低毒性的含有槐糖脂的组合物及其用图
【技术领域】
[0001 ]本发明设及低毒性的含有槐糖脂的组合物及其用途。
【背景技术】
[0002] 近年来，随着对清洁之关注的提高，表面活性剂常常被用于洗发和/或清洁皮肤。 另一方面，遭受因常常使用表面活性剂引起的手粗糖和皮炎的消费者数目也在提高。事实 上，厚生劳动省(厚生労働省）的患者数调查(根据疾病类别分类)示出，特应性皮炎患者的 数目从1987年的224，000提高至2009年的399，000，并且在2011年存在369，000名患者。运表 明日常遭受表面活性剂伤害(例如，皮肤干燥感、皮肤粗糖、皮肤开裂、湿疹、头发干燥感等） 的消费者数目可能潜在地很大。
[0003] 在运样的情况下，越来越多地使用氨基酸表面活性剂(例如N-酷基-k谷氨酸Ξ乙 醇胺）和聚甘油脂肪酸醋表面活性剂（例如聚月桂酸甘油醋）作为相对更安全的表面活性 剂。由于其引起较少的安全性问题，所W肥皂（脂肪酸盐）已被重新考虑。然而，已知碳链长 度为6至10个碳原子的中链脂肪酸(如肥皂)是高度刺激性的。在上述表面活性剂中，已知氨 基酸表面活性剂是刺激性相对较小的（低刺激）；然而，即便运些表面活性剂也不是完全满 意的。
[0004] 生物表面活性剂，是来自于活生物体的表面活性剂，具有高生物降解性和高安全 性，并因此预期作为新一代表面活性剂在工业上使用。其中，槐糖脂(其为糖脂表面活性剂 的一种)是由酵母发酵获得的发酵产物并且已知是高度安全的。例如，专利文献(P化)1公开 了槐糖脂具有低刺激度。然而，其中所公开的槐糖脂的低刺激度与氨基酸表面活性剂的刺 激度相当，并且期望进一步降低刺激(毒性降低）。此外，已知内醋型槐糖脂(槐糖脂的一种 形式)是相对有毒的(非专利文献(NPU1)。
[0005] 引用列表
[0006] 专利文献
[0007] 专利文献 1:肝2009-275145A [000引非专利文献
[0009] 非专利文献 1:化址 V，Doncel GF，SeyoumT，Eaton KM，Zalenskaya I，化gver R， Azim A,Gross R(2005),Sophorolipids ,Microbial Glycolipids with Anti-Human Immunodeficiency Virus and Sperm-Immobilizing Activities.Antimicrob.Agents Chemother.49(10),4093-4100
[0010] 非专利文献2:Karen M. J.Saerens，Lien Saey，Wim Soetae;rt(2011)，0ne-st邱 Production of Unacetylated Sophorolipids by an Acetyltransferase Negative Candida bombicola.Biotechnol.Bioeng.108(12).2923-2931
【发明内容】
[00川技术问题
[0012] 本发明的一个目的是提供低毒性的含有槐糖脂的组合物。本发明的另一个目的是 提供所述低毒性含有槐糖脂的组合物的用途。本文中使用的"低毒性的含有槐糖脂的组合 物"是指包含低毒性槐糖脂的低毒性组合物。
[0013] 问题的解决方案
[0014] 本发明人进行了广泛的研究来解决上述问题。结果，本发明人发现，在通过酵母发 酵生产的含有槐糖脂的组合物中包含的组分当中，不仅内醋型槐糖脂，而且脂肪酸、径基脂 肪酸、W及酸型槐糖脂所包含之乙酷基中的每一种，都对含有槐糖脂的组合物的细胞毒性 有相当大的影响。本发明人确定，除去运些物质可W提供毒性较小的含有槐糖脂的组合物， 特别是对眼睛和黏膜具有极低刺激性的含有槐糖脂的组合物。
[0015] 本发明是基于W上发现完成的，并且包括W下实施方案。下文中，"槐糖脂"可W缩 写为"SL"。具体地，本发明的"低毒性的含有槐糖脂的组合物"也可称为"低毒性的含有化的 组合物"。
[001 y (I)低毒性的含有化的组合物
[0017] (1-1)低毒性的含有化的组合物，至少含有来自于化生产酵母培养物的着色组分、 酸型化、脂肪酸和径基脂肪酸，基于组合物中酸型化、内醋型化、脂肪酸和径基脂肪酸的总 量作为100质量％，按干重计，W下组分为W下比例：
[001引 （1)酸型化:94质量％至99.99质量％，
[0019] (2)内醋型SL:0质量％至2质量％，
