针对toso的抗体的制作方法
【专利说明】针对TOSO的抗体
[0001]相关申请的交叉引用
[000引本申请要求2013年7月3日提交的美国临时申请号61/842，766的权益，该美国临时 申请的内容出于所有目的W全文引用的方式明确并入本文中。
[0003] 发明背景
[0004] Toso或化im3(化S细胞调亡诱导分子3)是最初通过在作为化S诱导的调亡细胞死 亡的介体的T细胞白血病细胞系化rkat细胞中进行逆转录病毒过度表达筛选而被任选表征 的单跨膜细胞表面受体化it〇shi，Y.等人，Toso，a cell surface,specific regulator of hs-induced apoptosis in T cells. Immunity, 1998.8(4):第461-71 页）。后续研究已经 表明，Toso是难W捉摸的IgM受体。Toso的表达似乎还与慢性淋己细胞性白血病或化L的特 别侵袭性的形式相关。Toso活性的调节还可能影响免疫系统病症。
[000引需要能够调节Toso活性的分子。
[0006] 发明概述
[0007] 相应地，本发明提供了用于调节Toso活性W及治疗牵设Toso的疾病和病症的方法 和组合物。
[000引在一个方面，本发明提供了结合Toso或Toso配体的抗体。
[0009] 在另一个方面，本发明提供了一种抗体，其包含含有SEQ ID N0:l、3、5、7、9、ll、 13、 15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57 中的任一 个的重链可变区。
[0010] 在另一个实施方案中，本发明提供了一种抗体，其包含具有与SEQ ID NO: 1、3、5、 7、 9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57中 的任一个具有至少约95%序列同一性的序列的重链可变区，其中所述抗体结合Toso。
[0011] 在另一个方面，本发明提供了一种抗体，其包含含有SEQ ID N0:2、4、6、8、10、12、 14、 16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58 中的任一 个的轻链可变区。
[0012] 在另一个实施方案中，本发明提供了一种抗体，其包含具有与SEQ ID N0:2、4、6、 8、 10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、：M、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58 中的任一个具有至少约95%序列同一性的序列的轻链可变区，其中所述抗体结合Toso。
[0013] 在另一方面，本发明提供了一种抗体，其包含:第一重链CDR，其包含表1中所列出 的CDR1序列中的任一个;第二重链CDR，其包含表1中所列出的CDR2序列中的任一个;第Ξ重 链CDR，其包含表1中所列出的CDR3序列中的任一个;第一轻链CDR，其包含表帥所列出的 CDR1序列中的任一个;第二轻链CDR，其包含表2中所列出的CDR2序列中的任一个;和第Ξ轻 链CDR，其包含表2中所列出的CDR3序列中的任一个，其中所述抗体结合Toso。
[0014] 在另一个方面，本文中所描述的抗体涵盖人源化抗体。
[0015] 在另一个方面，本发明提供了一种核酸，其编码与上述抗体中的任一种一致的抗 体。
[0016] 在另一个方面，本发明提供了一种表达载体，其编码与上述抗体中的任一种一致 的抗体。
[0017] 在另一个方面，本发明提供了一种制造与上述抗体中的任一种一致的抗体的方 法，其中所述方法包括提供包含编码所述抗体的核酸的细胞的步骤，其中在适合于表达所 述抗体的条件下培养所述细胞。
[0018] 在另一个方面，本发明提供了用于治疗Toso相关疾病的方法，所述方法包括用与 上述抗体中的任一种一致的抗体来治疗有需要的受试者。
[0019] 附图简述
[0020] 图1提供了结合Toso的抗体的序列。星号表示终止密码子，其在一些实施方案中可 W通过本领域中已知的蛋白质工程改造方法来去除W允许表达全长序列。
[0021] 图2提供了不结合Toso的抗体的序列。星号表示终止密码子，其在一些实施方案中 可W通过本领域中已知的蛋白质工程改造方法来去除W允许表达全长序列。
[002引发明详述
