专利名称：肥化的线虫的贮存方法
技术领域：
及背景本发明涉及水产养殖业，特别是涉及一种用于喂养水生生物如鱼虾幼虫的肥化的线虫的“现货供应(off-the-shelf)”贮存方法。
成功培养具有商业潜力的海洋鱼类的一个主要的瓶颈是早期发育阶段或幼虫阶段的饲养。在此阶段，死亡率大约在60-100％，主要是因为营养不足或匮乏，例如，孵卵场依赖向幼虫提供活体食物或浮游动物如轮虫(褶皱臂尾轮虫Brachionus plicatilis)或其它的臂尾轮属(Brachionus sp)以及海洋虾类(Artemia sp.)。这些浮游动物并不是代表幼虫的天然食物而是相对来说易于大量繁殖并易于被幼虫接收。另一方面，培养这些浮游动物需要在基础设施(池、水泵、空气泵以及水处理设备)以及能源和人力上进行大量投资。并且，活体食物不能贮存或是缺乏特殊的长链多不饱和脂肪酸(PUFA)如二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)，而这些脂肪酸是幼虫快速生长所必需的食物，该速率可为每日25-50％的相对生长速度(RGR)(Koven，W.，Tandler，A.，Kissil，G.Wm.，Sklan，D.1992 Theimportance of n-3 highly unsaturated fatty acids for growth inlarval sparus aurata and their effect on survival，lipid composition andsize disruption.Aquaculture 104，91-104)。花生四烯酸(ArA)的情况也是如此，其最近被认为在提高逆境抗性上具有关键性的作用(Koven，W.，Barr，Y.，Lutzky，S.，Ben-A tia.I.，Weiss，R.，Harel，M.，Behres，P.，Tandler，A.，2001.The effect of archidonic acid(204n-6)on growth，survival and resistance to handling stress in giltheadseabream(Sparus aurata)larvea.Aquaculture 193，107-122)。因此，在将轮虫和Artemia提供给鱼幼虫之前，必须通过用商品DHA和EPA制剂喂养它们从而用这些PUFA使其肥化。
由于浮游动物具有不同的营养成分并且其数量容易突然下降，供应不一致的浮游动物经常会严重影响活体食物培养体系。例如，中断供应和/或将饲料质量不一致的食物喂养给幼虫均可能导致它们生长率的严重下降，会延长孵卵场所的停留时间或导致小的、体弱的幼虫转移到保育室，从而导致生长和存活率下降。另外，喂养不足能导致对逆境、对疾病的抵抗力下降。最近几年，主要由于过度开采，在全世界范围内Artemia包囊可利用度快速下降导致价格波动和包囊质量的降低，这都加重了提供浮游动物所存在的问题。
以线虫作为饲料的一个明显的优点在于线虫可以在肥化后以干燥的休眠状态保存。它们可以被压缩保存，在后来喂养幼虫的时候重新复活。这种“现货供应的便利”为幼虫提供了一个可靠的连续营养供给，同其它传统的活体食物种类相比投资更小。
海洋幼虫的必需脂肪酸如二十二碳六烯酸(226n-3)、二十碳五烯酸(205n-3)和花生四烯酸(204n-6)都可以通过不同的油乳液提供给线虫。先前的研究显示线虫可以方便的滤过油乳液微团。最近的研究表明，用脂质体喂养线虫是一种拓宽肥化线虫的饲料添加剂范围的前景广阔的方法。脂质体是小的脂囊泡(0.025-1μm)，其由一个双层磷脂膜包裹着的水体积所构成，极易将水溶性的维生素、矿物质、蛋白质和氨基酸整合进水体积内和/或将脂溶性营养成分如脂类、维生素及色素整合到脂质体的磷脂膜中(Koven，W.，Barr，Y.，Hadas，E.，Ben-Atia.I.，Chen，Y.，Weiss，R.，Tandler，A.，1999.The potentialof liposomes as a nutrient supplement in first-feeding marine fishlarvae.Aquaculture Nutrition 5，251-256)。
