一种液相串联质谱检测烟草中抑芽丹含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及烟草中农药残留检测领域，具体涉及一种液相串联质谱检测烟草中抑 芽丹含量的方法。
【背景技术】
[0002] 烟草中的农药残留量关乎卷烟产品的安全性和内在质量，在行业中已引起高度关 注。C0RESTA农用化学品咨询委员会(ACAC)2003年发布了农用化学品指导性残留限量的基 本原则与实施意见，对99种农药残留提出了指导性限量，2010年增加到了 200多种，并将继 续增加。我国目前主要参照ACAC限量作为烟草贸易评价依据。中国烟草总公司《烟草农药最 大残留限量》对烟草农药残留123种进行控制，并在此基础上提出我国烟草农药残留重点关 注的21种农药名单，其中，杀菌剂类9种、植物生长调节剂类3种、除草剂类2种、杀虫剂7种。
[0003] 我国烟草科技工作者对烟草中农药残留的多种分析方法作了大量改进研究，采用 现代的分析技术将检测方法逐步集中，在已颁布的农残检测方法标准系列中，由2007年的7 个调整2011年的5个。其中，马来酰肼(即为抑芽丹)的测定由紫外分光光度法，改为《烟草及 烟草制品马来酰肼农药残留的测定-高效液相色谱法》(YC/T405.5-2011)检测方法。然而该 方法对样品的前处理较为繁琐，如在试样的蒸馏提取过程中，需要保持回流冷凝管冷凝充 分，蒸馏瓶始终保持在约200°C状态下相对稳定，且要调整到在20min时间内收集到100mL蒸 馏液的蒸馏速率。该方法费时、费力，需要专人看管蒸馏过程，不利于批量试样的农药残留 检测，影响检测效率的提高，需要进一步的改进和完善。基于上述原因，研究一种更便捷、准 确的测定烟草中农药残留马来酰肼含量的方法是十分必要。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是为了解决现有技术中存在的技术问题，提供一种液相串联质谱检 测烟草中抑芽丹的方法，该方法检测限低，重复性好，适用于烟草中农药残留马来酰肼含量 的检测。
[0005] 为了解决以上技术问题，本发明的技术方案为：
[0006] 0.5-2%的甲酸甲醇溶液作为萃取液在液相串联质谱检测烟草制品中抑芽丹含量 中的应用。
[0007] -种液相串联质谱检测烟草制品中抑芽丹含量的方法，包括如下步骤：
[0008] 1)配制一系列不同浓度的马来酰胺标准溶液，利用液相色谱串联质谱方法进行检 测，建立标准曲线；
[0009] 2)将0.5-2%的甲酸甲醇溶液作为萃取液制备得到的烟草样品利用高效液相色谱 串联质谱的方法进行检测；
[0010] 3)根据标准曲线计算得到烟草样品中马来酰胺的含量。
[0011 ]优选的，步骤2)中，烟草样品的制备方法，包括如下步骤：
[0012]将所述萃取液倒入烟草试样中，并加入马来酰肼-D2内标液，震荡提取5-20min，超 声提取5-20min后，过滤得上清液即得烟草样品。
[0013]优选的，每克烟草试样用8-12mL萃取液萃取。
[0014]优选的，烟草样品中马来酰肼-D2内标液的浓度为lyg/mL;
[0015] 或，振荡提取的转速为250-300rpm。
[0016] 优选的，所述过滤使用的滤膜的孔径为0.22μπι。
[0017] 优选的，步骤1)中，建立标准曲线的溶液为7个不同浓度，马来酰肼的浓度分别为 0 · lyg/mL、0 · 2yg/mL、0 · 5yg/mL、1 · 0yg/mL、2 · 0yg/mL、5 · Oyg/mL和10 · Oyg/mL，马来酰餅-D2 内标浓度均为lyg/mL。
