受体激动剂的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域中利用六个转录标志物检测动物组织中此受体激动剂 的方法。
【背景技术】
[0002] β受体激动剂包括非选择性的β受体激动剂如异丙肾上腺素及选择性心脏βι受体 激动剂如多巴酚丁胺，选择性β2受体激动剂如沙丁胺醇、叔丁、喘宁等。β 2受体激动剂其通过 兴奋气道平滑肌和肥大细胞膜表面的β2受体，舒张气道平滑肌、减少肥大细胞和嗜碱性粒 细胞脱颗粒及其介质的释放、降低微血管的通透性、增加气道上皮纤毛的摆动等缓解哮喘 症状。(62受体激动剂包括：西马特罗，喷布特罗，妥布特罗，西布特罗，溴不特罗，马布特罗， 特布他林，氯丙那林，莱克多巴胺，克伦特罗，沙丁胺醇，班布特罗，利托君，克伦普罗，齐帕 特罗，马贲特罗等。
[0003] β2受体激动剂在动物体内的作用机理相同，为:扮受体激动剂作用于细胞膜上的β2 肾上腺素能受体(MR)受体，刺激受体与鸟苷酸结合蛋白偶联，激活G蛋白与腺苷酸环化酶 的偶联，腺苷酸环化酶将三磷酸腺苷转化为3,5_环磷酸腺苷(cAMP)，从而诱发体内的一系 列反应。
[0004] 现行我国标准及相关法律法规虽已明令禁止在动物饲料和饮水中添加 β2受体激 动剂，但仍屡禁不止，而目前主流的药物残留分析方法如仪器分析、免疫分析、传感器及芯 片分析等均是基于已知药物的检测，新药作为监测的漏洞，继续威胁着消费者的人身安全。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是如何检测待测动物组织和/或器官中此受体激动 剂。
[0006] 为解决上述技术问题，本发明首先提供了检测或辅助检测待测动物组织和/或器 官中β2受体激动剂的方法，所述方法为方法1、方法2、方法3或方法4。
[0007] 所述方法1包括：
[0008] 利用荧光定量PCR分别扩增所述待测的离体的动物组织和/或器官中的ADRB2基 因、ΑΤΡ2Α3基因、FABP5基因、F0X01基因、PDE4C基因、ΝΕΒ基因与内参基因，根据yl、y2、y3、 74、 75、76、公式1和公式2分别得出131和匕2;
[0009] 按照如下方法确定所述待测动物组织和/或器官中是否含有或候选含有扮受体激 动剂:如b 1 2 b2，所述待测动物组织含有或候选含有β2受体激动剂，如bl <b2，所述待测动 物组织不含或候选不含说受体激动剂；
[00?0]所述yl、所述y2、所述y3、所述y4、所述y5、所述y6分别为ADRB2基因、ATP2A3基因、 FABP5基因、F0X01基因、PDE4C基因、NEB基因的荧光定量PCR体系与内参基因的荧光定量PCR 体系的Ct值的差值；
[0011]公式 1:bl = 0 · 564 X yl+13 · 288 Xy2-4 · 462 X y3+3 · 554 X y4-10 · 740 Xy5+3 · 724 X y6-101.111；
[0012] 公式 2:b2=1.603Xyl+9.127Xy2-2.904Xy3+4.800Xy4-9.195Xy5+4.047X y6_86·019。
[0013] 所述方法2包括：
[0014]根据所述yl、所述y2、所述y3、所述y4、所述y5、所述y6和公式3得出所述待测动物 组织和/或器官中β2受体激动剂含量预测值pv2,根据公式4和所述预测值pv2得出所述待测 动物组织和/或器官中受体激动剂含量av2;
[0015] 公式3: pv2 = 1 · 284 X yl-6 · 926 X x2+9 · 304-17 · 360 X x3-18 · 642 X x4+4 · 348 X x5+ 209.326；
[0016] 公式4: av2 = 0 · 68747 X pv2+17 · 771。
[0017] 所述方法3包括：
[0018] 利用荧光定量PCR分别扩增所述待测的离体的动物组织和/或器官中的ADCY3基 因、ADRB2 基因、ATP1A3 基因、ATP2A3 基因、IL1B 基因 、MYLK 基因 、PAKACB 基因 、PTH 基因、TNF-a 基因、CREM基因、FABP5基因、F0X01基因、HSL基因、L0C102185492基因、MYH9基因、NEB基因、 PDE4C基因与内参基因，根据xl、x2、x3、x4、x5、x6、x7、x8、x9、xl0、xl 1、xl2、xl3、xl4、xl5、 xl6、xl7、公式5和公式6分别得出al和a2;
[0019] 按照如下方法确定所述待测动物组织和/或器官中是否含有或候选含有此受体激 动剂:如al 2 a2，所述待测动物组织含有或候选含有β2受体激动剂，如al <a2，所述待测动 物组织不含或候选不含β2受体激动剂；
[0020] 所述xl、所述χ2、所述χ3、所述χ4、所述χ5、所述χ6、所述χ7、所述χ8、所述χ9、所述 义1〇、所述111、所述112、所述113、所述114、所述115、所述116和所述117分别为400￥3基因、 ADRB2 基因、ΑΤΡ1Α3 基因、ΑΤΡ2Α3 基因、IL1B 基因 、MYLK 基因 、PAKACB 基因 、ΡΤΗ 基因、TNF-α 基 因、CREM基因、FABP5基因、F0X01基因、HSL基因、L0C102185492基因、MYH9基因、NEB基因、 PDE4C基因的荧光定量PCR体系与内参基因的荧光定量PCR体系的Ct值的差值；