最近研究显示脂质体可用于以游离氨基酸甲硫氨酸肥化Artemia nauplii(Tonheim，S.K.，Koven，B，Ronnestad，I.2000.肥化ofArtemia with free methionine.Aquaculture 190，223-225)。这种浮游动物普遍缺乏的该氨基酸，其肥化有利于蛋白质的更有效合成。最近此方法已扩展到以甲硫氨酸以及其它的游离氨基酸以及游离的脂肪酸肥化线虫，游离的脂肪酸能够刺激幼虫体内的消化激素如胆囊收缩素(CCK)。CCK是一种释放胰酶以促进消化和同化营养成分的主要因子。另外，用含有免疫刺激剂、疫苗和其它药物成分的脂质体喂养线虫也可刺激幼虫对疾病和逆境的抗性，从而改善幼虫和幼鱼的质量。
Popiel等的美国专利No.5183950提供了一种方法用于商业贮存和运输entemogenous(寄生于昆虫的)线虫。它涉及以大量及少量干燥、包装、贮存和运输寄生昆虫的线虫的方法，同时能够保持这些线虫的生活力以及对昆虫的致病性。Popiel的方法并没有提及在贮存前肥化线虫。
Bedding的美国专利No.5042427描述了一种通过使用粘土干燥线虫来贮存和运输致肠病线虫的方法。这些线虫在水中分散后可重新复苏。Bedding的方法没有提及在贮存前肥化线虫。
Solomon等人(Solomon A.，Paperna I.，Glazer I.1999 Desiccationsurvival of the entomopathogenic nematode Steinernemafeltiaeinduction of anhydrobiosis Nematology 1(1)，61-68)，和Perry(Perry R.1999 deiccation survival of parasitic nematodes.Parasitology119，S19-S30)也教导干燥线虫。他们都没有提及在贮存前肥化线虫。
农业遗传有限公司(Agricultural Genetics Company LTD)的WWO专利No.95/18527教导不同添加剂如各种油类和色素肥化线虫来作为活体饲料，喂养幼虫。此方法阐明了用肥化的线虫来喂养幼虫的优势，但是，并没有提及长期贮存线虫的方法。
游离活体线虫秀丽线虫(Caenorhabditis elegans(C.elegans))已被用作遗传模式生物并成为进行深入的分子和遗传学分析的对象(Jorgensen EM.，and Mango SE.2002 The art and design of geneticscreensCaenorhabditis elegans.Nature Reviews Genetics3356-369；The C.elegans Sequencing Consortium.1998 Genomesequence of the nematode C.elegansa platform for investgatingbiology.Science 2822012-2018；Riddle D.L.，Blumenthal，T.，Meyer，BJ.，and Priess，JR.C.elegans II.Cold Spring Harbor LaboratoryPress，New York，1997.)。然而，他们没有提及为于水产养殖现货供应应用而肥化、保存或贮存秀丽线虫。
因此，广泛认为需要提供一种保存或贮存具有增加的喂养价值的线虫而又没有上述限制的方法，并且掌握这种方法将很有利。
发明概述根据本发明的一方面，提供了用于保存具有增加的喂养价值的线虫的方法。该方法包括用水产养殖饲料添加剂肥化线虫及干燥肥化的线虫的步骤。
根据本发明的另一方面，提供了一个改良的水产养殖方法。该方法包括用水产养殖饲料添加剂肥化线虫、干燥肥化的线虫、贮存干燥的肥化的线虫、重新水化和复苏干燥的肥化的线虫以及将重新水化的肥化的线虫喂养给水产养殖的生物的步骤。
