抗pd-l1抗体与mek抑制剂和/或braf抑制剂的组合的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及治疗哺乳动物癌症的方法和用于这类治疗的组合。特别地，所述方法 涉及新颖组合，所述组合包括MEK抑制剂，合适地是N-{3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯基氨 基)6,8_二甲基_2,4,7_三氧代_3,4,6,7_四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-卜基]苯基}乙酰胺 或其药学上可接受盐或溶剂化物，和/或B-Raf抑制剂，合适地是N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶 基)-2-(1，1-二甲基乙基)-1，3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2，6_二氟苯磺酰胺或其药学上可 接受盐，和抗PD-Ll抗体;含有该组合的药物组合物，和使用这类组合及组合物治疗病症如 癌症的方法，所述病症中抑制MEK和/或B-Raf和/或PD-Ll与结合其的分子如Η)-1相互作用 是有益的。
【背景技术】
[0002] 有效治疗包括癌症在内的过度增殖疾病一直是肿瘤学领域的目标。一般地，癌症 是由于控制细胞分裂、分化和凋亡细胞死亡的正常过程的失调导致，表征为恶性细胞增殖， 所述恶性细胞具有无限生长、局部扩增和全身转移的可能。正常过程失调包括信号转导通 路异常和对不同于正常细胞中所见的因子的反应。
[0003] 一个重要的较大酶家族是蛋白激酶家族。目前有约500种不同的已知蛋白激酶。通 过转移ATP-Mg 2+复合物的γ -磷酸到氨基酸侧链，蛋白激酶用于催化多种蛋白中所述氨基酸 侧链的磷酸化。这些酶通过蛋白中丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基中羟基的可逆磷酸化来控 制大部分的细胞内信号传递过程，从而控制细胞功能、生长、分化和破坏(凋亡）。研究显示 蛋白激酶是许多细胞功能的关键调节因子，包括信号转导、转录调节、细胞运动和细胞分 裂。数种癌基因还显示编码蛋白激酶，表明激酶在肿瘤发生中起作用。这些过程受到高度调 节，通常由复杂的交错通路调节，其中各激酶自身被一种或多种激酶调节。因此，异常或不 合适的蛋白激酶活性可促成与这种异常激酶活性相关的疾病状态上升，包括良性和恶性增 殖疾病以及免疫和神经系统不当激活导致的疾病。由于其生理相关性、多样性和普遍性，蛋 白激酶已成为生化和医学研究中一类最重要并被广泛研究的酶家族。
[0004] 酶的蛋白激酶家族根据其磷酸化的氨基酸残基通常分成2个主要亚家族:蛋白酪 氨酸激酶和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶。蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶(PSTK)包括环AMP-和环GMP-依赖性蛋白激酶、钙和磷脂依赖性蛋白激酶、钙-和钙调蛋白-依赖性蛋白激酶、酪蛋白激 酶、细胞分裂周期蛋白激酶等。这些激酶通常是胞质的或可能通过锚定蛋白与细胞颗粒部 分相关。异常的蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性参与或疑似参与一些病症，如类风湿性关节 炎、牛皮癣、败血性休克、骨质流失、许多癌症和其它增殖性疾病。因此，丝氨酸/苏氨酸激酶 及其作为一部分的信号转导通路是药物设计的重要靶标。酪氨酸激酶使酪氨酸残基磷酸 化。酪氨酸激酶在细胞调节中发挥同样重要的作用。这些激酶包括诸如生长因子和激素等 分子的数个受体，包括表皮生长因子受体、胰岛素受体、血小板衍生生长因子受体等。研究 表明许多酪氨酸激酶是跨膜蛋白，其受体结构域位于细胞外侧而其激酶结构域位于内侧。 为了鉴定酪氨酸激酶的调节剂，许多工作也在进行中。
[0005] 受体酪氨酸激酶(RTK)催化多种控制细胞生长、增殖和分化的蛋白中某些酪氨酰 氨基酸残基的磷酸化，这些蛋白包括其本身。
[0006] 数个RTK的下游有数个信号通路，其中有Ras-Raf-MEK-ERK激酶通路。据了解，目前 Ras GTP酶蛋白响应生长因子、激素、细胞因子等的激活会刺激Raf激酶的磷酸化和活化。随 后，这些激酶使胞内蛋白激酶MEKl和MEK2磷酸化并活化，这进而使其它蛋白激酶ERKl和2磷 酸化并活化。此信号通路也称为丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路或胞质级联，这一通路调 节细胞对生长信号的反应。其最终功能是将细胞膜上的受体活性与控制细胞增殖、分化和 存活的胞质或核祀标的修饰连接。