[0021] 公式5: al = 14 · 924 X xl-6 · 362 X x2+5 · 226 X x3+7 · 777 X x4+2 · 034 X x5+14 · 974 X x6-7.971Xx7+10.516Xx8-4.019Xx9+18.687Xxl0-10.382Xxll+1.690Xxl2+3.882X xl3+5.632 X xl4-9.792 X xl5-18.867 X xl6-〇.499 X xl7-320.475 ；
[0022] 公式6: a2 = 16 · 229 X xl-3 · 494 X x2+6 · 767 X x3+3 · 229 X x4+2 · 444 X x5+13 · 809 X x6-9.465Xx7+12.347Xx8-5.194Xx9+19.640Xxl0-9.493Xxll+2.413Xxl2+3.471 X xl3+5.306Xxl4-10.147Xxl5-16.995Xxl6-0.182Xxl7-321.610〇
[0023] 所述方法4包括：
[0024] 根据所述x 1、所述x2、所述x3、所述x4、所述x5、所述x6、所述x7、所述x8、所述x9、所 述xlO、所述xll、所述xl2、所述xl3、所述xl4、所述xl5、所述xl6、所述xl7和公式7得出所述 待测动物组织和/或器官中β 2受体激动剂含量预测值pvl，根据公式8和所述预测值pvl得出 所述待测动物组织和/或器官中β2受体激动剂含量avl;
[0025] 公式7: pvl = -14 · 102 X xl+4 · 135 X x2+9 · 903 X x3+l · 398 X x4+2 · 477 X x5-8 · 862 Xx6+12.486Xx7+12.914Xx8-8.496Xx9-4.082Xxl0+6.775Xxll-12.455Xxl2-7.357 Xxl3-0.457Xxl4-23.512Xxl5-18.022Xxl6+14.833Xxl7+199.170；
[0026] 公式 8: avl =0 · 76374 X pvl+9 · 7186。
[0027]上述方法中，所述利用荧光定量PCR分别扩增所述待测动物组织和/或器官中的 ADRB2 基因、PRKACB 基因、ADCY3 基因、ATP1A3 基因、ATP2A3 基因、PTH 基因、MYLK 基因、TNF-α 基 因、IL1B基因、所述内参基因、PDE4C基因、HSL基因、FABP5基因、L0C102185492基因、MYH9基 因、NEB基因、CREM基因和F0X01基因的引物对分别为P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、 ?11、卩12、？13、？14、？15、？16、？17和？18;
[0028] 所述P1可为由序列1和序列2所示的单链DNA组成的引物对；
[0029 ] 所述P2可为由序列3和序列4所示的单链DNA组成的引物对；
[0030] 所述P3可为由序列5和序列6所示的单链DNA组成的引物对；
[0031] 所述P4可为由序列7和序列8所示的单链DNA组成的引物对；
[0032] 所述P5可为由序列9和序列10所示的单链DNA组成的引物对；
[0033] 所述P6可为由序列11和序列12所示的单链DNA组成的引物对；
[0034] 所述P7可为由序列13和序列14所示的单链DNA组成的引物对；
[0035] 所述P8可为由序列15和序列16所示的单链DNA组成的引物对；
[0036] 所述P9可为由序列17和序列18所示的单链DNA组成的引物对；
[0037] 所述P10可为由序列19和序列20所示的单链DNA组成的引物对；
[0038] 所述PI 1可为由序列21和序列22所示的单链DNA组成的引物对；
[0039] 所述P12可为由序列23和序列24所示的单链DNA组成的引物对；
[0040] 所述P13可为由序列25和序列26所示的单链DNA组成的引物对；
[00411 所述P14可为由序列27和序列28所示的单链DNA组成的引物对；
[0042] 所述P15可为由序列29和序列30所示的单链DNA组成的引物对；
[0043] 所述P16可为由序列31和序列32所示的单链DNA组成的引物对；
[0044] 所述P17可为由序列33和序列34所示的单链DNA组成的引物对；
[0045] 所述P18可为由序列35和序列36所示的单链DNA组成的引物对。
[0046] 为解决上述技术问题，本发明还提供了检测待测动物组织和/或器官中此受体激 动剂的成套试剂。
[0047] 本发明所提供的检测待测动物组织和/或器官中此受体激动剂的成套试剂，为下 述XI)或X2):
[0048] 乂1)所述?1、所述?5、所述?11、所述?13、所述?16和所述?18中的至少一种；
[0049] X2)由所述XI)与H1组成的成套试剂;所述H1为所述P2、所述P3、所述P4、所述P6、所 述P7、所述P8、所述P9、所述P12、所述P14、所述P15和所述P17中的至少一种。
[0050] 为解决上述技术问题，本发明还提供了下述任一应用：
[0051] I、M1和/或M2在作为检测或辅助检测动物组织和/或器官中此受体激动剂的标志 物中的应用；所述Ml为ADRB2基因、ATP2A3基因、FABP5基因、F0X01基因、PDE4C基因和NEB基 因中的至少一种;所述M2为PRKACB基因、ADCY3基因、ATP2A3基因、PTH基因、MYLK基因、TNF-a 基因、IL1B基因、HSL基因、L0C102185492基因、MYH9基因和CREM基因中的至少一种；