一种添加单链寡聚脱氧核苷酸获得iv晶型甲糖宁的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种获得甲糖宁药用优势晶型的方法，特别是涉及一种添加单链寡聚 脱氧核苷酸获得IV晶型甲糖宁的方法。
【背景技术】
[0002] 多晶型现象涉及到医药、农药、食品、染料和爆炸品等领域，自被发现以来一直受 到了人们的广泛关注。对化学药物而言，绝大多数的有机化学药物都存在多晶型现象。对 于同一种物质的不同晶型，虽然化学组成相同，但是表现出不同的物理化学性质，如密度、 硬度、熔点、溶解性和晶体形貌等。
[0003] 在制药领域，药物多晶型的研究一直以来都是药物研发和生产领域的一个重要课 题。多晶型将会影响药物的药效、生物利用度和毒副作用。例如，降血压药尼群地平的三种 晶型中，III晶型的生物利用度要比I晶型和II晶型高很多。[恒杰，陈大为，任耘，等，尼群地 平多品型家兔体内药动学及生物利用度的研究，中国医院药学杂志，2009, 29 (1)，29-32]。 同一种药物的不同晶型间存在溶解度、生物利用度和稳定性等差异，因此有效筛选优势药 物晶型对药物工业的发展具有重要的意义。
[0004] 甲糖宁（Tolbutamide，简写为TB)，又称甲苯磺丁脲，它是一种口服的磺脲类降血 糖药，主要用于治疗非胰岛素依赖型（II型）糖尿病患者。其药理作用是促进胰腺胰岛B 细胞分泌胰岛素，从而达到降低血糖的作用。
[0005] 甲糖宁的分子式为C12HlsN20 3S，是一种无臭无味的白色固体药物，易溶于乙醇、氯 仿等有机溶剂，但难溶于水。甲糖宁的分子骨架中含有一个苯环（_Ph)、一个砜基（_S0 2_)、 一个羰基（C = 0)和两个亚氨基（-NH-)等特征基团。其中，苯环为刚性骨架分子， 而-S-N-C-N-C-的长链为柔性骨架分子，在一定的条件下易发生扭转，形成构象多晶型。文 献报道甲糖宁有五种晶型I~V，其中对于前四种晶型的报道较为详细，热力学稳定性顺序 为I>III>II>IV，生物利用度顺序为IV>II>III>I。从生物利用度方面来看，IV晶型是最有 效的药用理想晶型。
[0006] 目前，关于甲糖宁多晶型调控的传统方法包括改变溶剂、以小分子作为添加剂和 以自组装膜作为模板等。
[0007] 作为生物大分子，DNA具有灵活多变的构象，富含氢键供体及受体，并且作为遗 传信息的存储物质，对人体无毒无害。在药物作用方面，以及对成核聚集的影响使其可 能成为一种能够有效地调控多晶型的优势添加剂。Ramalho等使用分子动力学考察了 鲑鱼DNA与三种放射致敏剂的相互作用，发现该DNA与这几种药物都有很强的结合作 用。[Ramalho T. C. , Franca T. C. C. , Cortopassi ff. A. , et al. , Topology and dynamics of the interaction between5-nitroimidazole radiosensitizers and duplex DNA studied by a combination ofdocking, molecular dynamic simulations and NMR spectroscopy, Journal of Molecular Structure, 2011，992(1-3)，65-71] DTanida等通过 模拟计算，分析了荼碱和RNA的自由能，说明RNA和荼碱之间有紧密的结合。[TanidaY.，Ito Μ. , Η. F. , Calculation ofabsolute free energy ofbinding for theophylline and its analogs to RNA aptamer using nonequilibrium work values, Chemical Physics，2007, 337 (1-3) : 135-143]目前使用生物大分子调节药物晶型还未见报道。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种添加单链寡聚脱氧核苷酸获得IV 晶型甲糖宁的方法。
[0009] 本发明的技术方案概述如下：
[0010] -种添加单链寡聚脱氧核苷酸获得IV晶型甲糖宁的方法，包括如下步骤：
[0011] ⑴将过饱和度为3. 5的过饱和的甲糖宁溶液在10-30°c下超声处理使溶解，所述 甲糖宁溶液的溶剂为体积比为2:1的乙醇和水；
[0012] (2)将超声处理后的溶液用0. 22 μ m孔径的有机滤膜过滤，除去不溶物，加入单链 寡聚脱氧核苷酸使浓度为〇. 2-2. 0mg/L，振荡混合均匀；
[0013] (3)将步骤⑵获得的混合液，以降温速率为1-10°C /min降温至4°C ;
[0014] (4)在4°C条件下结晶3-12小时，抽滤，得到的晶体在室温下干燥12-36小时，得 到IV晶型甲糖宁。
[0015] 超声处理的温度优选25°C。
[0016] 单链寡聚脱氧核苷酸为Tx，所述X = 5-20之一。
[0017] 优选地，步骤（2)加入单链寡聚脱氧核苷酸使浓度为1. 0-2. 0mg/L。
[0018] 步骤（3)降温速率优选为1. 0-7. 0°C /min。
[0019] 本发明的方法采用单链寡聚脱氧核苷酸作为药物晶型调控添加剂，无毒无害，工 艺简单，容易制得亚稳态晶型药物。
【附图说明】
[0020] 图1为实施例1制备的IV晶型甲糖宁XRD谱图。
[0021] 图2为实施例2制备的IV晶型甲糖宁XRD谱图。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，本发明的实施例是为了使本领域 的技术人员能够更好地理解本发明，但并不对本发明作任何限制。
[0023] 实验中采用的是以乙醇水溶液（乙醇和水的体积比为2:1)为溶剂配制的初始过 饱和度为3. 5的甲糖宁溶液（155. 97mg/mL)。
[0024] 过饱和度（S)是根据平衡时溶解度定义的，S = C/C*，其中C是溶质的浓度，C*是 对应温度下饱和时的浓度，即溶解度。4°C时，TB在乙醇水和乙醇中的溶解度分别为10. 1和 44. 5mg/mL，而在30°C时，TB在两种溶剂中溶解度分别为44. 6和168. 8mg/mL。
[0025] 单链寡聚脱氧核苷酸：
[0026] T5:5' -TTTTT-3' ；
[0027] T6:5' -TTTTTT-3' ；
[0028] T7:5' -TTTTTTT-3' ；
[0042] 上述单链寡聚脱氧核苷酸由宝生物工程（