专利名称：利用同种昆虫病毒的不同分离株组合控制斜纹夜蛾的方法
技术领域：
本发明是一种利用同种核型多角体病毒分离株协同增强作用防治害虫的控制技术，属于害虫生物防治技术领域。
背景技术：
昆虫病毒是抑制害虫种群的病原性天敌，具有对宿主昆虫致病性高，对人畜和天敌安全，不污染环境，尤其是它能在害虫种群中形成流行病而长期控制虫口以及不易产生抗药性等明显优势，决定了它具有强大的生命力。随着人们对农产品品质和环境要求的日益提高，病毒杀虫剂越来越受到重视。核型多角体病毒(NPV)是发现种类最多和应用最广的一类昆虫病毒。据统计，目前已经分离到的昆虫核型多角体病毒超过300种，其中10多种被引入大田防治试验，近10种被制成商品杀虫剂。
然而，如同其它的生物农药，病毒杀虫剂也存在杀虫速度慢、杀虫谱窄和杀虫效果低等缺点，这在很大程度上束缚了其发展应用。针对上述问题，多年来，科研工作者们一直在寻找各种途径来扩大天然昆虫病毒宿主域，提高其杀虫效果和速度。这些途径包括天然广谱病毒的筛选、不同病毒之间增强作用以及应用遗传工程来改良病毒杀虫剂等。其中病毒间增强作用因其效果显著而成为杆状病毒研究的一个热点。在1959年，Tanada首次报道GV(颗粒体病毒)和NPV同时感染美洲粘虫Pseudaletia unipuncta时PuGV对PuNPV的增强作用。PuGV的增强活性不只限于美洲粘虫，也能增强NPV对东方粘虫Pseudaletia separata和斜纹夜蛾Spodoptera litura的感染。此后，相继发现粉纹夜蛾Trichoplusia niGV(TnGV)、八字地老虎Xestia c-nigrum GV(XcGV)、棉铃虫Helicoverpaarmigera GV(HaGV)、草地粘虫Spodoptera frugiperda GV(SfGV)等多种GV中都存在加强NPV感染的现象。除GV外，在NPV、CPV和EPV中也都发现了能使NPV感染力得到增强的病毒种类。其中EPV包括东方粘虫Pseudaletia separataEPV(PsEPV)、铜绿丽金龟Anomala cuprea EPV(AcEPV)，CPV有松毛虫Dasychirapudibunda CPV(DpCPV)，NPV则包括黄地老虎Agrotis segetum NPV(AsNPV)和棉铃虫Helicoverpa armigera NPV(HaNPV)等。不同病毒之间的增强作用表现为提高杀虫速度、提高杀虫效果或扩大杀虫谱。虽然上述发现使病毒实用化的可能性提高，但由于两种病毒在实现协同增强作用时，不能同时在靶标害虫中增殖，因而生产增强型病毒杀虫剂时，需同时分别增殖两种病毒，然后再将其混合使用。这样就大大提高了生产成本，使增强型病毒杀虫剂难以推广应用。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用病毒组合控制害虫的方法。
本发明的技术方案是一种利用同种昆虫病毒的不同分离株组合联合控制斜纹夜蛾的方法，其特征在于利用感染斜纹夜蛾(Spodoptera litura)的核型多角体病毒不同分离株组合作为有效成分来控制斜纹夜蛾。
其中所述的斜纹夜蛾核型多角体病毒(SlNPV)不同分离株组合为SlNPV中国株与SlNPV日本株，SlNPV中国株与SlNPV埃及株或SlNPV日本株与SlNPV埃及株。
所述的斜纹夜蛾核型多角体病毒中国株与斜纹夜蛾核型多角体病毒日本株的配比为1-100∶1或1∶1-100。
所述的斜纹夜蛾核型多角体病毒中国株与斜纹夜蛾核型多角体病毒埃及株的配比为1-100∶1或1∶1-100。