[0018] 优选的，液相色谱的操作条件为:采用HILIC极性柱，规格为150m X 3. Omm，膜厚为5 μπι;柱温度为室温，流速0.3mL/min;进样体积：5yL，流动相:A相为超纯水，B相为乙腈，0-3111；[11，流动相由厶相5%、8相95%变为厶相27%，8相73% ;3-10111；[11，流动相由厶相27%，8相 73%变为A相30%，B相70% ;10-13min流动相由A相30%，B相70%变为A相5%、B相95%。
[0019] 优选的，质谱的检测条件为:MH:母离子111.1，子离子42.1-82.1，去簇电压为-60V，碰撞能为-40-26V; MH-D2:母离子113.0，子离子42.1-84.1，去簇电压为-55V，碰撞能 为-40-25V。
[0020] 所述的检测烟草制品中抑芽丹含量的方法在检测烟草制品中抑芽丹含量中的应 用。
[0021] -种液相串联质谱检测烟草中抑芽丹含量的方法，具体包括如下步骤：
[0022] 1)萃取液的配制，萃取液为1 %的甲酸甲醇溶液，甲醇:HPLC级、甲酸:分析纯级；
[0023] 2)标准工作曲线的建立
[0024] ①分别配制浓度为400yg/mL的马来酰肼标准储备液，20yg/mL中间液I和2yg/mL中 间液II，溶剂为甲醇；
[0025] ②分别配制浓度为200yg/mL的氘代马来酰肼内标标准储备液和20yg/mL中间液， 溶剂为甲醇；
[0026] ③标准曲线溶液的配制如下表1所示，
[0027]表1标准曲线溶液的配制
[0028]
[0029] 分别制备7个不同浓度的马来酰肼标准工作溶液，每个浓度取1.5mL装入色谱瓶， 供液相色谱串联质谱仪检测；
[0030] ③将7个标准样品的马来酰肼响应值与马来酰肼的含量进行线性回归，得到标准 工作曲线，线性相关系数R2>〇. 999;
[0031] 3)待测样品的制备
[0032] 称取lg(精确至O.OOOlg)试样于50mL离心管中，加入10mL提取溶液1%甲酸甲醇， 震荡提取(275印111)1〇111；[11，超声10111；[11后于4000印1]1离心1〇111；[11，取上清液过0.22以1]1滤膜进行 上机测定；
[0033] 4)液相色谱串联质谱仪操作条件;采用HILIC极性柱，规格为150mX 3.0mm，膜厚为 5μπι;柱温度为室温，流速0.3mL/min;进样体积:5yL，流动相:A相为超纯水，B相为乙腈，设置 参数如表2所示;质谱参数如表3所示；
[0034]表2流动相参数设置 「00351
[0037]
[0038] 5)分析结果的计算及分析结果的校正
[0039] 读出待测样品马来酰肼的响应值，根据步骤2)所建立的马来酰肼标准曲线，计算 得到样品的马来酰肼含量。
[0040] 通过选择合适的萃取剂提高对目标化合物的提取率，选择合适的内标物质浓度 1.0yg/mL以提高检测目标化合物的准确度，本发明能实现农药残留马来酰肼含量的检测。
[0041] 本发明的有益技术效果为：
[0042] 该方法与现有方法相比，样品萃取时，不需要盐酸回流，操作简单，提取效率好，杂 质干扰小，可大批量操作，重现性好，非常适用于烟叶中马来酰肼残留量的检测。
[0043]本发明的标准工作曲线R2>0.999，方法定量限为2 . Omg/kg，方法的回收率（2.0， 10.0，80.0 mg/kg三个水平)为93.4-102.2 %，相对标准偏差(RSD% )为4%，具有较好的准确 度和精密度，适合大批量测定的特性，能很大限度提高烟草及其制品中马来酰肼残留量的 检测效率。
【附图说明】
[0044] 图1为峰面积比与马来酰肼含量的关系图；
[0045] 图2为本发明对烟草样品的检测谱图。
【具体实施方式】
[0046] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
[0047]甲醇:HPLC，甲酸:分析纯，乙腈:Mi 11 i-Q50超纯水仪，美