[0007] 此通路的组成型活化足以诱导细胞转化。异常受体酪氨酸激酶活化、Ras突变或 Raf突变导致的MAP激酶通路失调激活在人类癌症中常见，且代表决定异常生长控制的主要 因子。Ras突变在人恶性肿瘤中很常见，已在约30%癌症中得到鉴定。GTP酶蛋白Ras家族(将 鸟苷三磷酸转化成鸟苷二磷酸的蛋白）将信号从活化的生长因子受体传递到下游胞内伴 侣。由活性膜结合Ras募集的靶标中突出的是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的Raf家族。Raf家族 由三个充当Ras下游效应物的相关激酶(A-、B_和C-Raf)组成。Ras介导的Raf活化进而引发 MEKl和MEK2活化(MAP/ERK激酶1和2)，其继而在酪氨酸-185和苏氨酸-183上磷酸化ERKl和 ERK2(胞外信号调节的激酶1和2)。经活化的ERKl和ERK2易位并积聚于核内，其能在该处磷 酸化多种底物，包括控制细胞生长和存活的转录因子。鉴于Ras/Raf/MEK/ERK通路在人类癌 症发展中的重要性，信号级联的激酶组分渐成为癌症和其它增殖性疾病中调节疾病发展的 潜在重要靶标。
[0008] MEKl和MEK2是使多种MAP激酶的苏氨酸和酪氨酸残基磷酸化的双特异性激酶大家 族(MEK1-7)成员。MEKl和MEK2由不同基因编码，但其在C末端催化激酶结构域和大部分N末 端调节区内共有高同源性(80 % ) JEKl和MEK2的致瘤形式在人类癌症中尚未发现，但MEK的 组成型活化显示引起细胞转化。除了 Raf，MEK也能由其它癌基因激活。迄今唯一已知的MEKl 和MEK2底物是ERKl和ERK2。除了使酪氨酸和苏氨酸残基都能磷酸化的独特能力，所述与众 不同的底物特异性把MEKl和MEK2置于信号转导级联的关键点，该点使其能将许多胞外信号 纳入MPK通路。
[0009] 因此，已认识到MAPK激酶通路(如MEK)蛋白的抑制剂应同时具有抗增殖、促凋亡和 抗侵袭剂的价值，以用于防护和/或治疗增殖性或侵袭性疾病。
[0010]此外，还已知具有MEK抑制活性的化合物有效诱导ERK1/2活性抑制并阻遏细胞增 殖（The Journal of Biological Chemistry ,276卷，第4期2686-2692页，2001)，预期所述 化合物对由不需要的细胞增殖所导致疾病如肿瘤发生和/或癌产生效果。
[0011] 已鉴定多种Ras GTP酶和B-Raf激酶的突变，所述突变能引起MAPK通路的持续和组 成型活化，最终导致细胞分裂和存活增加。由此，这些突变与大范围的人类癌症的建立、发 展和进展密切相关。Raf激酶在信号转导中的生物学作用且特别是B-Raf的生物学作用，描 述于Davies，Η·等，Nature(2002)9:1-6;Garnett，M. J·和Marais，R. ,Cancer Cell(2004)6: 313-319;Zebisch，A.和Troppmair，J.,Cell.Mol.Life Sci·(2006)63:1314-1330; Midgley，R.S·和Kerr，D·J.，Crit·Rev·Onc/HematoI·(2002)44:109-120;Smith，R.A.等， Curr·Top.Med·Chem·(2006)6:1071-1089;和Downward，J·，Nat·Rev·Cancer(2003)3:11-22〇
[0012] 自然产生的激活MAH(通路信号传递的B-Raf激酶突变已在大部分人类黑素瘤 (Davies(2002)同上）和甲状腺癌（Cohen等J.Nat .Cancer Inst. (2003)95(8)625-627和 Kimura等Cancer Res.(2003)63(7) 1454-1457)中发现，以及以较低但仍显著的频率在以下 疾病中发现：
[0013] Barrett腺癌（Garnett等·，Cancer Cell(2004)6 313-319和Sommerer等Oncogene (2004)23(2)554-558)、胆管道癌（Zebisch等，Cell .Mol .Life Sci .(2006)63 1314-1330)、 乳腺癌（Davies(2002)同上）、宫颈癌（Moreno-Bueno等Cl in · Cancer Res · (2006) 12( 12) 3865-3866)、胆管癌(Tannapfel等Gut(2003)52(5)706-712)、中枢神经系统肿瘤，包括原发 性CNS肿瘤如成胶质细胞瘤、星形细胞瘤和室管膜瘤(Knobbe等Acta Neuropathol. (Berl.) (2004) 108(6)467-470，Davies(2002)同上，和Garnett等，Cancer Cell(2004)同上）以及继 发性CNS肿瘤（即起始于中枢神经系统外的肿瘤转移到于中枢神经系统）、包括大肠结肠癌 在内的结直肠癌（Yuen 等 Cancer Res. (2002 )62(22)6451-6455 ,Davies (2002)同上和 Zebisch 等，Cell .Mol. Life Sci .