一种蜜蜂巢脾多糖提取物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种蜂产品领域，尤其涉及一种蜜蜂巢脾多糖提取物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 蜜蜂巢脾是蜜蜂生活、贮存食物、繁衍育子的场所，是一种天然的产物。它含有树 月旨、油脂、生物碱、鞣质、有机酸、氨基酸、蛋白质、酶类、昆虫激素、多糖以及苷类等多种生物 活性成分。作为我国传统的动物中药，根据近年来的研究表明蜜蜂巢脾具有治疗鼻炎、急性 乳腺炎、乙型肝炎等疾病的效果。
[0003] 巢脾随着繁育蜜蜂世代的增加，成分也变得相当复杂。老巢脾含有大量蜜蜂生产 和代谢的各种产物，如茧衣、蜂胶、蜂王浆、花粉、蜂蜜等物质。蜜蜂老巢脾的化学成份也较 为复杂，研究发现蜜蜂巢脾水浸膏中含有多糖、生物碱、酶类、生物激素等成分。近年来，多 糖所具有的各种生理功能逐渐为人们所重视，如增强免疫力、降低血糖浓度、降血脂、抗肿 瘤、抗疲劳及抗衰老等种生理功能，在医药和食品领域显示了很好的应用前景，因而受到人 们的广泛关注。而蜜蜂巢脾多糖的提取及应用尚处于空白。
【发明内容】
[0004] 有鉴于此，本发明实施例提供一种蜜蜂巢脾多糖提取物及其制备方法，能够增加 蜜蜂巢脾的利用价值。
[0005] 为达到上述目的，本发明的实施例采用如下技术方案：
[0006] -方面，本发明实施例提供一种蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法，包括：
[0007] -种蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法，包括步骤：
[0008] 步骤1、将蜜蜂巢脾冷冻后，粉碎、过筛后使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥 发乙醚，得到巢脾干燥粉末；
[0009] 步骤2、在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末质量10倍以上的蒸馏水后，加入木瓜 蛋白酶进行酶解得到酶解液;其中，木瓜蛋白酶添加量为每l〇〇g巢脾干燥粉末添加7.2-12 万U，酶解温度为40-60 °C，酶解时间0.5-1.5h;
[0010] 步骤3、将所述酶解液通过120目纱布过滤，取上清液；
[0011] 步骤4、在进行步骤3操作后所得的滤渣中，再加入10倍以上的蒸馏水后，加入7.2-12万U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶，重复上述酶解及过滤操作1-2次;将取得的上清液 合并，到蜜蜂巢脾多糖提取液A;
[0012] 步骤5、将所述蜜蜂巢脾多糖提取液A在80-100°C下进行浓缩l-3h，离心后弃去沉 淀得到蜜蜂巢脾多糖提取液B;
[0013] 步骤6、往蜜蜂巢脾多糖提取液B中加入占其体积1/4的由氯仿和正丁醇配制成的 混合液，充分抽提20min后，进行4000r-10000r/min的离心操作5-20min，取上清液;其中，在 制成的所述混合液中，氯仿和正丁醇的体积比为4:1;对获取的所述上清液再重复本步骤的 操作3次，获得去蛋白蜜蜂巢脾多糖提取液C;
[0014] 步骤7、往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其体积3-5倍的无水乙醇，在0-26°C下醇 析4-24h后，进行4000r-10000r/min的离心操作10-30min，弃上清液并鼓风干燥挥发干乙 醇，得到蜜蜂巢脾多糖提取物。
[0015] 可选地，所述将蜜蜂巢脾冷冻后，粉碎、过筛后使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘 干，挥发乙醚，得到巢脾干燥粉末，包括：将西方蜜蜂Api smell if era L.的三年以上的巢 脾，-20°C冷冻4h以上，粉碎后过筛，巢脾粉使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥发乙醚， 得到巢脾干燥粉末。
[0016] 可选地，所述将蜜蜂巢脾冷冻后，粉碎、过筛后使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘 干，挥发乙醚，得到巢脾干燥粉末，包括：将西方蜜蜂Api smell if era L.的三年以上的巢 脾，-20°C冷冻4h以上，粉碎后过筛，巢脾粉使用乙醚回流除蜡；
[0017] 采用乙醚回流脱脂后使用80%v/v乙醇进行脱脂脱单糖处理；
[0018] 鼓风烘干，得到巢脾干燥粉末。
[0019] 可选地，步骤1中的所述过筛具体为:过50-120目筛。
