°C~45 °C之间。
[0035] 实施例2、5_烯-去甲斑蝥素单酸苄酯3的制备:
[0036] 称取5g原料2溶于40ml二氯甲烷中，形成悬浮液。然后向悬浮液中逐滴加入苯甲醇 4.7ml，以及DMAP 366mg.室温下搅拌3天，旋蒸除去溶剂，得到5，6-双脱氢去甲斑蝥素单甲 酯2粗产品。将得到的粗产品溶解于25ml二氯甲烷中，用7ml的1N盐酸洗涤一次，留下有机 相，再用l〇ml饱和食盐水洗涤一次，留下有机相，加入适量无水MgS0 4干燥15-30分钟，抽滤， 滤饼用二氯甲烷冲洗2-3次，留下滤液，将滤液旋蒸，得到5-烯-去甲斑蝥素单酸苄酯3的白 色固体（4.08 8)，收率为50%。1顯]\?(〇15〇-(16):312.43(8，1!〇,7.30-7.35(111，5!〇,7.38(111， 5H)，6.43((1, J = 4Hz，2H) ,4.92-5.10(m，4H); 13CNMR(DMS〇-d6) :δ173·07,171.93,137.15， 136.97,128.79,128.40,80.49,80.16,66.31,47.14,46.41.
[0037] 实施例3.喜树碱(2-苄氧羰基-5-烯)去甲斑蝥素酸酯4的制备
[0038]
[0039] 往反应瓶中加入喜树碱(60mg，0.17mmol)和10ml二氯甲烧，然后依次加入5-稀-去 甲斑蝥素单酸苄酯（3,93.211^，0.34111111〇1，26911.)30(：1(161.311^，0.84111111〇1)以及01^? (13.4mg，0.1 lmmol)。反应液加热回流24小时。加入二氯甲烷(30ml)稀释反应液，依次用水、 饱和碳酸钠溶液和饱和食盐水洗涤。有机相用无水MgS(k干燥。溶剂旋干后，剩余物柱层析 纯化得到一黄色固体的偶联产物(化合物4，73.5mg)，收率71.6 %。Rf = 0.44 (DCM/MeOH = 95/5).1HNMR(CDCl3)：58.39(s,lH),8.20(d,J = 8Hz,lH),7.94(d,J = 8Hz,lH) ,7.84(d,J = 8Hz,lH),7.81(s,lH),7.67(t ,J = 8Hz,lH),7.38(m,5H),7.18(s,lH),6.99(d ,J = 4Hz,lH), 5.71(d,J = 8Hz,lH) ,5.42(d,J = 8Hz,lH) ,5.27(d,J=12Hz,lH) ,2.18-2.34(m,2H) ,1.01 (t，J = 8Hz，3H)，0.87-0.88(m，4H) .13C匪R(CDC13) :δ165·84，163·27，162·53，156·27， 151.16,147.82,145.41,144.22,134.38,133.94,131.22,130.19,129.61,128.43,127.66， 127.57,127.39,127.17,127.16,127.07,119.26,108.97,94.74,66.31,66.12,48.95， 36.07,30.81,28.68,21.67,13.40,6.58.