(2006)、胃癌（Lee 等 0ncogene(2003)22(44)6942-6945)、 包括头颈部鳞状细胞癌在内的头颈癌（Cohen等J.Nat.Cancer Inst. (2003)95(8)625-627 和Weber等Oncogene (2003 )22 (30 )4757-4759)、血液癌，包括白血病（Garnett等，Cancer CelI(2004)同上），尤其是急性成淋巴细胞性白血病(Garnett等,Cancer Cell (2004)同上 和Gustaf sson等Leukemia(2005) 19(2)310-312)、急性骨髓性白血病(AML) (Lee等Leukemia (2004) 18(1 )170-172 和 Christiansen 等 Leukemia(2005) 19(12)2232-2240)、骨髓增生异常 综合征（Christ iansen等Leukemia(2005)同上）和慢性髓细胞性白血病（Mizuchi等 Biochem.Biophys.Res. Commun · (2005)326(3)645-651);霍奇金淋巴瘤（Figl 等 Arch.Dermatol. (2007)143(4)495-499)、非霍奇金淋巴瘤（Lee等Br. J.Cancer(2003)89 (10) 1958-1960)、巨核细胞白血病(Eychene 等 0ncogene( 1995) 10(6) 1159-1165)和多发性 骨髓瘤（Ng等Br · J.Haematol · (2003) 123(4)637-645)、肝细胞癌（Garnett等，Cancer Cell (2004)、肺癌（Brose等Cancer Res. (2002)62(23)6997_7000，Cohen等J.Nat.Cancer Inst. (2003) 同上和Davies(2002)同上），包括小细胞肺癌（Pardo等EMBO J. (2006)25(13)3078-3088)和非小细胞肺癌（Davies(2002)同上）、卵巢癌（Russell和McCluggage J·Pathol · (2004) 203(2)617-619和Davies(2002)同上）、子宫内膜癌(Garnett等，Cancer Cell(2004) 同上和Moreno-Bueno等Cl in · Cancer Res · (2006)同上）、膜腺癌（I shimura等Cancer Lett · (2003) 199(2) 169-173)、垂体腺瘤（De Martino 等 J.Endocrinol .Invest .(2007)30( I )RC1-3)、前列腺癌（Cho等Int · J· Cancer(2006) 119(8) 1858-1862)、肾癌（Nagy等Int · J. Cancer (2003)106(6)980-981)、肉瘤（Davies(2002)同上）以及皮肤癌（Rodriguez-Viciana等 Science(2006)311 (5765) 1287-1290和Davies(2002)同上）x-Raf过表达与AML(Zebisch 等，Cancer Res. (2006)66(7)3401-3408和Zebisch(Cell.Mol.Life Sci. (2006))和红白血 病（Zebisch等，Cell .Mol ·Life Sci · (2006))相关。
[0014] 根据Raf家族激酶在这些癌症中发挥的作用以及一系列临床前和治疗剂的探索性 研究，包括对一种选择性靶向抑制B-Raf激酶活性的药剂的研究（King A. J .，等，（2006) Cancer Res. 66:11100-11105)，通常认为一种或多种Raf家族激酶的抑制剂会对治疗这类 癌症或其它Raf激酶相关病症有用。
[0015] B-Raf突变还参与其它病症，包括心面皮肤综合征(Rodriguez-Viciana等Science (2006)311(5765)1287-1290)和多囊性肾病(Nagao等Kidney Int. (2003)63(2)427-437)。