根据本发明的另一方面，提供了一个改良的水产养殖方法。该方法包括干燥线虫、贮存干燥的线虫、重新水化和复苏干燥的线虫、用水产养殖饲料添加剂肥化线虫以及将重新水化的肥化的线虫喂养给水产养殖的生物的步骤。
根据本发明的另一方面，为水产养殖应用提供方法以维持具有增加的喂养价值的线虫。该方法包括用水产养殖饲料添加剂肥化线虫以及保存肥化的线虫的步骤。
根据本发明另一方面，提供了改良水产养殖方法。该方法包括用水产养殖饲料添加剂肥化线虫、保存肥化的线虫、贮存干燥的肥化的线虫、重新水化和复苏该干燥的肥化的线虫以及将重新水化的肥化的线虫喂养给水产养殖的生物的步骤。
根据本发明的另一方面，提供了一个改良的水产养殖方法。该方法包括保存干燥线虫、贮存该干燥的线虫、重新水化和复苏该干燥的线虫、用饲料添加剂肥化线虫以及将重新水化的肥化的线虫喂养给水产养殖的生物的步骤。
根据本发明下述的优选实施方案的进一步的特征，该方法还包括培养线虫的步骤。
根据所述优选实施方案中的更进一步的特征，该方法还包括贮存干燥的线虫的步骤。
根据所述优选实施方案中的更进一步的特征，该线虫是自由生活的线虫。
根据所述优选实施方案中的更进一步的特征，该自由生活的线虫属于Panagrellus种。
根据所述优选实施方案中的更进一步的特征，该自由生活的线虫属于秀丽线虫种。
根据所述优选实施方案中的更进一步的特征，肥化线虫的步骤包括提供至少一种肥化添加剂，该添加剂选自必需脂肪酸、疫苗、激素、免疫刺激剂、引诱剂、营养成分和色素。
根据所述优选实施方案中的更进一步的特征，干燥线虫的步骤是通过诱导静止的低湿休眠(Anhydrobiosis)和渗透休眠(osmobiosis)方式之一来进行的。
根据所述优选实施方案中的更进一步的特征，肥化线虫的步骤包括对线虫的遗传操作。
根据所述优选实施方案中的更进一步的特征，用含有肥化添加剂的脂质体喂养线虫进行肥化步骤。
根据所述优选实施方案中的更进一步的特征，线虫保存步骤包括干燥线虫。
根据所述优选实施方案中的更进一步的特征，线虫保存步骤包括降低线虫温度以显著降低线虫的新陈代谢。
现货供应的便利优势是a)贮存肥化的线虫的能力确保了对幼虫持续的食物供应。幼虫具有很高的日生长率(RGR为25-50％)，因此，设备故障、轮虫和藻类培养物急剧减少以及在劣质Artemia包囊中的低孵化率所引起的食物供应中断会导致非最佳的幼虫生长率和存活率。
b)因为在贮存前成批肥化的线虫营养含量是可测的，因此，在喂养幼虫前可确保一致的营养质量。
c)生产一种可贮存产品的能力意味着可以累积足够的储备品。同其它传统的食物供应方法相比，这该方法是有利的，否则在基础设施、劳力和能源方面投资将是必需的。
d)贮存肥化的线虫的能力是能与Artemia包囊相比的商业产品的基础。Artemia包囊受供给下降、质量多变、以及时常被杀虫剂感染，浮动的高昂价格所困扰，因此是一种非持续性资源。
e)新孵化的Artemia身体构成仅能反映其孵育窝内(broodstock)的生存环境的自然变化。包囊下卵，作为一种自然过程，使得孵化幼虫的质量以身体构成而言无法受控。另一方面，将针对供应相同大小的幼虫的线虫，可在包装之前肥化并进行长期贮存。
本发明通过提供了一种方法来保存和贮存具有增加的营养价值的线虫以备日后喂养水产养殖生物之需，成功地克服了目前已知技术的缺点。
附图简述本发明在此仅通过举例方式(参考附图)进行描述。参照具体图，应该强调，举例描述细节是为了说明本发明优选的实施方案，这种用以描述本发明原理和概念的方式被认为是最有用的和最易理解的。在这一点上，详细地描述本发明的结构细节仅仅满足对本发明基本理解的需要。
可令本领域的技术人员清楚了解本发明的几种形式如何在实践中被实施。
在附图中
图1是一个改良的水产养殖方法的流程图。
优选实施方案的描述本发明是水产养殖方法，该方法可被用于喂养幼虫。具体的说，本发明可被用于保存并贮存肥化的干燥线虫以使这些线虫可以被“现货供应”应用，可在需要时重新水化并复活。该方法省略了对水产养殖物饲料如Artemia，轮虫，桡足虫等的需要。
