域，具体涉及人参皂苷Rg5作为二肽基肽酶IV抑制剂及制 备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 糖尿病是一种以高血糖为特征的常见内分泌代谢性疾病。近年来，随着人民生活 水平的提高、生活方式的改变及人口老龄化，糖尿病的发病率不断升高。另外，餐后高血糖 和高胰岛素血症是发生糖尿病大血管并发症的独立危险因素。虽然有用于治疗糖尿病综合 征的药物，但是今天在对糖尿病病人的治疗中最具有挑战的目标仍然是使血糖水平尽可能 地接近正常。
[0003] 近年来，在糖尿病新药开发领域，从胰岛素的新剂型，到降糖药的新作用机制，如 GLP-I类似物，DPP-IV抑制剂和SGLT-2抑制剂等，都取得了极大的进展。
[0004] 人体摄入的碳水化合物经过小肠上皮细胞的酶（如淀粉酶和α-葡萄糖苷酶）的水 解作用生成葡萄糖之后，才被吸收进入血液循环。DPP-4作为一种丝氨酸蛋白酶，在肠道中 高表达，它能够分解肠道细胞分泌的肠促胰岛素 (GLP-1)。通过抑制DPP-4活性，而阻断其分 解GLP-I，使GLP-I能够持续发挥刺激胰岛素分泌、抑制升糖素、抑制胃排空和让胰岛细胞重 生等作用，从而降低血糖。
[0005] 自2009年至今，我国相继批准引进了全球新一代二肽基肽酶IV(DPP-4)抑制剂类 药物西格列汀、维格列汀、沙格列汀、利格列汀、阿格列汀和西格列汀双胍等6个药物。DPP-4 抑制剂是近年研发的一种新型口服降糖药，目前在临床使用越来越广泛，不同的DPP-4抑制 剂在结构和药物代谢动力学上虽存在明显差异，但所有DPP-4抑制剂均显示出相近的降糖 效果和良好的安全性，因此这一类药物也被越来越多地应用在降血糖临床治疗上。从而推 动了国内糖尿病治疗市场的快速发展。
[0006] 现有的DPP-4抑制剂大多为化学合成小分子，源于中药的DPP-4抑制剂还少见报 道。
[0007] 从已知的具有一定降糖效果的中药方中提取有效成分，进而分析有效成分的化学 组成、作用机理，是筛选药用化合物的一种有效途径。消渴安胶囊是目前治疗2型糖尿病的 临床经验方，具有清热生津、益气养阴、活血化瘀的功效，具有一定的降血糖作用。其处方包 括地黄、知母、黄连、地骨皮、枸杞子、玉竹、人参、丹参八味药材。本课题组在前期研究中从 消渴安胶囊内容物中分析得到一种化合物人参皂苷Rg 5。
[0008] 人参阜苷(Ginsenoside)是一种固醇类化合物，三砲阜苷，主要存在于人参属药材 中。人参皂苷都具有相似的基本结构，都含有由30个碳原子排列成四个环的留烷类固醇核。 人参皂苷单体Rg5是二醇皂苷经过水解的产物，研究证明，人参皂苷Rg 5可以显著降低肺癌的 发生率。但是本发明所述的人参皂苷Rg5，是在筛选研究过程中发现的一种DPP-4抑制剂，其 在防治糖尿病的作用尚未见有报道。
[0009]
【发明内容】
[0010] 本发明提供了人参皂苷Rg5在抑制DPP-4活性方面的新用途，为糖尿病的防治提供 新的药物选择。
[0011] 人参皂苷Rg5作为二肽基肽酶IV抑制剂的用途。
[0012]研究证明，人参皂苷Rg^有抑制DPP-4活性的作用。采用课题组建立的DPP-4抑制 剂筛选方法，检测到人参皂苷Rgs在25 mg/L浓度下对DPP-4抑制率为96.03%。
[0013] 本发明提供了人参皂苷Rg5在制备治疗糖尿病药物中的应用。
[0014] 本发明还提供了一种治疗糖尿病的药物组合物，包含作为有效成分的人参皂苷 Rg5〇
[0015] 作为优选，还包括药剂学上接受的药物赋形剂或载体。药物赋形剂或载体可以赋 予药物一定剂型，有效保证药物有效成分的释放和吸收。具体制剂按照药剂学上记载的方 法制备即可。
[0016] 作为优选，所述药物组合物为口服给药的剂型。口服给药方式简便，不直接损伤皮 肤或黏膜，减少感染风险。由于糖尿病患者需要长期用药，故口服给药是一种经济安全的方 式。口服给药的剂型可以为溶液剂、片剂、胶囊剂或颗粒剂。
[0017] 作为优选，所述口服给药的剂型为滴丸剂。滴丸与其他剂型相比具有提高药物生 物利用度、增加药物稳定性、缓释效应、减少药物在体内灭活等优点，并且制备滴丸剂的设 备简单、操作简便、工艺周期短、生产率高，所以本发明选用滴丸剂为优选剂型。
