一种预混合饲料中维生素a的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及维生素 A测定技术领域，具体涉及一种复合预混合饲料中维生素 A的测 定方法。
【背景技术】
[0002] 关于饲料中维生素 A的测定，现在最常用的也是最为准确的是GB/T17817-2010公 开的皂化提取法，其具体包括皂化、提取、浓缩和测定四个步骤。虽然上述方法可以准确的 测出饲料中所含维生素 A的具体含量，但是上述方法包含上述四个步骤，且皂化和提取两个 步骤操作繁琐，不适用于饲养企业或者饲料生产企业检测室快速、及时检测;为了能够在饲 养企业或者饲料生产企业检测室快速、及时的检测出维生素 A，GB/T 17817-2010还公开了 一种比较简单的检测方法，其被称为直接提取法，具体包括标准溶液的制备、试样溶液的制 备以及使用高效液相色谱仪进行检测的步骤，其中，关于试样溶液的制备步骤具体如下:称 取试样lg，精确至〇. 〇〇〇lg，置于l〇〇mL的棕色容量瓶中，加入约80mL的甲醇，瓶塞不要拧紧， 于65°C超声波水浴中超声提取30min，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，充分摇匀即可。虽 然，上述试样溶液的制备步骤比较简单，非常适合饲养企业或者饲料生产企业快速及时检 测维生素 A的目的，但是，由于维生素 A是脂溶性的维生素，本身对热度非常敏感，尤其是超 声温度已经超过了 60°C，这样在超声提取的步骤中就会发生部分降解，使得最终检测的维 生素 A的含量发生偏移，使得人们对饲料中关于维生素 A的含量的判断不正确，并且，在维生 素 A含量少时的相对偏差较大，在20 %左右；同时，由于在超声提取过程的使用的有机溶剂 是甲醇，由于甲醇本身具有毒性且挥发性非常大，使得操作不方便且容易发生事故。
【发明内容】
[0003] 为此，本发明所要解决的技术问题在于现有技术中，由于在超声提取饲料中维生 素 A的过程温度偏高，导致最终检测饲料结果中维生素 A含量偏低的问题。
[0004] 为解决上述技术问题，本发明提供了一种复合预混合饲料中维生素 A的测定方法， 其包括：
[0005] (1)称取l-10g复合预混合饲料作为试样，精确至0.0001g;
[0006] (2)将上述试样置于棕色容量瓶中，加入约80mL维生素 A混合溶剂，瓶塞不要塞紧， 于10-35°C超声波水浴中超声提取10_20min，接着使用维生素 A混合溶剂稀释至刻度，充分 摇匀得到维生素 A溶解液；其中，所述维生素 A混合溶剂为包括体积比为（98-99):(0.8_ 1.5): (0.2-0.5)的甲醇、正己烷和BHT形成的混合溶剂；其中，BHT为抗氧化剂，其化学名称 为2,6_二叔丁基-4-甲基苯酚，它以对甲酚、异丁醇为原料，以浓硫酸作为催化剂，氧化铝为 脱水剂，反应生成2.6-二叔丁基对甲酚。
[0007] (3)使用高效液相色谱仪对上述维生素 A溶解液进行测定。
[0008] 其中，步骤(2)中超声波水浴的超声波频率为15-40KHZ。
[0009] 进一步，步骤(2)中超声波水浴的超声波频率设置为梯度设置，所述梯度设置为超 声波频率随着超声提取时间均匀增加。
[0010]在步骤(3)中，高效液相色谱仪的色谱条件如下：
[0011 ]色谱柱:(318型柱，长15〇111111，内径4.6111111，粒度5以111;
[0012] 流动相:混合比例为体积比80-98:2-20的甲醇与水的混合液，其中甲醇与水都需 要经过0.45μηι的过滤膜，按比例配好后超声波超声15min;
[0013]流速：1 .OmL/min;
[0014] 温度:室温；
[0015] 进样量：20μ1;
[0016] 检测波长：326nm。
[0017] 进一步，所述测定方法还包括标准溶液的制备，包括：
[0018] 称取维生素 A乙酸酯标准品（精确至O.OOOlg)于棕色容量瓶中，用所述维生素 A混 合溶剂溶解并稀释至刻度，混匀，4°C保存。
[0019] 优选地，在步骤(2)中，关于维生素 A混合溶剂的制备方法是通过将一定体积比的 甲醇、正己烷和BHT通过超声波超声混合均匀。