[0020] (3)脂肪酸和径基脂肪酸总计:0.01质量％至4质量％。
[0021] (1-2)根据（1-1)所述的低毒性的含有化的组合物，其中基于组合物中酸型化、内 醋型化、脂肪酸和径基脂肪酸的总量作为100质量％，内醋型化的比例W及脂肪酸和径基脂 肪酸的总比例满足W下（i)和(ii)中的至少一个：
[0022] (i)内醋型化:优选地大于0质量％但不大于2质量％，更优选地0.1质量％至2质 量％，甚至更优选地0.1质量％至1.5质量％，并且特别优选地0.8质量％至1.5质量％ ; W及
[0023] (ii)脂肪酸和径基脂肪酸(总计）：优选地0.01质量％至2.4质量％，更优选地0.01 质量％至1.2质量％，并且甚至更优选地0.01质量％至0.24质量％。
[0024] (1-3)根据（1-1)所述的低毒性的含有化的组合物，其中基于组合物中酸型化、内 醋型SL、脂肪酸和径基脂肪酸的总量作为100质量％，酸型化的比例、内醋型化的比例W及 脂肪酸和径基脂肪酸的总比例如下：
[0025] 酸型化:优选地96.1质量％或更大，更优选地97.9质量％或更大，并且甚至更优选 地99.31质量％或更大，
[0026] 内醋型化:优选地大于0质量％但不大于2质量％，更优选地0.1质量至2质量，甚至 更优选地0.1质量％至1.5质量％，并且特别优选地0.8质量％至1.5质量％，
[0027] 脂肪酸和径基脂肪酸（总计）：0.01质量％至2.4质量％，更优选地0.01质量％至 1.2质量％，并且甚至更优选地0.01质量％至0.24质量％。
[00%] (1-4)根据（1-1)至（1-3)中任一项所述的低毒性的含有化的组合物，其中基于所 述组合物中酸型化和内醋型化的总量作为100质量％，酸型化的比例为98质量％至100质 量％，优选地98.5质量％至100质量％，更优选地99质量％至100质量％，并且甚至更优选地 99.5质量％至100质量％，并且酸型化的比例为0质量％至2质量％，优选地0质量％至1.5质 量％，并且更优选ο质量％至1质量％
[0029] (1-5)根据（1-1)至（1-4)中任一项所述的低毒性的含有化的组合物，其中通过溶 解所述低毒性的含有槐糖脂的组合物使得溶液具有10质量％的乙醇可溶性成分而制备的 水溶液在440nm波长下的吸光度（色度：OD440)为0.001至1，优选地0.005至0.8，更优选地 0.01至0.6，特别优选地0.01至0.5，并且进一步特别优选地0.4或更小。
[0030] (1-6)根据（1-1)至（1-5)中任一项所述的低毒性的含有化的组合物，其中对应于 Ig其乙醇可溶性成分之量的所述组合物的醋值为0.01至2mg KOH/g，优选地0.01至1.5mg KOH/g，更优选地0.1至1.5mg KOH/g，并且特别优选地0.8至1.5mg KOH/g。
[0031] (1-7)根据（1-1)至（1-6)中任一项所述的低毒性的含有化的组合物，其中对应于 Ig其乙醇可溶性成分之量的所述组合物的径值为460至630mg KOH/g，优选地545至630mg KOH/g，更优选地560至630mg KOH/g，特别优选地575至630m巧OH/g，并且进一步特别优选地 575至585mg KOH/g。
[0032] (1-8)根据（1-1)至（1-7)中任一项所述的低毒性的含有化的组合物，其中所述组 合物的化La细胞致死浓度（1C日日)为2，00化pm或更高，并且优选地3，00化pm至60，OOOppm。
[0033] (1-9)根据（1-1)至（1-8)中任一项所述的低毒性的含有化的组合物，其中所述组 合物的HeLa细胞致死浓度（IC50)/临界胶束浓度(CMC)比例（ICso/CMC)为6.7至200，优选地 10至200,更优选地17至200,并且特别优选地33至200。
[0034] (1-10)根据（1-1)至（1-9)中任一项所述的低毒性的含有化的组合物，其中所述组 合物具有W下物理特性(a)至(C)中的至少一个：
[0035] (a)蒸发残余物:1%至100%;
[0036] (b)干燥失重:0%至99%;和
[0037] (C)乙醇可溶性成分：1%至100%。
[0038] (1-11)根据（1-1)至（1-10)中任一项所述的低毒性的含有化的组合物，其中所述 组合物的红外吸收光谱包括至少在约l〇24cm-i、约1706cm-i至1730cm-i、约2854cm-i、约 2924cm-i和约3000cm-i至3500cm-i波长下的红外吸收带。