[0016] 除了防止肿瘤细胞自身增殖外，刺激患者本身的免疫应答来靶向肿瘤细胞是另一 个有吸引力的癌症治疗选择，且许多研究已证明使用肿瘤抗原的免疫疗法对诱导免疫应答 的有效性。然而，诱导免疫应答和有效消除癌在癌免疫治疗试验中通常不相关（Cormier 等·，Cancer J.Sci.Am.,3(1):37-44(1997);Nestle等，Nat.Med.,4(3):328-332(1998); Rosenberg ,Nature，411 (6835): 380-384(2001))。因此，尽管许多病例中有初次抗肿瘤免疫 应答，但功能性、效应抗肿瘤T细胞反应通常至多算是微弱。
[0017] 淋巴细胞的抗原特异性活化和增殖由来自共刺激分子的正和负信号调节。最广泛 鉴定的T细胞共刺激通路是B7-CD28，其中B7-1 (CD80)和B7-2 (CD86)各自可接触刺激性CD28 受体和抑制性CTLA-4(CD152)受体。与经T细胞受体的信号传递结合，CD28连接可增加 T细胞 的抗原特异性增殖，提高细胞因子生成，刺激分化和效应功能，并促进T细胞生存(Lenshow 等,Annu.Rev·Tmmunol ·，14:233-258(1996);Chambers和AlIison,Curr.Opin.Tmmunol.,9: 396-404( 1997);以及Rathmell和Thompson,Annu·Rev· Immunol ·，17:781-828( 1999))。相 反，经CTLA-4的信号传递被认为是递送抑制T细胞增殖、IL-2生成和细胞周期进展的负信号 (Krummel和Al Iison，J · Exp .Med ·，183: 2533-2540( 1996);以及Walunas等，J · Exp .Med ·， 183 : 2541-2550( 1996))。其它B7家族成员包括B7-H103D-Ll) (Dong等，Nature Med ·，5 : 1365-1369(1999);和Freeman等，J.Exp.Med·，192:1-9(2000))、B7-DC(PD-L2)(Tseng等， J.Exp.Med·，193:839-846(2001);和Latchman等，Nature Immunol·，2:261-268(2001))、 B7-H2(Wang等，Blood,96:2808-2813(2000)!Swallow等，Immunity ,11:423-432(1999);和 Yoshinaga等，Nature，402:827-832(1999))、B7_H3(Chapoval等，Nature Immunol.,2:269-274(2001))和B7-H4(Choi等，J.Immunol.,171:4650-4654(2003);Sica等，Immunity,18: 849-861(2003);Prasad等，Immunity,18:863-873(2003);和Zang等， Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,100:10388-10392(2003))〇
[0018] PD-I通过其配体连接的初步结果是抑制T细胞受体(TCR)下游的信号传递。因此， 经PD-I的信号转导通常向T细胞提供阻遏或抑制信号，导致T细胞增殖减少或T细胞活化中 的其它减少。认为ro-i信号传递需要结合ro-i配体，靠近由主要组织相容性复合体(MHC)呈 递的肽抗原，所述 MHC 与 TCR 结合(Freeman ,Proc .Natl .Acad .Sci.U.S. A, 105:10275-10276 (2008)) ID-Ll是引起T细胞中抑制性信号转导的主要ro-1配体。
[0019] T细胞还能被调节性T细胞（Treg)抑制（Schwartz ,R. ,Nature Immunology ,6:327-330(2005)) Jreg显示抑制肿瘤特异性T细胞免疫，且可能有助于人类肿瘤进展(Liyanage, U.K.等J Immunol ,169:2756-2761(2002))。在小鼠中，Treg细胞缺失可产生更有效的肿瘤 排斥（Viehl，C.T.等，Ann Surg Oncol, 13:1252-1258(2006))。
[0020] PD-L1(程序性细胞死亡配体-1;也称为B7同源物1(B7-H7))、或由CD274基因 (CD274)编码的分化群，其结合PD-L1(程序性细胞死亡蛋白1)并在包括免疫性和自身耐受 性的免疫系统功能调节中发挥作用。PD-Ll表达于T细胞，如调节性T细胞(Treg)、抗原呈递 细胞(APC例如树突细胞(DC)、巨噬细胞和B细胞），以及非造血细胞，包括胰岛细胞、血管内 皮细胞(胎盘睾丸、眼睛），以及肿瘤中。PD-Ll :PD-1通路参与自反应性T细胞弱化、诱导型T reg细胞发育、⑶-4+效应T细胞和⑶8+T细胞抑制。因此，通过PD-Ll: Η)-1通路干扰抑制信 号是增强抗肿瘤免疫的治疗选择。
