椎间盘退化的治疗的制作方法
【专利说明】
[00011 本申请是申请日为2009年3月23日，申请号为200980118119.6，发明名称为"椎间 盘退化的治疗"的发明专利申请的分案申请。
技术领域
[0002] 本发明涉及椎间盘退化的阻止和延缓。本发明也涉及通过阻止或延缓椎间盘退化 治疗退化的椎间盘。本发明也涉及将软骨细胞引入到损伤的椎间盘区中以及阻止或延缓该 椎间盘退化的方法。本发明也涉及将至少一种编码转化生长因子β超家族成员的基因引入 到至少一种哺乳动物结缔组织细胞中的方法，用于阻止或延缓哺乳动物宿主中的椎间盘退 化。本发明也涉及将软骨细胞和含有编码转化生长因子β超家族成员的基因的结缔组织细 胞的混合物引入到损伤的椎间盘区中以及阻止或延缓该椎间盘退化的方法。
【发明内容】
[0003] -方面，本发明涉及阻止或延缓椎间盘缺损部位的椎间盘退化的方法，该方法包 括将哺乳动物结缔组织细胞注射到椎间盘缺损部位中。该过程优选不使用支架或任何细胞 支撑结构。优选地，使用软骨细胞或成纤维细胞，并且受试者优选为人类。如果使用软骨细 胞，则该软骨细胞优选为非盘软骨细胞(non-disc chondrocyte)，或者幼年软骨细胞，即从 小于两岁的孩子中分离出的细胞。其它方面，该软骨细胞可以是预处理的软骨细胞(primed chondrocyte)。特别地，该结缔组织细胞可以是相对需要治疗的哺乳动物受试者的同种异 体(allogeneic)型的。
[0004] -方面，本发明涉及将同种异体幼年软骨细胞或同种异体的非盘软骨细胞引入到 损伤的椎间盘区中并阻止或延缓该椎间盘退化的方法。
[0005] -方面，本发明可用来阻止或延缓已损伤、撕裂或突出的椎间盘区域的进一步退 化。
[0006] 另一方面，本发明涉及阻止或延缓哺乳动物椎间盘缺损部位的椎间盘退化的方 法，该方法包括a)将编码具有椎间盘再生功能的蛋白质的基因插入到哺乳动物细胞中，和 b)将哺乳动物结缔组织细胞移植到椎间盘缺损部位中。该过程优选不使用支架或任何细胞 支撑结构。在这种方法中，该基因可属于TGF-β超家族，例如TGF-β，并优选为TGF-βΙ。该结缔 组织细胞可以是软骨细胞或成纤维细胞。更优选使用软骨细胞，且哺乳动物受试者优选为 人类。该结缔组织细胞可以是相对哺乳动物受试者的同种异体型的。
[0007] 又一方面，本发明涉及阻止或延缓哺乳动物椎间盘缺损部位的椎间盘退化的方 法，该方法包括a)将编码具有椎间盘再生功能的蛋白质的基因插入到第一哺乳动物结缔组 织细胞中，和b)将a)中哺乳动物结缔组织细胞和未经修饰的(unmodified)第二哺乳动物结 缔组织细胞的混合物移植到椎间盘缺损部位中。该过程优选不使用支架或任何细胞支撑结 构。在这种方法中，该基因可属于TGF-β超家族，例如TGF-β，优选TGF-βΙ。该第一和第二哺乳 动物结缔组织细胞可以是软骨细胞或成纤维细胞。在软骨细胞的情况下，该软骨细胞可以 是非盘软骨细胞或幼年软骨细胞。特别地，用作第二哺乳动物结缔组织细胞的软骨细胞可 以是预处理的软骨细胞。在另一方面，该第一或第二哺乳动物结缔组织细胞中的一个或两 个都可以为相对哺乳动物受试者或相对彼此的同种异体。
【附图说明】
