一种难辨梭状芽孢杆菌毒素快速检测试剂条的制作方法
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及一种体外诊断类医疗器械，尤其涉及一种难辨梭状芽孢杆菌毒素快速检测试剂条。
【背景技术】
[0002]难辨梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile，CD)是引起抗生素相关性腹泻和肠炎最主要的病原菌，被认为是医院内感染性腹泻最主要的原因。感染CD的临床表现可以从无症状携带，轻中度腹湾到致命性的伪膜性肠炎(pseudomenbranous colitis,PMC)，中毒性巨结肠及肠穿孔等。随着抗生素的滥用，化疗以及呼吸机等侵入性治疗的增多和推广，以及人口老年化，CDAD的发病率和死亡率呈逐年增加的趋势，尤其在过去十年，出现越来越多的CDAD病例，原来的低危人群也有发展为严重病例的风险，而高毒力菌株的出现和传播更使病情严重化，增加了患者的死亡率。难辨梭状芽孢杆菌相关性疾病(Clostridiumdifficile -associated disease, Q)AD)已逐渐成为一个严重的公众健康问题，其在年老体弱患者中的死亡率可高达25%。早期正确的诊断对病人的管理和感染的控制显得尤为重要。
[0003]根据2010年美国卫生保健流行病学协会(the Society for HealthcareEpidem1logy of America，SHEA)和美国感染病协会(the Infect1us Diseases Societyof America，IDSA)对成人⑶I临床实施指南推荐，两步法检测用于诊断⑶1:谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase，GDH)检测作为初筛试验，阳性样本进一步行细胞毒素分析(cell cytotoxicity assay，CCA)或毒素培养(toxigenic culture，TC)检测确诊。细胞培养细胞毒素分析(the cell-culture cytotoxicity assay，CCA)和毒素培养(toxigenicculture，TC)被认为是诊断⑶I感染的金标准。
[0004]CCA是将过滤除菌的粪便标本上清加入单层细胞培养上清中，共培养24-48小时后观察毒素，主要是TcdB引起的细胞病变。为观察CD毒素引起的特异细胞病变，试验需要同时平行做加入CD抗毒素的中和试验。
[0005]TC则需要先接种粪便标本在⑶选择性培养基上，然后用EIA或CCA检测⑶分泌的毒素。厌氧培养一般需要48小时左右。较之CCA，TC具有更高的灵敏性。但不管是CCA还是TC，都需要专门的试验设备和高水平技术人员，且试验耗时较长，不适合推广使用。
[0006]Real-time PCR检测CD的毒素基因是近年发展起来的一种新方法，Real-time PCR检测的特异性在90 — 95%，灵敏性在95 — 96% Aeal — time PCR的缺点在于由于其过于灵敏造成的假阳性，尤其是住院并由于其他原因造成腹泻的患者或CD的无症状携带者。另一个限制Real — time PCR广泛应用的因素在于其需要专门的仪器和专业的技术人员，而且单人份检测价格昂贵。
[0007]目前临床最常用的⑶I检测方法是酶联免疫分析(enzymeimmunoassay, EIA)检测CD毒素TcdA或TcdA和/或TcdB，这种方法可测试多人份样本，操作简单快速，技术要求高，但缺点是也需要与专门仪器设备配套，对试验人专业性具有一定要求，不利于大规模样本的快速筛查及现场检验操作。
【发明内容】