参考图片和附加描述，可以更好地理解本发明中水产养殖方法的原理和操作。
在详细解释本发明的至少一个实施方案之前，应当理解的是，本发明并不限于应用在下文描述的或者图片中说明的对其成分的具体构建和安排上。本发明能够以其它方案，或以不同的方式加以实施。而且，应该理解的是，这里使用的措辞和术语是为了详细阐述而不应被认为是限制。
在本专利说明书和附属的权利要求中，术语“线虫”指的是所有类型的线虫。尽管本发明的方法可以应用于所有线虫，但它们优选地应用于自由生活(即非寄生)的线虫，更优选的是应用于Panagrellus和秀丽线虫种。
在本专利说明书和附属的权利要求中，术语“干燥”指的是通过蒸发作用，渗透压或任何可达到该目的的方法从生物体除去水分的过程。
在本专利说明书和附属的权利要求中，术语“水产养殖”指的是对任何水生生物的饲养和繁殖。
在本专利说明书和附属的权利要求中，术语“肥化”指的是通过线虫的食物，生长介质提供物质给线虫，以在用线虫喂养目的生物之前提高线虫身体中重要物质的水平，该物质可能包括但并不限于必需脂肪酸、疫苗、激素、免疫刺激剂、引诱剂、营养成分和色素。
关于附图，图1是用来阐明方法10的流程图。该方法是保存具有增加的喂养价值的线虫的方法，它包括培养线虫的步骤12。线虫培养方法为线虫学领域的专业技术人员所熟知。可以将酵母和细菌作为释放食物的介质喂养给线虫。另外，线虫也可以利用发酵罐进行工业级生产。
根据本发明的方法10，仅在收获之前或之后，使用水产养殖的饲料添加剂14“肥化”线虫。用至少一种添加剂如必需脂肪酸、疫苗、激素、免疫刺激剂、引诱剂、营养成分和色素“肥化”线虫，将它们加到线虫的饲料中。一个已成功用于将添加剂喂给线虫的介质是将添加剂渗入到脂质体中，然后用该脂质体喂养线虫。海洋幼虫的必需脂肪酸如二十二碳六烯酸(226n-3)、二十碳五烯酸(205n-3)和花生四烯酸(204n-6)都可以通过不同的油乳液提供给线虫。另外，含有免疫刺激剂和疫苗脂质体也可用于喂养线虫，它能提高该线虫喂养的幼虫对疾病的抵抗力。除此之外，还可用含有特异游离氨基酸(FAA)和游离脂肪酸(FFA)的脂质体喂养线虫，它们能够刺激幼虫体内的消化激素如胆囊收缩素(CCK)。CCK是一种释放胰酶以促进消化和同化营养成分的主要因子。其它的FAA也可整合到脂质体中以提供更为平衡的氨基酸组成来刺激食欲或改善幼虫的蛋白质合成。
在另一个优选的实施方案中，利用水产养殖的饲料添加剂肥化线虫(14)通过不同的方法来完成。在这些优选的实施方案中，肥化通过线虫基因组的遗传操作得以实现。利用一种深入研究的线虫如秀丽线虫使得这样的方法容易进行。秀丽线虫的基因组已被完全测序(TheC.elegans Sequencing Consortium.1998 Genome sequence of thenematode C.elegansa platform for investgating biology.Science2822012-2018)。利用标准的分子生物学技术，可以调控秀丽线虫中的不同基因和基因序列以增加该种生物固有的多种营养化合物和成分的表达。另外，新的基因序列也可被引入线虫基因组中以丰富线虫的营养含量或产生其它生物药物类化合物，包括但不限于必需脂肪酸、疫苗、激素、生长因子、免疫刺激剂、引诱剂、营养成分和色素。
可以利用各种产生转基因线虫的技术来引入遗传材料，这些方法包括但并不限于定向突变和操作和动员已知的转座子元件(如Tc1)以及包括微注射在内的各种标准技术将基因引入秀丽线虫(Riddle D.L.，Blumenthal，T.，Meyer，BJ.，和Priess，JR.C.elegans II.Cold SpringHarbor Laboratory Press，New York，1997.)。