[0008] 图I-A~图I-F示出损伤盘退化的减慢、延缓或阻止。（A)示出手术前兔脊柱的MRI 放射图片；（B)示出手术后四（4)周兔脊柱的MRI放射图片，其中（i)使L1/2盘损伤并注射产 生TGF-βΙ的软骨细胞，（ii)可以看到脊柱部位L2/3处无穿刺和无治疗，和(iii)使L3/4盘损 伤并注射1:3比例的产生TGF-βΙ的软骨细胞和未转导的人软骨细胞混合物；箭头指向L1/2 和L3/4盘区。（C)示出手术后八(8)周兔脊柱的MRI放射图片，其中（i)使L1/2盘损伤并注射 产生TGF-βΙ的软骨细胞，（ii)脊柱部位L2/3处无穿刺和无治疗，为对照组，和（iii)使L3/4 盘损伤并且注射1:3比例的产生TGF-βΙ的软骨细胞和未转导的人软骨细胞混合物;箭头指 向L1/2和L3/4盘区。（D)示出上面(A)中描述的兔的X射线放射图片，其用于获得椎间盘的盘 高度指数从而测量它的形态、它的退化或再生水平。（E)示出上面(B)中描述的兔的X射线放 射图片，其用于获得椎间盘的盘高度指数。（F)示出上面(C)中描述的兔的X射线放射图片， 其用于获得椎间盘的盘高度指数。特别地，混合的细胞治疗具有椎间抗退化作用。
[0009] 图2-A~图2-F示出损伤盘退化的减慢、延缓或阻止。（A)示出手术前兔脊柱的MRI 放射图片；（B)示出手术后四（4)周兔脊柱的MRI放射图片，其中（i)使L1/2盘损伤并注射产 生TGF-βΙ的软骨细胞，（ii)脊柱部位L2/3处无穿刺和无治疗，为对照组，和（iii)使L3/4盘 损伤并且注射1:3比例的产生TGF-βΙ的软骨细胞和未转导的人软骨细胞混合物;箭头指向 L1/2和L3/4盘区。（C)示出手术后八(8)周兔脊柱的MRI放射图片，其中（i)使L1/2盘损伤并 注射产生TGF-βΙ的软骨细胞，（ii)可以看出脊柱部位L2/3处无穿刺和无治疗，和（i ii)使 L3/4盘损伤并且注射1:3比例的产生TGF-βΙ的软骨细胞和未转导的人软骨细胞混合物；箭 头指向L1/2和L3/4盘区。(D)示出上面(A)中描述的兔的X射线放射图片，其用于获得椎间盘 的盘高度指数从而测量它的形态、它的退化或再生水平。（E)示出上面(B)中描述的兔的X射 线放射图片，其用于获得椎间盘的盘高度指数。(F)示出上面(C)中描述的兔的X射线放射图 片，其用于获得椎间盘的盘高度指数。特别地，混合的细胞治疗具有椎间抗退化作用。
[0010]图3-A~图3-D示出损伤盘退化的减慢、延缓或阻止。（A)示出手术前兔脊柱的MRI 放射图片；（B)示出手术后四（4)周兔脊柱的MRI放射图片，其中（i)使L1/2盘损伤并注射产 生TGF-βΙ的软骨细胞，（ii)脊柱部位L2/3处无穿刺和无治疗，为对照组，和（iii)使L3/4盘 损伤并且注射1:3比例的产生TGF-βΙ的软骨细胞和未转导的人软骨细胞混合物;箭头指向 L1/2和L3/4盘区。（C)示出上面(A)中描述的兔的X射线放射图片，其用于获得椎间盘的盘高 度指数从而测量它的形态、它的退化或再生水平。(D)示出上面(B)中描述的兔的X射线放射 图片，其用于获得椎间盘的盘高度指数。特别地，混合的细胞治疗具有椎间抗退化作用。
[0011]图4-A~图4-D示出损伤盘退化的减慢、延缓或阻止。（A)示出手术前兔脊柱的MRI 放射图片；（B)示出手术后四（4)周兔脊柱的MRI放射图片，其中（i)使L1/2盘损伤并注射1:3 比例的产生TGF-βΙ的软骨细胞和未转导的人软骨细胞混合物，（ii)脊柱部位L2/3处无穿刺 和无治疗，为对照组，和（i i i)使L3/4盘损伤并注射产生TGF-βΙ的软骨细胞;箭头指向L1/2 和L3/4盘区。（C)示出上面(A)中描述的兔的X射线放射图片，其用于获得椎间盘的盘高度指 数从而测量它的形态、它的退化或再生水平。（D)示出上面(B)中描述的兔的X射线放射图 片，其用于获得椎间盘的盘高度指数。特别地，产生TGF-m的软骨细胞治疗具有椎间抗退化 作用。
