一种葡萄酒中赭曲霉毒素a的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于食品检测工艺，涉及一种葡萄酒中赭曲霉毒素A的检测方法。
【背景技术】
[0002]葡萄酒是国际公认的健康饮品，是国民经济发展中增长较快、最具活力的产业之一。近几年来，国内葡萄酒市场消费年增长率持续保持较高水平，增长空间大。相比于进口葡萄酒，国产葡萄酒存在产品同质化、质量安全隐患大等缺陷，已严重影响到国内葡萄酒行业的健康发展。因此，提高葡萄酒生产水平、消除质量安全隐患是提高我国葡萄酒国际竞争力的主要策略，也是我国葡萄酒行业持续稳定发展的关键。
[0003]赭曲霉毒素主要是由曲霉属(Aspergillus sp.)和青霉属(Penicillium sp.)真菌产生的一类次级代谢产物，赭曲霉毒素A是其中最重要的一种。研究发现，赭曲霉毒素A具有肾毒性、肝毒性、基因毒性、致畸性、免疫毒性和胚胎毒性等特点，毒性仅次于黄曲霉毒素。赭曲霉毒素A在1993年已被国际癌症研究机构划为IIB类致癌物，大量研究证实赭曲霉毒素A广泛存在于谷物、水果、咖啡和葡萄酒中，赭曲霉毒素A产生菌的污染已成为威胁葡萄、葡萄干、葡萄汁和葡萄酒等食用安全的重要因子。作为一种健康饮品，葡萄酒受到广大消费者越来越多的青睐，而葡萄酒中赭曲霉毒素A的存在对消费者安全构成了重大威胁。为从根源上提升葡萄酒的质量安全，亟需建立一种葡萄酒中赭曲霉毒素A精确、高效和经济的检测方法，
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种葡萄酒中赭曲霉毒素A的检测方法，旨在为食品中赭曲霉毒素A的形成来源及迀移转化规律等研究奠定基础，同时为相关检测提供参考。
[0005]为解决上述问题，本发明提供了一种葡萄酒中赭曲霉毒素A的检测方法，包括下述步骤:
[0006]I)将葡萄酒样品添加到甲醇溶液中；
[0007]2)利用均质器，高速搅拌提取葡萄酒样品中的赭曲霉毒素A;
[0008]3)搅拌提取后，离心得到上清液；
[0009]4)取上清液经玻璃微纤维滤纸过滤后，上样免疫亲和柱，收集洗脱液后用甲醇洗脱免疫亲和柱，两次洗脱液合并旋转蒸发至干，以水复溶后过滤收集滤液。
[0010]5)采用液相色谱-四级杆静电场轨道阱质谱法对于滤液中的赭曲霉毒素A含量进行检测。
[0011]与现有技术相比，本发明的优点在于一种葡萄酒中赭曲霉毒素A的检测方法，通过将葡萄酒样品加入甲醇溶液，均质器高速搅拌提取，离心后得上清液，以免疫亲和柱结合玻璃微纤维滤纸处理后，采用液相色谱-四级杆静电场轨道阱质谱法检测滤液中的赭曲霉毒素A含量。本检测方法回收率高，检出限低且前处理成本低，可作为一种相对准确、高效和经济的葡萄酒中赭曲霉毒素A的检测方法进行推广。
【具体实施方式】
[0012]I)将葡萄酒样品添加到甲醇溶液中，葡萄酒样品占甲醇溶液的比例为1%，甲醇溶液中甲醇与水的体积分数为80: 20 ；
[0013]2)利用均质器，高速搅拌提取葡萄酒样品中的赭曲霉毒素A，均质器运转速度为8000r/min，搅拌提取时间为5min;
[OOM] 3)搅拌提取后进行离心，转速3000r/min离心5min得到上清液；
[0015]4)取ImL离心上清液，经玻璃微纤维滤纸过滤后以2mL/min的速度上样免疫亲和柱，收集洗脱液后，取5mL甲醇以2mL/min的速度洗脱免疫亲和柱，两次洗脱液合并旋转蒸发至干，加入ImL水复溶后，以0.45μπι微孔滤膜过滤，收集滤液；
[0016]5)采用液相色谱-四级杆静电场轨道阱质谱法对于滤液中的赭曲霉毒素A含量进行检测，离子源为电喷雾负离子模式，毛细管温度为320 °C，雾化温度为300 °C，鞘气为40八4，辅助气为1(^4，电压为3800V。
【主权项】
1.一种葡萄酒中赭曲霉毒素A的检测方法，包括如下步骤: 1)将葡萄酒样品添加到甲醇溶液中； 2)利用均质器，高速搅拌提取葡萄酒样品中的赭曲霉毒素A; 3)搅拌提取后，利用离心机离心得到上清液； 4)取上清液经玻璃微纤维滤纸过滤后，上样免疫亲和柱，收集洗脱液后用甲醇洗脱免疫亲和柱，两次洗脱液合并旋转蒸发至干，以水复溶后过滤收集滤液。 5)采用液相色谱-四级杆静电场轨道阱质谱法对于滤液中的赭曲霉毒素A含量进行检测。2.根据权利要求1所述的一种葡萄酒中赭曲霉毒素A的检测方法，其特征在于步骤I)中葡萄酒样品占甲醇溶液的比例为1-2%，甲醇溶液中甲醇与水的体积分数为80:20。3.根据权利要求1所述的一种葡萄酒中赭曲霉毒素A的检测方法，其特征在于步骤2)中均质器运转速度为8000-10000r/min，搅拌提取时间为3-5min。4.根据权利要求1所述的一种葡萄酒中赭曲霉毒素A的检测方法，其特征在于步骤3)中离心机离心时间为5_8min，转速3000-4000r/min。5.根据权利要求1所述的一种葡萄酒中赭曲霉毒素A的检测方法，其特征在于步骤4)中取ImL离心上清液，经玻璃微纤维滤纸过滤后以2-3mL/min的速度上样免疫亲和柱，收集洗脱液后取5mL甲醇以2-3mL/min的速度洗脱免疫亲和柱，两次洗脱液合并旋转蒸发至干，加入ImL水复溶后，以0.45μπι微孔滤膜过滤，收集滤液。6.根据权利要求1所述的一种葡萄酒中赭曲霉毒素A的检测方法，其特征在于步骤5)中，离子源为电喷雾负离子模式，毛细管温度为3200C，雾化温度为3000C，鞘气为40Arb，辅助气为1Arb，电压为3800V。
【专利摘要】本发明公开一种葡萄酒中赭曲霉毒素A的检测方法。其主要步骤包括取葡萄酒样品加入甲醇溶液，均质器高速搅拌提取，离心后得上清液，以免疫亲和柱结合玻璃微纤维滤纸处理后，采用液相色谱-四级杆静电场轨道阱质谱法进行检测。选择免疫亲和柱结合玻璃微纤维滤纸进行前处理，利用液相色谱-四级杆静电场轨道阱质谱法对葡萄酒中的赭曲霉毒素A含量进行检测，具有回收率高，检出限低且前处理成本低的优点。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105651915
【申请号】
【发明人】张鑫, 雷纪锋, 吴祖芳, 翁佩芳
【申请人】宁波大学
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2015年12月24日