秀丽线虫的转基因株的产生通过将外源DNA转化进秀丽线虫内得以实现，即利用携带有该DNA序列的载体注射到成年雌雄同体的syncitial卵巢体内。被注射进的DNA形成了微注射DNA的多聚化的串联排列，或者是半稳定的染色体外排列，或者整合到宿主的染色体中以形成稳定的整合转基因株。通过携有注射的DNA合适的基因标记，我们可以鉴定携带有转基因的动物。有时染色体能够整合所引入的DNA，或者在对转基因株照射后，染色体外存在的排列也可被整合(见例如Riddle D.L.，Blumenthal，T.，Mever，BJ.，和Priess，JR.C.elegans II.Cold Spring Harbor Laboratory Press，New York，1997；Hashmi，S.，G.Hashmi& R.Gaugler.1995 Genetic transformation ofan entomopathogenic nematode by microingection.J.Invertebr.Pathol.66293-6；Methods in Cell Biology Vol 48Caenorabhditis elegans-Modern Biological analysis of an organism，Eds Epstein and Shakes，Academic Press，1995；Kwa MS.，Veenstra，JG.，Van Dijk，M.，和Roos，MH.1995 Beta-tubulin genes from theparasitic nematode Haemonchus contortus modulate drug resistancein Caenorabhditis elegans.J Mol Biol 246(4)500-10.；Fire，A.1986.Integrative transformation of Caenorabhditis elegans.EMBO J52673-2680.)。
在用肥化添加剂喂养线虫之后，肥化的线虫可以立即用于喂养正在繁殖的幼虫，或者被干燥16以备日后“现货供应上文讨论几种现有的干燥方法，并且这些方法为线虫学领域的专业技术人员所熟知。一种优选的干燥方法是通过诱导静止的低湿休眠或渗透休眠实现的，最佳的线虫的低湿休眠/渗透休眠或脱水作用是静止的低湿休眠。休眠是一种对不可预计的不理想的环境条件自发的可逆反应，并且当恢复到适宜的条件后，其可从休眠状态中苏醒过来。然后贮存干燥和肥化的线虫18并以脱水状态保存以备日后使用。
本发明另一个优选的实施方案中，保存肥化的线虫使用的不是干燥而是其它技术。例如，在肥化之后，肥化的线虫可通过降低其温度以停止或显著减少其新陈代谢而被保存以备日后“现货供应”。在使用前，可通过提高温度到正常值以恢复和复苏保存的线虫。
图1进一步描述了改良的水产养殖方法10，该方法包括培养线虫的步骤12，线虫培养技术为线虫学领域的专业技术人员所熟知。可以将酵母和细菌作为释放食物的介质喂养给线虫。另外，线虫也可以利用发酵罐进行工业级生产。
根据本发明的方法10，经过一段时间后，在收获之前或之后，使用水产养殖饲料添加剂14肥化线虫。使用一种介质将饲料添加剂加给线虫，该成功用于将添加剂喂给线虫的介质为含有饲料添加剂的脂质体。另外，其它介质也可用于此目的。
在用肥化性添加剂喂养线虫之后，肥化的线虫可以立即用于喂养正在繁殖的幼虫，或者被干燥16以备日后使用，上文中已经讨论几种现有的干燥方法，并且这些方法为线虫学领域的专业技术人员所熟知。然后贮存18干燥和肥化的线虫并以脱水状态保存以备日后现货供应。
在使用前，干燥和肥化的线虫被重新水化并复苏20。重新水化后的肥化的线虫喂给水产养殖的生物22。
本发明另一个实施方案中，干燥并贮存培养的线虫。在使用前，重新水化并复苏干燥的线虫，然后，以饲料添加剂将其肥化，最后，喂给水产养殖的生物。
在本发明另一个优选的实施方案中，在保存前，用水产养殖饲料添加剂肥化线虫通过对线虫基因组的遗传操作(上文中已描述)而完成。在另一个实施方案中，肥化的线虫的保存通过降低其温度，而非通过干燥，来停止或显著减少其新陈代谢而完成。在使用前，保存的线虫可通过提高其温度到正常值从而将其恢复和复苏，然后即可将其喂给水产养殖的生物。