[0021]尽管近期癌症治疗取得许多进展，但仍需要对患癌个体更有效和/或提高的治疗。 本文的实施方式满足该需要，所述实施方式涉及组合抑制肿瘤细胞增殖与提高抗肿瘤免疫 力的治疗方法。
【发明内容】
[0022] 本发明涉及B-Raf抑制剂和/或MEK抑制剂与抗H)-L 1抗体的组合，所述组合用于治 疗癌症。
[0023] 本发明涉及治疗剂的组合，该组合优于单独施用各试剂来治疗且优于MEK抑制剂 与B-RAF抑制剂的组合治疗。特别地，本文所述药物组合包括B-Raf抑制剂N- {3- [ 5-( 2-氨 基-4-嘧啶基)-2-(1，1-二甲基乙基)-1，3_噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2，6_二氟苯磺酰胺或其 药学上可接受盐，和/或MEK抑制剂N- {3- [ 3-环丙基-5- (2-氟-4-碘-苯基氨基)6，8-二甲基-2，4，7-三氧代-3，4，6，7-四氢-2H-吡啶并[4，3-d ]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺或其药学上可接 受盐或溶剂化物，和抗I3D-Ll抗体。
[0024] 太发明的MRK抑制剂由忒（T)的结构弄示，
[0025]
[0026] 或其药学上可接受盐或溶剂化物(本文统称为"化合物A"），
[0027]本发明的B-Raf抑制剂由式(I I)的结构表示：
[0028]
II
[0029]或其药学上可接受盐(本文统称为"化合物B"）。
[0030]抗ro-L 1抗体和其制备方法为本领域已知。
[0031] 所述抗ro-Ll抗体可以是多克隆或单克隆，和/或重组体，和/或人源化的。
[0032] 示例性ro-Ll抗体公开于：
[0033] 美国专利号 8,217,149; 12/633,339;
[0034] 美国专利号 8,383,796; 13/091,936;
[0035] 美国专利号 8,552,154; 13/120,406;
[0036] 美国专利公开号 20110280877; 13/068337;
[0037] 美国专利公开号 20130309250; 13/892671;
[0038] W02013019906；
[0039] W02013079174；
[0040] 美国申请号13/511，538(2012年8月7日提交），其是国际申请号？(^/1^10/58007 (2010年提交）的美国国家阶段；
[0041]和
[0042] 美国申请号13/478,511(2012年5月23日提交），其各自通过引用纳入本文。
[0043]在一个实施方式中，抗PD-Ll抗体是美国专利号8,217,149公开的抗体。在另一个 实施方式中，抗ro-Ll抗体包括美国专利号8，217，149所公开抗体的⑶R。
[0044] 在另一个实施方式中，抗ro-Ll抗体是美国申请号13/511,538公开的抗体。在另一 个实施方式中，抗ro-Ll抗体包括美国申请号13/511，538所公开抗体的CDR。
[0045] 在另一个实施方式中，抗H)-L1抗体是申请号13/478,511公开的抗体。在另一个实 施方式中，抗I3D-Ll抗体包括美国申请号13/478,511所公开抗体的⑶R。
[0046] 在一个实施方式中，抗ro-Ll抗体是BMS-936559(MDX-1105)。在另一实施方式中， 抗I 3D-Ll抗体是MPDL3280A(RG7446)。在另一个实施方式中，抗I3D-Ll抗体是MEDI4736。
[0047]在本发明的一方面，提供包括以下的组合：
[0048] (1)式（1)化合物：
[0049]
(I)
[0050] 或其药学上可接受盐或溶剂化物
[0051] (ii)式(II)化合物
[0052]
(II)
[0053]或其药学上可接受盐，
[0054]和（iii)抗 PD-Ll 抗体。
[0055]在本发明的另一方面，提供包括以下的组合：
[0056] N- {3-[ 3-环丙基-5-( 2-氟-4-碘-苯基氨基)6，8-二甲基-2，4，7-三氧代-3，4，6，7- 四氢-2H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基}乙酰胺二甲亚砜，N-{3-[5-(2-氨基-4-嘧啶基)_ 2-(I，1-二甲基乙基)-1，3-噻唑-4-基]-2-氟苯基}-2，6-二氟苯磺酰胺甲磺酸盐，和抗H)-Ll抗体。
[0057]在本发明的另一方面，提供包括以下的组合：
[0058] N- {3-[ 3-环丙基-5-( 2-氟-4-碘-苯基氨基)6，8-二甲基-2，4，7-三氧代-3，4，6，7- 四氢-2H-吡啶并[4，3-d ]嘧啶-1 -基]苯基}乙酰胺二甲亚砜和抗H)-L1抗体。
[0059] 在本发明的另一方面，提供包括以下的组合：
[0060] n-{3-[5-(2-氨基-