[0008]为了克服现有对于难辨梭状芽孢杆菌毒素检测方式中检测操作繁琐、对实验人员专业技术要求较高，试验时间久且需专业仪器配套的不足，本实用新型提供了一种新型难辨梭状芽孢杆菌毒素的快速检测试剂条，可实现简单、快速、准确的对难辨梭状芽孢杆菌毒素TcdA和TcdB毒素的联合检测。
[0009]为解决上述缺陷本实用新型提供的技术方案是:
[0010]一种难辨梭状芽孢杆菌毒素快速检测试剂条，包括塑料基板、吸收垫、硝酸纤维素膜、胶体金垫和样本垫各层状结构，所述吸收垫固定在塑料基板的上端部，硝酸纤维素膜固定在吸收垫的下部、塑料基板的中间部分，其特征在于:硝酸纤维素膜分为质控区和检测区，质控区设有质控C线，检测区设有检测Tl线、检测T2线两条线;硝酸纤维素膜包被有抗难辨梭状芽孢杆菌毒素抗体，质控C线包被羊抗鼠多抗，检测区检测Tl线2-1包被难辨梭状芽孢杆菌毒素Tcd A抗体，检测区检测T2线2-2包被难辨梭状芽孢杆菌毒素Tcd B抗体;所述样本垫包括M2a、M2b、M3三层结构；样本垫M2a固定在塑料基板的下端部、硝酸纤维素膜下部，与硝酸纤维素膜紧靠但不重叠;胶体金垫位于样本垫M2a外层中上部;样本垫M3位于胶体金垫外层中下部，其下端部长于胶体金垫;样本垫M2b位于样本垫M3外层;透明保护胶带位于样本垫M2b外层上端部，并黏附于硝酸纤维素膜的下端。
[0011]本实用新型提供的难辨梭状芽孢杆菌毒素快速检测试剂条样本垫为三层，提高了试剂条的灵敏度和层析速度，缩短反应时间。
[0012]进一步的，为了增强纤维素膜的性能，本实用新型提供的难辨梭状芽孢杆菌毒素快速检测试剂条，其特征在于:所述硝酸纤维素膜为高蛋白亲和性的高分子纤维素膜。
[0013]进一步的，样本垫M2b上端与样本垫M2a平齐，样本垫M2b下端长于样本垫M3、略短于样本垫M2a。
[0014]进一步的，为了增强胶体金垫的吸附能力，本实用新型提供的难辨梭状芽孢杆菌毒素快速检测试剂条，其特征在于:所述胶体金垫为无纺布，上面吸附有含胶体金颗粒一难辨梭状芽孢杆菌毒素Tcd A抗体和胶体金颗粒一难辨梭状芽孢杆菌毒素Tcd B抗体的复合物。
[0015]进一步的，为了增强样本垫的吸水能力，所述样本垫为无纺布或玻璃纤维。
[0016]进一步的，为了增强吸收垫的吸收剩余样本的能力，所述吸收垫为海绵材料。
[0017]进一步的，为了将本申请试剂条的各层状结构固定牢固，塑料基板、吸收垫、硝酸纤维素膜、胶体金垫和样本垫M2a、M2b、M3各层状结构之间通过双面胶带固定。
[0018]本申请难辨梭状芽孢杆菌毒素检测试剂条由以下结构部分组成:
[0019]硝酸纤维素膜:高蛋白亲和性的高分子纤维素膜，经预处理后包被抗特异性难辨梭状芽孢杆菌毒素抗体，制备为反应膜用来作为系统反应的载体和显示反应结果。
[0020]M2a, M2b，M3:样本垫，选用有较强吸水能力的无纺布、玻璃纤维，经特殊处理后，为反应系统提供适合的反应条件，并帮助吸取样本。
[0021 ]胶体金垫:吸附力较强的无纺布，为胶体金标记抗特异性难辨梭状芽孢杆菌毒素抗体的固相载体，上面吸附有含胶体金颗粒一难辨梭状芽孢杆菌毒素Tcd A抗体和胶体金颗粒一难辨梭状芽孢杆菌毒素Tcd B抗体的复合物。
[0022]吸收垫:吸收检测后的样本。
[0023]塑料基板:作为反应体系的支撑物。
[0024]双面胶带:用于固定各反应膜和吸水材料于塑料基板上。
[0025]箭头指示胶:固定和保护样本垫和胶体金垫。
[0026]本实用新型通过将抗特异性难辨梭状芽孢杆菌毒素抗体喷于胶体金垫6上，包被于硝酸纤维素膜8上，通过增加样本垫层数，由传统的I层加厚为样本垫M2a、M2b、M3 3层，提高了样本的爬行速度和反应时间。
[0027]本实用新型的有益效果是，可实现一次操作，完成难辨梭状芽孢杆菌毒素TcdA和TcdB毒素的同时