通常，这里使用的术语和本发明采用的实验操作包括分子、生物化学、微生物学以及重组DNA技术。下述文献详细阐明了这些技术。“Molecular CloningA laboratory Manual”Sambrook et al.，(1989)；“Current Protocols in Molecular Biology”Volumes I-III Ausubel，R.M.，ed.(1994)；Ausubel et al.，“Current Protocols in MolecularBiology”，John Wiley and Sons，Baltimore，Maryland(1989)；Perbal，“A Practical Guide to Molecular Cloning”，John Wiley & Sons，NewYork(1988)；Watson et al.，“Recombinant DNA”，Scientific AmericanBooks，New York；Birren et al.(eds)“Genome AnalysisA LaboratoryManual Series”，Vols.1-4，Cold Spring Harbor Laboratory Press，NewYork(1998)；美国专利.Nos.4,666,828；4,683,202；4,801,531；5,192,659和5,272,057中记录的方法；“Cell BiologyA LaboratoryHandbook”，Volumes I-III Cellis，J.E.，ed.(1994)；“Culture of AnimalCells-A Manual of Basic Technique”by Freshney，Wiley-Liss，N.Y.(1994)，Third Edtion；“Oligonucleotide Synthesis”Gait，M.J.ed.(1984)；“Nucleic Acid Translation”Hames，B.D.，and S.J.，eds.I Hggins(1985)；“Transcription and Translation”Hames，B.D.，andHiggins S.J.eds.(1984)；“Animal Cell Culture”Freshney，R.I.，ed.(1986)；“Immobilized Cells and Enzymes”IRL Press，(1986)；“APractical Guide to Molecular Cloning”Perbal，B.，(1984)and“Methods in Enzymology”Vol.1-317，Academic Press，San Diego，CA(1990)；Marshak et al.，“Strategies for Protein Purification andCharacterization-A Laboratory Course Manual”CSHL Press(1996)；Riddle D.L.，Blumenthal，T.，Meye r，BJ.，and Priess，JR.C.elegansII.Cold Spring Harbor Laboratory Press，New York，1997；Hashmi，S.，G.Hashmi& R.Gaugler.1995 Genetic transformation of anentomopathogenic nematode by microinjection.J.Invertebr.Pathol.66293-6；Methods in Cell Biology Vol 48Caenorabhditis elegans-Modern Biological analysis of an organism，Eds Epstein and Shakes，Academic Press，1995；Kwa MS.，Veenstra，JG.，Van Dijk，M.，and Roos，MH.1995 Beta-tubulin genes from theparasitic nematode Haemonchus contortus modulate drug resistancein Caenorabhditis elegans.J Mol Biol 246(4)500-10.