[0039] (1-12)根据（1-1)至（1-11)中任一项所述的低毒性的含有化的组合物，其中所述 组合物为固体形式。
[0040] (1-13)根据(1-12)所述的低毒性的含有化的组合物，其中所述固体形式为粉末或 颗粒。
[004。(II)低毒性的含有SL的组合物的用途
[0042] (II-1)阴离子表面活性剂，其包含根据（1-1)至（1-13)中任一项所述的低毒性的 含有化的组合物作为活性组分。
[0043] (II-2)香料或化妆品（香粧品），食品或饮料（飲食品），药品，准药品（医薬部外 品），或者用于香料或化妆品、食品或饮料、药品或准药品的添加剂，包含根据（1-1)至（I- 13)中任一项所述的低毒性的含有化的组合物。
[0044] (II-3)根据（II-2)所述的香料或化妆品，食品或饮料，药品，准药品，或者用于香 料或化妆品、食品或饮料、药品或准药品的添加剂，其中所述香料或化妆品、食品或饮料、药 品、准药品或者添加剂施用于黏膜、创伤或炎症部位。
[0045] 此外，本发明包括用于生产低毒性的含有槐糖脂的组合物的方法W及用于降低含 有槐糖脂的组合物的毒性的方法。
[oow (III)用于生产低毒性的含有化的组合物的方法
[0047] (ΠΙ-1)用于生产根据（1-1)至（1-12)中任一项所述的低毒性的含有化的组合物 的方法，所述方法包括对通过培养化生产酵母获得的含化培养物或所述培养物的经处理产 物进行(1)除去脂肪酸和/或径基脂肪酸的步骤。
[004引（III-2)根据（III-1)所述的生产方法，其中对通过培养化生产微生物获得的含化 培养物或所述培养物的经处理产物进一步进行（2)除去与SL结合之乙酷基的步骤和（3)除 去内醋型化的步骤中的至少一个。
[0049] (ΠΙ-3)根据（III-1)或（III-2)所述的生产方法，其中（1)除去脂肪酸和/或径基 脂肪酸的步骤包括选自溶剂萃取、吸附和色谱中的至少一种处理。
[0050] (ΠΙ-4)根据(III-3)所述的生产方法，其中所述溶剂萃取是使用乙酸作为溶剂的 萃取方法;所述吸附是使用活性炭、硅胶、沸石、离子交换树脂或氧化侣作为吸附剂的方法； 所述色谱是使用0DS树脂作为固定相并使用乙醇水溶液作为流动相的反相柱色谱。
[0051 ] (II1-5)根据（III-1)至（III-4)中任一项所述的生产方法，其中（2)除去与化结合 之乙酷基的步骤包括选自水解和酶处理中的至少一种处理。
[0052] (ΠΙ-6)根据（III-5)所述的生产方法，其中所述酶处理使用乙酷醋酶。
[0053] (ΠΙ-7)根据（III-1)至（III-6)中任一项所述的生产方法，其中（3)除去内醋型化 的步骤是选自水解和色谱中的至少一种处理。
[0054] (ΠΙ-8)根据（III-7)所述的生产方法，其中所述色谱是使用0DS树脂作为固定相 并使用乙醇水溶液作为流动相的反相柱色谱。
[00巧](IV)用于降低含有SL的组合物的毒性的方法
[0056] (IV-1)用于降低含有化的组合物的毒性的方法，所述方法包括对通过培养化生产 酵母获得的含化培养物或其经处理产物进行（1)除去脂肪酸和/或径基脂肪酸的步骤，W生 产低毒性的含有化的组合物，其中基于组合物中酸型化、内醋型化、脂肪酸和径基脂肪酸的 总量作为100质量％，按干重计，W下组分为W下比例：
[0化7] (a)酸型化:94质量％至99.99质量％，
[0化引 （b)内醋型化:0质量％至2质量％，W及
[0059] (C)脂肪酸和径基脂肪酸总计:0.01质量％至4质量％。
[0060] (IV-2)根据(IV-1)所述的毒性降低方法，其中所述方法生产低毒性的含有化的组 合物，其中基于组合物中酸型化、内醋型化、脂肪酸和径基脂肪酸的总量作为100质量％，内 醋型化的比例W及脂肪酸和径基脂肪酸的总比例满足W下（i)和（ii)中的至少一个：
[0061] (i)内醋型化:优选地大于0质量％但不大于2质量％，更优选地0.1质量％至2质 量％，甚至更优选地0.1质量％至1.5质量％，并且特别优选地0.8质量％至1.5质量％ ; W及
[0062] (ii)脂肪酸和径基脂肪酸(总计）：优选地0.01质量％至2.4质量％，更优选地0.01 质量％至1.2质量％，并且甚至更优选地0.01质量％至0.24质量％。