[0023] 除非另外指出，否则本发明的实施可W采用在本领域技术人员能力范围内的有机 化学、聚合物技术、分子生物学(包括重组技术）、细胞生物学、生物化学和免疫学常规技术 和描述。所述常规技术包括聚合物阵列合成、杂交、连接、隧菌体展示和使用标记的杂交检 测。合适的技术的具体说明可W参考下文中的实施例。然而，当然也可W使用其他等同的常 规程序。所述常规技术和描述可见于标准实验室手册中，诸如Genome Analysis: A Laboratory Manual Series(第I-IV卷）；Using Antibodies：A Laboratory Manual; Cells:A Laboratory Manual;PCR Primer:A Laboratory Manual;和Molecular Cloning： A Laboratory Manual(都得自于Cold Spring Harbor Laboratory Press) ;Stryer，L. (1995)Biochemistry(第4版)Freeman，New York;Gait，"Oligonucleotide Synthesis：A Practical Approach" 1984，IRL Press，London;Ne1 son和Cox(2000)，Lehninger， Principles of BiochemistiT第3版，W.H.Freeman 化b.，New 化rk，N.Y.;和Be;rg等（2002) Biochemistry,第5版，W.H.Freeman化b.，New化rk，N.Y.，所有文献都出于所有目的W全 文引用的方式并入本文中。
[0024] 注意，除非上下文另外明确指示，否则如本文中和所附权利要求书中所使用，单数 形式"一个/一种"和"该"包括复数个指示物。因而，举例来说，提到"聚合酶"是指一种试剂 或运样的试剂的混合物，并且提到"该方法"包括提到本领域技术人员已知的等同步骤和方 法等等。
[0025] 除非另外定义，否则本文中所使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领 域的技术人员通常所理解的含义相同的含义。本文中所提到的所有出版物都出于描述和公 开出版物中所描述的并且可W与目前描述的发明联合使用的装置、组合物、制剂和方法的 目的W引用的方式并入本文中。
[0026] 在提供数值范围时，应理解，除非上下文另外清楚指出，否则介于该范围的上限与 下限之间、直至下限单位的十分之一的各居中值和该所述范围内的任何其他所述值或居中 值都涵盖在本发明内。根据所述范围中的任何明确排除的界限，运些较小范围的上限和下 限可W独立地包括在所述较小范围中，并且还涵盖在本发明内。在所述范围包括一个或两 个界限的情况下，排除那些所包括的界限中之任一个或两个的范围也包括在本发明中。
[0027] 在W下描述中，阐述了许多具体细节W便更透彻地理解本发明。然而，本发明所属 领域的技术人员应显而易见，可在不利于运些具体细节中的一个或多个的情况下实施本发 明。在其他情况下，没有描述本领域技术人员众所周知的特征和众所周知的程序W避免使 本发明不清楚。
[0028] 为了可W更全面地理解本申请，W下阐述了若干定义。所述定义意在涵盖语法等 同物。
[0029] 如本文中所使用，术语"包含"意在指所述组合物和方法包括所述要素，但不排除 其他。"基本上由……组成"当用于定义组合物和方法时应意指不包括对所述组合物或方法 具有任何必要意义的任何其他要素。"由……组成"应意指排除要求保护的组合物的超过痕 量要素的其他成分和实质性方法步骤。由运些过渡术语中的每一个定义的实施方案在本发 明的范围内。相应地，希望所述方法和组合物可W包括附加步骤和组分，（包含)或可选地包 括不具有重要意义的步骤和组合物(基本上由其组成）或可选地仅意指所述方法步骤或组 合物（由其组成）。
[0030] 所有数字标示，例如pH值、溫度、时间、浓度和分子量，包括范围，都是可改变(+ )或 (-)增量0.1的近似值。应理解，尽管未必总是明确阐述，但所有数字标示都前缀有术语 。纷'。术语"錄'还包括精确值"X" W及"X"的微小增量，诸如"X+0. Γ或"X-0. Γ。还应理解， 尽管未必总是明确陈述，但本文中所描述的试剂仅仅是示例性的并且所述试剂的等同物在 本领域中是已知的。
[0031] "组合物"可W包括包含试剂或化合物的任何物质，并且还意在涵盖试剂或化合物 与其他物质的任何组合，包括载体，例如惰性(例如可检测的试剂或标记)或活性化合物或 组合物，诸如佐剂、稀释剂、粘合剂、稳定剂、缓冲剂、盐、亲脂性溶剂、防腐剂、佐剂等等。载 体还包括药物赋形剂和添加剂，蛋白质、肤、氨基酸、脂质和碳水化合物(例如糖，包括单糖、 二糖、立糖、四糖和寡糖;衍生化糖，诸如糖醇、醒糖酸、醋化糖等等;和多糖或糖聚合物），其 可单独或组合存在，W重量或体积计单独或组合构成1%至99.99%。示例性蛋白质赋形剂 包括血清白蛋白，诸如人血清白蛋白化SA)、重组人白蛋白（rHA)、明胶、酪蛋白等等。也可W 在缓冲能力方面起作用的代表性氨基酸/抗体组分包括丙氨酸、甘氨酸、精氨酸、甜菜碱、组 氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、半脫氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、鄉氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨 酸、阿斯己甜等等。碳水化合物类赋形剂还意欲在本发明的范围内，其实例包括但不限于单 糖，诸如果糖、麦芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖等等;二糖，诸如乳糖、薦糖、海藻 糖、纤维二糖等等;多糖，诸如棉子糖、松立糖、麦芽糊精、葡聚糖、淀粉等等;和糖醇，诸如甘 露醇、木糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、木糖醇、山梨醇(葡糖醇)和肌醇。