[0018] 本发明还提供了一种药物组合物的制备方法，取人参皂苷Rg5与聚乙二醇混合均 匀，加热熔融得到混合药液，混合药液滴至液体石蜡中，除油，制得滴丸。
[0019]本发明还提供了一种药物组合物的制备方法，取人参皂苷Rg50.5g与10.5g的聚乙 二醇混合均匀，加热熔融得到混合药液，混合药液滴至液体石蜡中，除油，制得滴丸。
[0020] 本发明在前期研究中，从消渴安胶囊内容物中分离提取到一种具有抑制DPP-^g 性的化合物人参皂苷Rg5,人参皂苷Rg 5来源于人参属药材，因此，本发明提供了一种从人参 中提取人参皂苷Rg5的方法。
[0021] 一种人参皂苷Rg5的制备方法，包括以下步骤： (1)将人参粉碎后加入甲醇中，超声提取，获得提取液。
[0022] (2)将提取液浓缩成浸膏，与大孔树脂进行拌样，装柱后用乙醇-水洗脱，合并人 参皂苷Rg 5流分的洗脱液，浓缩干燥后得粗品。
[0023] (3)将粗品溶解在无水乙醇中，采用制备液相色谱纯化，对目标流分进行浓缩、干 燥，得到所述人参皂苷Rg 5。
[0024] 利用超声波振动使甲醇快速进入胶囊内容物中，将内容物中的有机成分完全地溶 于甲醇中。作为优选，步骤（1)中，加入5~10倍量的甲醇超声提取进行1~3次，合并滤液得提 取液。
[0025]作为优选，大孔树脂为反相硅胶。步骤(2)中，依次用水、浓度<40%的乙醇洗脱杂 质，再收集浓度2 95%的乙醇洗脱的洗脱液。
[0026]作为优选，步骤(3)中，制备液相色谱条件为:色谱柱填料SB-C18,21.2 mm X 250 mm，7 μπι;流动相为水-乙腈，两者的体积比为70:30,流速为5~10 mL/min;柱温为25~35°C; 收集39~42min时间段内的流分即为目标流分。
[0027] 本发明采用大孔树脂与制备液相色谱相结合的提取分离工艺，能够有效地除去 糖、蛋白质、氨基酸等杂质，提高有效成分的含量。采用本发明的提取方法得到的中药有效 组分化学成分简单明确，在药理研究上易于阐明其作用机制，在生产应用中易于药物的质 量控制。
[0028] 本发明具备的有益效果：（1)本发明提供的中药有效成分人参皂苷1^5具有抑制 DPP-4活性的作用，为糖尿病的防治提供新的药物选择；（2)本发明采用大孔树脂与制备液 相色谱相结合的提取工艺，可以快速准确地得到人参皂苷Rg 5。
【附图说明】
[0029]图1为中药有效组分的LC-MS分析图。
[0030]图2为中药有效组分中人参皂苷Rg5的质谱图。
[0031]图3为阳性药与中药有效组分对DPP-4的抑制作用，其中C13为人参皂苷Rg5。
[0032]图4为人参皂苷Rgdl]^ljDPP-4量效关系图。
[0033]图5为人参皂苷Rgd#3T3-Ll细胞诱导分化的影响（油红0染色照片）。
[0034]图6为人参皂苷Rg5对胰岛素抵抗BNL CL2细胞葡萄糖消耗作用的影响。
【具体实施方式】
[0035]本发明结合实施例进一步详细说明本发明的实质内容，该实施例仅用于说明本发 明而并非对本发明的限制。
[0036]实施例一消渴安有效组分的制备 取120g消渴安胶囊内容物加入10倍量甲醇，超声提取得提取液，将提取液浓缩成浸膏， 并将其与反相硅胶进行拌样，用反相硅胶柱对其进行分离，首先用去离子水作为流动相，得 洗脱液I，弃去，再用40%乙醇作为流动相，得洗脱液II，将洗脱液II浓缩干燥后得样品0.145
[0037] 实施例二消渴安有效组分的制备 取120g消渴安胶囊内容物加入10倍量甲醇，超声提取得提取液，将提取液浓缩成浸膏， 并将其与反相硅胶进行拌样，用反相硅胶柱对其进行分离，首先用去离子水作为流动相，得 洗脱液I，弃去，再用40%乙醇作为流动相，得洗脱液II，弃去，然后改换95%乙醇为流动相，得 洗脱液III，将洗脱液III浓缩干燥后得样品0.225 g。
[0038] 实施例三消渴安有效组分的制备 取实施例一、二的样品用制备液相色谱继续分离。制备色谱的分离条件：色谱柱为 Agient制备柱(Zorbax SB_Ci8; 21.2 _ X 250 mm, 7 μπι)，流动相为水(A)和乙腈(B)，梯 度洗脱程序如下：〇 min，30%B;60 min，75%B;63 min，80% B;65 min，100% Β;流速IOmL/ min;检测波长 210、