[0020] 本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：
[0021] (1)本发明的复合预混合饲料中维生素 A的测定方法，通过使用维生素 A混合溶剂 将试样中的维生素溶解，且在溶解过程中的超声波水浴的温度为10-35Γ，避免了现有技术 中单纯使用甲醇溶解维生素 A时因超声波水浴温度在65°C导致维生素 A降解而造成检测结 果偏低的的现象;其中，所述维生素 A混合溶剂为包括体积比为(98-99) :(0.8-1.5) :(0.2-0.5)的甲醇、正己烷和M1T形成的混合溶剂，因为维生素 A是脂溶性的维生素，故而正己烷也 是溶解维生素 A的良好溶剂，且在向甲醇中加入少量的正己烷，且在超声波的作用下，正己 烷完全溶于甲醇，使其成为溶解维生素 A的最佳溶剂，且在正己烷的存在下，甲醇的挥发度 会存在一定程度的降低，这避免了使用甲醇单独作为维生素 A溶剂时因挥发度过大造成操 作困难的事情;进一步，由于抗氧化剂BHT的加入，在使维生素 A避免在超声作用下氧化分解 的同时，其保证了正己烷不会被氧化，因此，抗氧化剂BHT的加入，使甲醇、正己烷和抗氧化 剂BHT形成了稳定的维生素 A溶解剂，且在低温度的超声波作用下，能够最大限度的溶解维 生素 A，使得最后的检测结果最为准确。
[0022] (2)本发明的复合预混合饲料中维生素 A的测定方法，通过超声波水浴的超声波频 率为15-40KHZ，使得溶解维生素 A的效果好，时间短。
[0023] (3)本发明的复合预混合饲料中维生素 A的测定方法，通过超声波水浴的超声波频 率设置为梯度设置，且所述梯度设置为超声波频率随着超声提取时间均匀增加。即通过在 固定时间段内使用超声波频率的超声波，且随着时间的增加，超声波频率亦在增加，也就是 在整个的溶解时间段内，使用不同超声波频率进行对卫生素 A进行溶解，进一步避免了维生 素 A在超声波溶解过程中的降解现象，保证了检测结果的准确性。
【具体实施方式】
[0024] 下面对本发明的内容进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的一 部分实施例，而不是全部的实施例。居于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做 出创造性劳动前提下所获得的其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0025] 实施例1
[0026] (1)称取1.1024g复合预混合饲料作为试样1;
[0027] (2)将上述试样1置于100mL棕色容量瓶中，加入约80mL维生素 A混合溶剂，瓶塞不 要塞紧，于l〇°C、40KHZ超声波水浴中超声提取20min，接着使用维生素 A混合溶剂稀释至刻 度，充分摇匀得到维生素溶解液A;其中，所述维生素 A混合溶剂为体积比为98:1.5:0.5的甲 醇、正己烷和BHT经超声混合均匀的混合溶剂。
[0028] 实施例2
[0029] (1)称取5 · 0023g复合预混合饲料作为试样2;
[0030] (2)将上述试样2置于100mL棕色容量瓶中，加入约80mL维生素 A混合溶剂，瓶塞不 要塞紧，于25°C、25KHZ超声波水浴中超声提取15min，接着使用维生素 A混合溶剂稀释至刻 度，充分摇匀得到维生素溶解液B;其中，所述维生素 A混合溶剂为体积比为98.5:1.0:0.5的 甲醇、正己烷和BHT经超声混合均匀的混合溶剂。
[0031] 实施例3
[0032] (1)称取9 · 9854g复合预混合饲料作为试样3;
[0033] (2)将上述试样3置于100mL棕色容量瓶中，加入约80mL维生素 A混合溶剂，瓶塞不 要塞紧，于35°C、15KHZ超声波水浴中超声提取10min，接着使用维生素 A混合溶剂稀释至刻 度，充分摇匀得到维生素溶解液C;其中，所述维生素 A混合溶剂为体积比为99:0.8:0.2的甲 醇、正己烷和BHT经超声混合均匀的混合溶剂。
[0034] 实施例4
[0035] (1)称取3.3296