一种小麦赤霉病安全快速鉴定方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及粮食选种育种领域，特别是一种小麦赤霉病安全快速鉴定方法。
【背景技术】
[0002] 小麦赤霉病是主要由禾谷镰刀菌引起的世界性的疾病，它不仅能导致小麦减产绝 产，还会产生毒素，危及人和动物的健康。在我国，小麦赤霉病原本多发于江浙一带温暖湿 润的地区，但近些年由于全球气候变暖及秸杆还田等因素的影响，小麦赤霉病发病逐渐北 移，在2012年以来在黄淮麦区也有爆发。所以小麦赤霉病的防治与抗病品种的选育是一个 亟待解决的问题，然而在小麦抗病品种鉴定的实验方法上还存在着很大不足。
[0003] 首先，传统的田间鉴定方法直接将病菌带入自然环境中，易引发环境污染、病情爆 发;其次，在田间常用的接种方法包括喷雾法和单花滴注法，其中喷雾法已被证实其针对的 抗侵入性没有单花滴注法针对的抗扩展性稳定性高，所以，将病菌注入小麦内部是现阶段 要证实小麦抗赤霉病能力的必然操作，而这种要将孢子悬浮液注入小穗内的操作十分细 致，不仅要先剪去颖壳尖部，还易注射在小穗外，若要将悬浮液全部注射进去，常常需要调 整针头进入小穗不同的腔或缝隙内，所以在田间进行大量材料的接种有很大的困难;再次， 小麦接种赤霉病菌的最佳时期是抽穗扬花期，这个时期也正是易出现降雨的季节，在田间 进行试验不能保证环境湿度、温度和光照起码的恒定，使鉴定不够严谨;最后，在实验数据 记录上除了有田间观察不便的问题，传统的统计方法通常要观察直至材料完全发病为止， 在田间常常需要长达二至三周的时间，而且要每隔3-5天观察一次，不仅观察周期长，次数 也多。综上，传统的鉴定方法包括耗时长、操作繁琐、易污染、不严谨等众多问题，尤其是在 鉴定材料量非常庞大的时候更突显了这些缺点，所以实验工具与方法都需要优化和改进。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种小麦赤霉病安全快速鉴定方法，以满足小麦幼苗抗病 害能力的快速鉴定。
[0005] 为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明公开了一种小麦赤霉病安全快 速鉴定方法，鉴定方法的具体步骤如下：
[0006] 禾谷镰刀菌培养:在25 % PDA培养基环境下培养禾谷镰刀菌7天，切3毫米见方的带 有菌丝的PDA块7-10块，放入150mL 2 %的绿豆汤培养基，置于摇床以150rpm的速度培养7 天，使其产孢，制作孢子悬浮液，过滤得到孢子，加入无菌水使其浓度达到5xl05个/mL，放4 °C冰箱保存；
[0007] 麦穗离体培养:剪小麦麦穗放入培养盒内（含穗长，长度为23_25cm)，培养盒内注 水，水深4-5cm;每5支麦穗放入一个培养盒内间隔网中；共需培养5天，可根据实际情况在第 三天的时候换水、剪去泡在水中的麦梗部；
[0008] 抗病实验:使用异形注射器，采用单花滴注法将10微升孢子悬浮液注射在麦穗中 部小穗，将接种的小麦放入培养盒中，恒温25°C，恒湿90%，24小时后将湿度调低至70%，连 续培养，记录第五天数据。
[0009] 其中，麦穗离体培养中麦穗培养盒为自制培养盒，麦穗培养盒具有多层结构，包括 了培养盒盒体、培养盒盒盖、培养室、可调节间隔网、恒温恒湿组件室、注射器室、温度-湿度 感应器、透气孔、控制中心，培养盒盒体与培养盒盒盖通过铰链连接，培养盒盒体中设置有 培养室、恒温恒湿组件室和注射器室，恒温恒湿组件室和注射器室位于培养室下方，温度-湿度感应器安装于培养室内，透气孔和控制中安装于培养盒盒盖内侧。
[0010] 其中，异形注射器注射针内直径为0.2mm，前口封闭，设置6-8个注射孔在注射针 壁，分布在针壁1.5cm范围内，注射孔直径为0.1mm。
[0011] 其中，鉴定方法还包括有鉴定标准，鉴定标准如下：
[0012] 0级:没有可见症状；
[0013] 1级：1个病小穗；
[0014] 2级:2个病小穗；
[0015] 3级:3个病小穗；
[0016] 4级:大于3个病小穗小于1/4的穗面积；
[0017] 5级:病穗小于1/3的穗面积；
[0018] 6级:小于1/2的穗面积；
[0019] 7级:小于2/3的穗面积，梗部轻微变色；
[0020] 8级:小于3/4的穗面积，局部梗变色；
[0021 ] 9级:大于3/4的穗面积，扩展性梗变色，穗枯死；
[0022] 由所调查的病级计算各品种每次调查的病情指数，具体公式为：
[0023] 病情指数（％ ) = Σ ax/nT X 100，其中：a为发病级数;X为发病穗数;η为发病最高级 数(9) ;Τ为调查样本数。
[0024]本发明具有以下有益效果：
[0025] 1.本发明通过自制麦穗培养盒，通过离体培养观察，，杜绝了田间接种可能会对环 境造成的污染;改善了之前田间操作困难的缺点。
[0026] 2.优化了实验培养步骤及鉴定标准，仅需第五天的数据记录，相比以往田间接种 经常长达14-21天的记录周期缩短了鉴定周期，能够更早确定品种抗病能力。
【附图说明】
[0027]图1为本发明中麦穗培养盒结构示意图。
[0028] 1:培养盒盒体，2:培养盒盒盖，3:培养室，4:可调节间隔网，5:恒温恒湿组件室，6: 注射器室，7:温度-湿度感应器，8:透气孔，9:控制中心
【具体实施方式】
[0029]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对 本发明进行进一步详细说明。
[0030] 如图1所示，本发明公开了一种小麦赤霉病安全快速鉴定方法，鉴定方法的具体步 骤如下：
[0031] 禾谷镰刀菌培养:在25 % PDA培养基环境下培养禾谷镰刀菌7天，切3毫米见方的带 有菌丝的PDA块7-10块，放入150mL 2 %的绿豆汤培养基，置于摇床以150rpm的速度培养7 天，使其产孢，制作孢子悬浮液，过滤得到孢子，加入无菌水使其浓度达到5x105个/mL，放4 °C冰箱保存；
[0032] 麦穗离体培养:剪小麦麦穗放入培养盒内（含穗长，长度为23_25cm)，培养盒内注 水，水深4-5cm;每5支麦穗放入一个培养盒内间隔网中；共需培养5天，可根据实际情