；Fire，A.1986.Integrative transformation of Caenorabnditis elegans.EMBO52673-2680；Jorgensen EM.，and Mango SE.2002 The art and designof genetic screensCaenorabhditis elegans.Nature Reviews Genetics3356-369；and The C.elegans Sequencing Consortium.1998 Genomesequence of the nematode C.elegansa platform for investgatingbiology.Science 2822012-2018；上述所有在此应用作为参考。其它主要参考文献已贯穿于整个文件中。相信这里所提及的操作为本领域的技术人员所熟知，但为方便读者也在此给出了。这里包括的所有信息都在此被引作参考文献。
尽管本发明及其具体的实施方案均在此被详细描述，但很明显，很多替换、修饰和变体为线虫学领域的技术人员所熟知。因此，值得强调的是，本发明包括所有这些符合附属权利要求宗旨和广阔范畴的替换、修饰和变体。
在本说明书中所提及的所有出版物、专利和专利申请均在此全部被引作说明的参考文献，如同每个独立的出版物、专利或专利申请都被明确并单独列出引作参考文献。另外，不能将本专利对其任何参考文献的引用和鉴定解释为认同这些参考文献已构成本发明可以获得
权利要求
1.用于保存具有增加的喂养价值的线虫以用于水产养殖的方法，该方法包括步骤(a)以水产养殖饲料添加剂肥化线虫；及(b)干燥肥化的线虫。
2.权利要求1的方法，还包括步骤(c)培养线虫。
3.权利要求1的方法，还包括步骤(d)贮存干燥的肥化的线虫。
4.权利要求1的方法，其中的线虫为自由生活的线虫。
5.权利要求4的方法，其中所述的自由生活的线虫为Panagrellus种。
6.权利要求4的方法，其中所述的自由生活的线虫为秀丽线虫种。
7.权利要求1的方法，其中肥化线虫的步骤包括提供至少一种选自必需脂肪酸、疫苗、激素、免疫刺激剂、引诱剂、营养成分和色素的肥化添加剂。
8.权利要求1的方法，其中肥化线虫的步骤包括对线虫的遗传操作。
9.权利要求1的方法，其中干燥肥化的线虫的步骤是通过诱导选自静止的低湿休眠或渗透休眠中的一项来进行的。
10.权利要求1的方法，其中用含有肥化添加剂的脂质体喂养线虫来实现肥化步骤。
11.水产养殖的改良方法。该方法包括步骤(a)用水产养殖饲料添加剂肥化线虫；(b)干燥肥化的线虫；(c)贮存干燥的肥化的线虫；(d)重新水化和复苏该干燥的肥化的线虫；以及(e)将重新水化的肥化的线虫喂养给水产养殖的生物。
12.权利要求11的方法，其中该线虫为自由生活的线虫。
13.权利要求11的方法，其中所述的自由生活的线虫为Panagrellus种。
14.权利要求11的方法，其中所述的自由生活的线虫为秀丽线虫种。
15.权利要求11的方法，其中肥化线虫的步骤包括提供至少一种肥化添加剂，该添加剂选自必需脂肪酸、疫苗、激素、免疫刺激剂、引诱剂、营养成分和色素。
16.权利要求11的方法，其中干燥肥化的线虫的步骤是通过诱导选自静止的低湿休眠或渗透休眠中的一项来进行的。
17.权利要求11的方法，其中用含有肥化添加剂的脂质体喂养所述线虫来实现肥化步骤。
18.权利要求11的方法，其中肥化线虫的步骤包括对线虫的遗传操作。
19.水产养殖的改良方法。该方法包括步骤(a)干燥线虫；(b)贮存该干燥的线虫；(c)重新水化和复苏该干燥的线虫；(d)用饲料添加剂肥化线虫；以及(e)将重新水化的肥化的线虫喂养给水产养殖的生物。
20.权利要求19的方法，其中肥化线虫的步骤包括提供至少一种肥化添加剂，该添加剂选自必需脂肪酸、疫苗、激素、免疫刺激剂、引诱剂、营养成分和色素。