[0063] (IV-3)根据(IV-1)所述的毒性降低方法，其中所述方法生产低毒性的含有化的组 合物，其中基于组合物中酸型化、内醋型化、脂肪酸和径基脂肪酸的总量作为100质量％，酸 型化的比例、内醋型化的比例W及脂肪酸和径基脂肪酸的（总）比例如下：
[0064] (a)酸型化:优选地96.1质量％或更大，更优选地97.9质量％或更大，并且甚至更 优选地99.31质量％或更大；
[0065] (b)内醋型化:优选地大于0质量％但不大于2质量％，更优选地0.1质量％至2质 量％，甚至更优选地0.1质量％至1.5质量％，并且特别优选地0.8质量％至1.5质量％ ; W及
[0066] (C)脂肪酸和径基脂肪酸（总计）：0.01质量％至2.4质量％，更优选地0.01质量％ 至1.2质量％，并且甚至更优选地0.01质量％至0.24质量％。
[0067] (IV-4)根据(IV-1)至(IV-3)中任一项所述的毒性降低方法，所述方法生产低毒性 的含有化的组合物，其中基于所述组合物中酸型化和内醋型化的总量作为100质量％，酸型 化的比例为98质量％至100质量％，优选地98.5质量％至100质量％，更优选地99质量％至 100质量％，并且特别优选地99.5质量至100质量％，并且内醋型化的比例为0质量％至2质 量％，优选地0质量％至1.5质量％，更优选地0质量％至1质量％。
[006引（IV-5)根据(IV-1)至(IV-4)中任一项所述的毒性降低方法，其中所述方法生产低 毒性的含有化的组合物，其中对应于Ig其乙醇可溶性成分之量的所述组合物的醋值为0.01 至2mg KOH/g，优选地0.01至1.5mg KOH/g，更优选地0.1至1.5mg KOH/g，并且特别优选地 0.8至1.5mg KOH/g。
[0069] (IV-6)根据(IV-1)至(IV-5)中任一项所述的毒性降低方法，其中所述方法生产低 毒性的含有化的组合物，其中对应于Ig其乙醇可溶性成分之量的所述组合物的径值为460 至630mg KOH/g，优选地545至630mg KOH/g，更优选地560至630mg KOH/g，特别优选地575至 630mg KOH/g，并且更特别优选地575至585mg KOH/g。
[0070] (IV-7)根据(IV-1)至（IV-6)中任一项所述的毒性降低方法，其中对通过培养化生 产微生物获得的含化培养物或所述培养物的经处理产物进一步进行(2)除去与化结合之乙 酷基的步骤和(3)除去内醋型化的步骤中的至少一个。
[0071] (IV-8)根据（IV-1)至（IV-7)中任一项所述的毒性降低方法，其中（1)除去脂肪酸 和/或径基脂肪酸的步骤包括选自溶剂萃取、吸附和色谱中的至少一种处理。
[0072] (IV-9)根据(IV-8)所述的毒性降低方法，其中所述溶剂萃取是使用乙酸作为溶剂 的方法;所述吸附是使用活性炭、硅胶、沸石、离子交换树脂或氧化侣作为吸附剂的方法;并 且所述色谱是使用0DS树脂作为固定相并使用乙醇水溶液作为流动相的反相柱色谱。
[0073] (IV-10)根据(IV-7)至(IV-9)中任一项所述的毒性降低方法，其中（2)除去与化结 合之乙酷基的步骤包括选自水解和酶处理中的至少一种处理。
[0074] (IV-11)根据(IV-10)所述的毒性降低方法，其中所述酶处理使用乙酷醋酶。
[0075] (IV-12)根据（IV-7)至（IV-11)中任一项所述的毒性降低方法，其中（3)除去内醋 型化的步骤是选自水解和色谱中的至少一种处理。
[0076] (IV-13)根据（IV-12)所述的毒性降低方法，其中所述色谱是使用0DS树脂作为固 定相并使用乙醇水溶液作为流动相的反相柱色谱。
[0077] 本发明的有利效果
[0078] 根据本发明，可W提供具有低细胞毒性的含有化的组合物。本发明的低毒性的含 有化的组合物具有表面活性剂的作用，并且还具有极低的细胞毒性W及对眼睛和黏膜的低 刺激。因此，本发明的组合物优选地不仅可W添加到施用于皮肤、创伤或炎症部位的化妆 品、药品、准药品等中，而且可W添加到施用于眼黏膜的眼部护理产品（如滴眼剂、洗眼剂） W及隐形眼镜装着液、施用于口腔黏膜的口腔用药、施用于鼻黏膜的喷鼻剂等中。
【附图说明】
[0079] 图1示出了绘制细胞致死浓度（ICso)相对于CMC的图。细胞致死浓度（ICso)由细胞 毒性测试来计算，所述细胞毒性测试使用参考生产例2和实施例1