[0020] 可选地，所述在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末质量10倍以上的蒸馏水后，加 入木瓜蛋白酶进行酶解得到酶解液;其中，木瓜蛋白酶添加量为每l〇〇g巢脾干燥粉末添加 7.2-12万U，酶解温度为40-60 °C，加热时间0.5-1.5h，包括：
[0021 ]在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末质量15倍的蒸馏水后，加入食品级的木瓜蛋 白酶进行酶解得到酶解液;其中，木瓜蛋白酶添加量为每l〇〇g巢脾干燥粉末添加9.6万U，酶 解温度为50 °C，加热时间1.5h;
[0022]所述在进行步骤3操作后所得的滤渣中，再加入10倍以上的蒸馏水后，加入7.2-12 万U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶重复上述酶解及过滤操作1-2次，包括:在进行步骤3 操作后所得的滤渣中，再加入15倍的蒸馏水后，加入9.6万U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白 酶，重复上述酶解及过滤操作2次。
[0023]可选地，所述往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其体积3-5倍的无水乙醇，在0-26 °C下醇析4-24h后，进行4000r-10000r/min的离心操作10-30min，弃上清液并鼓风干燥挥发 干乙醇，得到蜜蜂巢脾多糖，包括:往蜜蜂巢脾多糖提取液C中加入占其体积4倍的无水乙 醇，在4°C下醇析12h，进行8000r/min的离心操作20min，弃上清液并鼓风干燥挥发干乙醇， 得到蜜蜂巢脾多糖提取物。
[0024]另一方面，本发明实施例提供一种蜜蜂巢脾多糖提取物，包括:所述蜜蜂巢脾多糖 提取物根据前述任一所述制备方法获得，所述蜜蜂巢脾多糖提取物中包括多糖，且多糖的 含量大于50%。
[0025]可选地，所述蜜蜂巢脾多糖提取物中，总多糖含量为20-80%。
[0026] 本发明实施例提供的一种蜜蜂巢脾多糖提取物及其制备方法，能够从蜜蜂巢脾中 提取多糖提取物，能够增加蜜蜂巢脾的利用价值，且生产工艺简单，成本较低。
【附图说明】
[0027] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本 发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以 根据这些附图获得其它的附图。
[0028] 图1为本发明的实施例蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法的流程示意图；
[0029] 图2为酶解温度对提取蜜蜂巢脾多糖的影响曲线图；
[0030] 图3为酶解时间对提取蜜蜂巢脾多糖的影响曲线；
[0031]图4为酶添加量对提取蜜蜂巢脾多糖的影响曲线图。
【具体实施方式】
[0032] 下面结合附图对本发明实施例一种蜜蜂巢脾多糖提取物及其制备方法进行详细 描述。
[0033] 应当明确，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基 于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其 它实施例，都属于本发明保护的范围。
[0034] 图1为本发明的实施例蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法的流程示意图。参看图1， 本发明一种蜜蜂巢脾多糖提取物的制备方法实施方式，包括步骤：
[0035] 步骤1、将蜜蜂巢脾冷冻后，粉碎、过筛、使用乙醚回流除蜡，除蜡后鼓风烘干，挥发 乙醚，得到巢脾干燥粉末；
[0036]步骤2、在巢脾干燥粉末中加入巢脾干燥粉末质量10倍以上的蒸馏水后，加入木瓜 蛋白酶进行酶解得到酶解液;其中，木瓜蛋白酶添加量为每l〇〇g巢脾干燥粉末添加7.2-12 万U(unit，即〃单位〃），酶解温度为40-60°C，酶解时间0.5-1.5h;
[0037] 步骤3、将所述酶解液通过120目纱布过滤，取上清液；
[0038] 步骤4、在进行步骤3操作后所得的滤渣中，再加入10倍以上的蒸馏水后，加入7.2-12万U/100g巢脾干燥粉末的木瓜蛋白酶，重复上述酶解及过滤操作1-2次;将取得的上清液 合并，到蜜蜂巢脾多糖提取液A;
[0039] 步骤5、将所述蜜蜂巢脾多糖提取液A在80-100°C下进行浓缩l_3h，离心后弃去沉 淀得到蜜蜂巢脾多糖提取液B;
[0040] 步骤6、往蜜蜂巢脾多糖提取液B中加入占其体积1/4的由氯仿和正丁醇配制成的 混合液，充分抽提20min后，进行4000r-10000r/min的离心操作5-20min，取上清液;其中，在 制成的所述混合液中，氯仿和正丁醇的体积比为4:1;对获取的所述上清液再重复本步骤的 操作3次，获得去蛋白蜜蜂巢脾多糖提取液C;
[0041] 步骤