[0032] 术语药学上可接受的载体(或介质）可W与术语生物学上相容的载体或介质互换 使用，是指不仅与治疗上施用的细胞和其他试剂相容而且在合理医学判断的范围内、适合 用于与人类和动物的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其他并发症且与合理的效 益/风险比相称的试剂、细胞、化合物、材料、组合物和/或剂型。适合用于本发明的药学上可 接受的载体包括液体、半固体(例如凝胶)和固体物质（例如如本领域中已知和本文中更详 细描述的细胞支架和基质、管板和其他运类材料）。运些半固体和固体材料可W经过设计W 便抵抗在体内降解(非生物可降解），或其可W经过设计W便在体内降解(生物可降解、生物 可侵蚀）。生物可降解材料还可W是生物可再吸收的或生物可吸收的，即，其可W溶解并且 被吸收到体液中（水溶性移植物是一个实例），或被降解并且最终通过转化成其他物质或通 过天然途径分解并消除而从体内消除。
[0033] 如本文中所使用，术语"患者"或"受试者"意指动物、哺乳动物或更进一步指人类 患者。仅出于说明的目的，哺乳动物包括但不限于人类、猿、鼠类、牛、马、猪或绵羊。
[0034] 如本文中所使用，术语"寡核巧酸"或"多核巧酸"是指包含脱氧核糖核巧酸、核糖 核巧酸或其任何组合的短聚合物。寡核巧酸一般是至少约10、15、20、25、30、40、50、60、70、 80、90、100或更多个核巧酸长。寡核巧酸可W用作引物或探针。
[0035] 术语"氨基酸"是指天然存在的和合成的氨基酸，W及W类似于天然存在的氨基酸 的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那 些氨基酸，W及稍后经修饰的那些氨基酸，例如径基脯氨酸、丫-簇基谷氨酸和0-憐酸丝氨 酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构的化合物，即，α碳与 氨、簇基、氨基和R基团结合，例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚讽、甲硫氨酸甲基梳。所 述类似物具有经修饰的R基团（例如正亮氨酸)或经修饰的肤主链，但保留与天然存在的氨 基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指具有与氨基酸的一般化学结构不同的结构但 W类似于天然存在的氨基酸的方式起作用的化学化合物。
[0036] 如本文中所使用的术语"分离"是指基本上不含其他物质的分子或者生物或细胞 物质，例如大于70 %或80 %或85 %或90 %或95 %或98 %。在一个方面，术语"分离"是指分别 与天然来源中所存在的且允许处理所述物质W实现W其原生或天然状态下存在时不可实 现的结果（例如重组复制或通过突变处理）的其他DNA或RNA或蛋白质或多肤或细胞或细胞 器或组织或器官分离的核酸(诸如DNA或RNA)，或蛋白质或多肤，或细胞或细胞器，或组织或 器官。术语"分离"还指基本上不含细胞物质、病毒物质或当通过重组DNA技术产生时的培养 基或当化学合成时的化学前驱物或其他化学物质的核酸或肤。此外，"分离的核酸"意指包 括天然情况下不作为片段存在且在天然状态下不会发现的核酸片段。术语"分离"在本文中 还用于指与其他细胞蛋白质分离的多肤且意在涵盖经过纯化的和重组的多肤，例如纯度大 于70 %或80%或85%或90%或95%、98%或99%。术语"分离"在本文中还用于指与其他细 胞或组织分离的细胞或组织且意在涵盖培养的和工程改造的细胞或组织。
[0037] "重组"核酸是指通过将正常情况下不一起存在的两个或更多个序列组合而产生 的人工核酸。在一个实施方案中，其是通过出于诸如抗生素抗性的特定目的而将相关DNA引 入现存生物体DNA，诸如细菌质粒中W编码或改变不同的性状而产生。"重组"多肤是来源于 重组核酸的多肤。
[0038] 如本文中所使用，术语"引物"是指足W指导基因转录的核酸序列。本发明中还包 括足W使启动子依赖性基因表达可控制、具有细胞类型特异性、组织特异性或可由外部信 号或试剂诱导的那些启动子元件。
[0039] 在一些实施方案中，启动子是可诱导启动子或离散启动子。可诱导启动子可W由 诸如溫度或光的化学或物理条件开启。化学启动子的实例包括但不限于醇调节的启动子、 四环素调节的启动子、类固醇调节的启动子、金属调节的启动子和发病机理相关启动子。离 散启动子的实例可见于例如Wolfe等，Molecular lindocr