[0040] 实施例5、新型喜树碱衍生物的活性测试
[0041 ]细胞株和溶剂
[0042] 人肝癌细胞HEPG2;
[0043] 人胃癌细胞BGC803;
[0044] 人结肠癌细胞SW480;
[0045] 细胞培养于含10%胎牛血清的RPMI 1640中培养基；
[0046] 溶剂:二甲亚砜(简称为DMS0)。
[0047] CCK-8染色法检测细胞抗肿瘤活性实施方案
[0048] 选用待测肿瘤活细胞比例达90 %以上的细胞进行实验。细胞增殖抑制试验采用 EnoGeneCell?Counting Kit-8(简称为CCK-8)细胞活力检测试剂盒。细胞消化、计数、制成 浓度为1 X 105个/mL的细胞悬液，96孔板中每孔加入100yL细胞悬液(每孔1 X 104个细胞）； 96孔板置于37°C，5%⑶2培养箱中培养24小时;每孔加入100yL相应的含药物的培养基，作 用浓度为50yMol/L(即：微摩尔/升），同时设立阴性对照组，溶媒对照组，阳性对照组（阳性 对照分别选用斑蝥素和喜树碱），每组5复孔;96孔板置于37°C，5%C02培养箱中培养72小时 后;每孔加入10yL CCK-8溶液，将培养板在培养箱内孵育4小时，用酶标仪测定在450nm处的 吸光值(简称0D值），计算各个化合物对人肝癌细胞HEPG2、人胃癌细胞BGC803和结肠癌细胞 SW480的抑制率。实验结果详见表1-3。
[0049]表1:对人肝癌细胞HEPG2的体外增殖活性的抑制率 [0050]
[00511表2:对人胃癌细胞BGC803的体外增殖活性的抑制率
[0052]
[0053]表3:对人结肠癌细胞SW480的体外增殖活性的抑制率
[0054]
[0055]~表1-3实验结果看出，本发明化合物
4具有很好体外抗肿瘤活性，其50yMol/L作用 浓度对于人胃癌细胞BGC803和结肠癌细胞SW480的体外抑制率高达70%以上，与阳性对照 药物喜树碱和斑蝥素的抑制活性相当；而对于人肝癌细胞HEPG2,也有一定的抑制活性。
[0056]此外，相对于阳性对照药品喜树碱和斑蝥素，由于引入带氧桥环的去甲斑蝥素类 似结构，其对于酸较为敏感，易于水解，从而可增强药代动力学效力。因此，化合物4是一种 适合的抗肿瘤候选药物，尤其是作为抗胃癌、抗结肠癌及抗肝癌的候选药物，最优选是作为 抗胃癌和抗结肠癌的候选药物。
【主权项】
1. 喜树碱-20位醋衍生物，其结构式如式4所示，2. 根据权利要求1所述的喜树碱-20位醋衍生物4的合成方法，包括：1 )、侧链化合物3与 喜树碱在有机溶剂中，在禪合剂及有机碱催化剂作用下反应得到偶联产物4,反应式见W 下：3. 根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，步骤1)所述的禪合剂选自1-(3-二甲 氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐或二环己基碳二亚胺。4. 根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，步骤1)所述的所述有机碱选自=乙 胺、二异丙基胺或4-二甲氨基化晚。5. 根据权利要求2中所述的用于合成喜树碱-20位醋衍生物4的侧链化合物3。6. 根据权利要求5所述的侧链化合物3的制备方法，包括:a)、W巧喃为原料，与化合物1 在有机溶剂中反应得到化合物2，b)、化合物2在有机溶剂中与苯甲醇反应得到化合物3,合 成路线见W下：7. 根据权利要求1所述的喜树碱-20位醋衍生物4用于制备抗肿瘤药物的用途。8. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述肿瘤包括胃癌、结肠癌或肝癌。9. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述肿瘤包括胃癌或结肠癌。
【专利摘要】本发明提供了结构式如4所示的喜树碱-20位酯衍生物、其制备方法及其抗肿瘤应用。活性测试证明，本发明设计并合成得到的如4所示喜树碱-20位酯衍生物是一种适合的抗肿瘤候选药物，尤其是作为抗肝癌、抗胃癌以及抗结肠癌的候选药物。相对于阳性对照药品喜树碱和斑蝥素，提高了水溶解性，稳定性；对于酸较为敏感，易于水解。此外，本发明的喜树碱去甲斑蝥素酯衍生物的合成方法，原料易得，合成路线收率高，非常易于操作实施。
【IPC分类】A61K31/4745, A61P35/00, C07D519/00
【公开号】CN105646546
【申请号】
【发明人】王先恒, 赵长阔, 杨福红, 贾佳, 吴昆仑
【申请人】遵义医学院
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2015年12月29日