[0012] 图5-A~图5-D示出损伤盘退化的减慢、延缓或阻止。（A)示出手术前兔脊柱的MRI 放射图片；（B)示出手术后四（4)周兔脊柱的MRI放射图片，其中（i)使L1/2盘损伤并注射1:3 比例的产生TGF-βΙ的软骨细胞和未转导的人软骨细胞混合物，（ii)脊柱部位L2/3处无穿刺 和无治疗，为对照组，和（i i i)使L3/4盘损伤并注射产生TGF-βΙ的软骨细胞;箭头指向L1/2 和L3/4盘区。（C)示出上面(A)中描述的兔的X射线放射图片，其用于获得椎间盘的盘高度指 数从而测量它的形态、它的退化或再生水平。（D)示出上面(B)中描述的兔的X射线放射图 片，其用于获得椎间盘的盘高度指数。特别地，产生TGF-βΙ的软骨细胞治疗和混合细胞治疗 具有椎间抗退化作用。
[0013] 图6-A~图6-D示出损伤盘退化的减慢、延缓或阻止。（A)示出手术前兔脊柱的MRI 放射图片；（B)示出手术后四（4)周兔脊柱的MRI放射图片，其中（i)使L1/2盘损伤并注射细 胞培养基DMEM，（ i i)脊柱部位L2/3处无穿刺和无治疗，为对照组，和（ii i)使L3/4盘损伤并 注射未转导的软骨细胞;箭头指向L1/2和L3/4盘区。（C)示出上面(A)中描述的兔的X射线放 射图片，其用于获得椎间盘的盘高度指数从而测量它的形态、它的退化或再生水平。（D)示 出上面(B)中描述的兔的X射线放射图片，其用于获得椎间盘的盘高度指数。未转导的软骨 细胞治疗具有椎间抗退化作用。
[0014] 图7-A~图7-F示出损伤盘退化的减慢、延缓或阻止。（A)示出手术前兔脊柱的MRI 放射图片；（B)示出手术后四（4)周兔脊柱的MRI放射图片，其中（i)使L1/2盘损伤并注射细 胞培养基DMEM，（ i i)脊柱部位L2/3处无穿刺和无治疗，为对照组，和（ii i)使L3/4盘损伤并 注射未转导的软骨细胞;箭头指向L1/2和L3/4盘区。（C)示出手术后八(8)周兔脊柱的MRI放 射图片，其中（i)使L1/2盘损伤并注射细胞培养基DMEM，（ii)脊柱部位L2/3处无穿刺和无治 疗，为对照组，和（iii)使L3/4盘损伤并注射未转导的软骨细胞;箭头指向L1/2和L3/4盘区。 (D)示出上面(A)中描述的兔的X射线放射图片，其用于获得椎间盘的盘高度指数从而测量 它的形态、它的退化或再生水平。（E)示出上面(B)中描述的兔的X射线放射图片，其用于获 得椎间盘的盘高度指数。(F)示出上面(C)中描述的兔的X射线放射图片，其用于获得椎间盘 的盘高度指数。未转导的软骨细胞治疗具有椎间抗退化作用。
[0015]图8-A~图8-F示出损伤盘退化的减慢、延缓或阻止。（A)示出手术前兔脊柱的MRI 放射图片；（B)示出手术后四（4)周兔脊柱的MRI放射图片，其中（i)通过针穿刺使T12/L1盘 损伤，无注射，（ii)脊柱部位L1/2处无穿刺和无治疗，为对照组，和(iii)使L2/3盘损伤并注 射未转导的软骨细胞;箭头指向T12/L1和L2/3盘区。（C)示出手术后八(8)周兔脊柱的MRI放 射图片，其中（i)通过针穿刺使T12/L1盘损伤，无注射，（ii)脊柱部位L1/2处无穿刺和无治 疗，为对照组，和（iii)使L2/3盘损伤并注射未转导的软骨细胞;箭头指向T12/L1和L2/3盘 区。（D)示出上面(A)中描述的兔的X射线放射图片，其用于获得椎间盘的盘高度指数从而测 量它的形态、它的退