21.权利要求19的方法，其中干燥肥化的线虫的步骤是通过诱导选自静止的低湿休眠或渗透休眠中的一项来进行的。
22.权利要求19的方法，其中肥化线虫的步骤包括对线虫的遗传操作。
23.维持具有增加的喂养价值的线虫以用于水产养殖的方法，该方法包括步骤(a)用水产养殖饲料添加剂肥化线虫；以及(b)保存肥化的线虫；
24.权利要求23的方法，其中保存肥化的线虫的步骤包括干燥肥化的线虫。
25.权利要求23的方法，其中保存肥化的线虫的步骤包括通过降低肥化的线虫的温度来显著降低肥化的线虫的新陈代谢。
26.权利要求23的方法，还包括步骤(d)培养线虫。
27.权利要求23的方法，还包括步骤(d)贮存干燥的肥化的线虫。
28.权利要求23的方法，其中的线虫为自由生活的线虫。
29.权利要求28的方法，其中所述的自由生活的线虫为Panagrellus种。
30.权利要求28的方法，其中所述的自由生活的线虫为秀丽线虫种。
31.权利要求23的方法，其中肥化线虫的步骤包括提供至少一种肥化添加剂，该添加剂选自必需脂肪酸、疫苗、激素、免疫刺激剂、引诱剂、营养成分和色素。
32.权利要求23的方法，其中肥化线虫的步骤包括对线虫的遗传操作。
33.权利要求23的方法，其中干燥肥化的线虫的步骤是通过诱导选自静止的休眠脱水生活方式或渗透生活中的一项来进行的。
34.权利要求23的方法，其中用含有肥化添加剂的脂质体喂养线虫来实现肥化步骤。
35.水产养殖的改良方法，该方法包括步骤(a)用水产养殖饲料添加剂肥化线虫；(b)保存肥化的线虫；(c)贮存干燥的肥化的线虫；(d)重新水化和复苏该干燥的肥化的线虫；以及(e)将重新水化的肥化的线虫喂养给水产养殖的生物。
36.权利要求35的方法，其中保存肥化的线虫的步骤包括干燥肥化的线虫。
37.权利要求35的方法，其中保存肥化的线虫的步骤包括通过降低肥化的线虫的温度来显著降低肥化的线虫的新陈代谢。
38.权利要求35的方法，其中所述的线虫为自由生活的线虫。
39.权利要求35的方法， 其中所述的自由生活的线虫为Panagrellus种。
40.权利要求35的方法，其中所述的自由生活的线虫为秀丽线虫种。
41.权利要求35的方法，其中肥化线虫的步骤包括至少提供一种肥化添加剂，其选自必需脂肪酸、疫苗、激素、免疫刺激剂、引诱剂、营养成分和色素。
42.权利要求36的方法，其中干燥肥化的线虫的步骤是通过诱导选自静止的低湿休眠或渗透休眠中的一项来进行的
43.权利要求35的方法，其中用含有肥化添加剂的脂质体喂养所述线虫来实现肥化步骤。
44.权利要求35的方法，其中肥化线虫的步骤包括对线虫的遗传操作。
45.水产养殖的改良方法，该方法包括步骤(a)保存线虫；(b)贮存所述干燥的线虫；(c)重新水化和复苏所述干燥的线虫；(d)用饲料添加剂肥化线虫；以及(e)将重新水化的肥化的线虫喂养给水产养殖的生物。
46.权利要求45的方法，其中保存线虫的步骤包括干燥线虫。
47.权利要求45的方法，其中保存线虫的步骤包括通过降低线虫肥化的温度来显著降低线虫的新陈代谢。
48.权利要求45的方法，其中肥化线虫的步骤包括至少提供一种肥化添加剂，其选自必需脂肪酸、疫苗、激素、免疫刺激剂、引诱剂、营养成分和色素。
49.权利要求45的方法，其中干燥肥化的线虫的步骤是通过诱导选自静止的低湿休眠或渗透休眠中的一项来进行的
50.权利要求45的方法，其中肥化线虫的步骤包括对线虫的遗传操作。
全文摘要
保存并贮存具有增加的喂养价值的线虫的方法，以备在需要时喂养水产养殖生物。在该方法中，使用添加剂如必需脂肪酸、疫苗、激素、免疫刺激剂、引诱剂、营养剂以及色素将该线虫肥化。脂质体可作为一种给线虫喂食添加剂的介质。肥化的线虫然后通过诱导一个低湿休眠而被干燥并贮存以供需要时“现货供应”。当需要时，上述被干燥的肥化的线虫重新水化并用于喂养水产养殖生物。
文档编号A23K1/18GK1522108SQ02813141
公开日2004年8月18日 申请日期2002年6月4日 优先权日2001年6月29日
发明者S·泽马施, A·坦德勒, W·科文, S 泽马施, 吕 申请人:鱼生化技术有限公司, 以色列海洋和湖泊研究有限公司