所述的斜纹夜蛾核型多角体病毒日本株与斜纹夜蛾核型多角体病毒埃及株的配比为1-100∶1或1∶1-100。
本发明是利用感染同种昆虫的核型多角体病毒分离株之间的协同增强作用来实现病毒杀虫速度和杀虫效果的提高。感染同种昆虫的核型多角体病毒普遍存在不同分离株，已有许多关于不同分离株的侵染力差异方面的研究报道，如美洲棉铃虫NPV来源于美国、欧洲、亚洲、大洋洲、非洲等多个地区的14个分离株对美洲棉铃虫的侵染速度不同；舞毒蛾NPV来源于北美、欧洲、亚洲的分离株对舞毒蛾的毒力相差近3000倍；甜菜夜蛾NPV来源于西班牙、泰国和美国的分离株致病力仅有很小差异；甘蓝夜蛾NPV来源于新西兰和德国的分离株致病力无差异。而就不同分离株联合应用时是否具有协同增强作用国内外均未见报道。发明人首次发现感染斜纹夜蛾Spodoptera litura的NPV(SlNPV)中国株、日本株和埃及株三个不同原始分离株在两两联合应用时可增强病毒对靶标害虫的侵染力，不仅使病毒对斜纹夜蛾的杀虫效果明显提高，而且使杀虫速度显著加快，对2龄斜纹夜蛾幼虫杀虫效果和杀虫速度提高率分别为0-50％和9-45％。3个分离株在斜纹夜蛾中增殖1代后，增效作用更明显，在20-27℃的较低温下可使杀虫效果提高5-8倍。BglII、EcoR I和PstI 3种限制性内切酶的酶切图谱表明SlNPV 3个分离株的DNA存在明显差异，并且在两两混合繁殖后的限制性酶切图谱均发生了变化，表明2个分离株间发生了重组。由于病毒不同分离株的普遍存在，不仅使增强病毒资源易得，而且更为可贵的是不同分离株能在同一昆虫体内同时增殖，这就使增强病毒的生产无异于病毒单剂，一经发现具有增强作用的病毒分离株，即可马上投入生产和推广应用。
本发明与现有技术相比，其显著优点是简易、便捷、高效和安全等优点，生产上大量应用后，将产生显著的经济、社会和生态效益。
具体实施例方式
下面的实施例可以使本领域技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1发明人在本发明中所作的实施例SlNPV中国株、日本株和埃及株3个远源分离株在两两联合作用时提高了对斜纹夜蛾幼虫杀虫速度和杀虫效果。如表1所示，在29℃恒温下，三个分离株在两两混用时均不同程度地提高了对2龄斜纹夜蛾的杀虫速度，杀虫速度提高率最高可达44.8％；对杀虫效果也有一定的提高，最高提高率达50％。
表1 29℃恒温下SlNPV不同分离株对2龄斜纹夜蛾幼虫的提速增强作用处理 配比 LT50(天)杀虫速度 杀虫效果(％) 杀虫效果提高率(％) 提高率(％)中国株 5.1 91.3日本株 4.4 100.0埃及株 6.7 50.0中国株+日本株1∶1 4.09.1-21.6 100.0 0.0-9.5中国株+日本株1∶2 4.24.5-17.6 98.9 -1.1-8.3中国株+日本株1∶5 4.40.0-13.7 100.0 0.0-9.5中国株+日本株1∶10 4.32.3-15.7 100.0 0.0-9.5中国株+日本株1∶20 4.16.8-19.6 100.0 0.0-9.5中国株+日本株1∶50 4.6-4.5-9.8 96.7 -3.3-5.9中国株+日本株1∶100 4.6-4.5-9.8 100.0 0.0-9.5中国株+日本株2∶1 4.32.3-15.7 100.0 0.0-9.5中国株+日本株5∶1 4.8-9.1-5.9 100.0 0.0-9.5中国株+日本株10∶1 4.5-2.3-11.8 100.0 0.0-9.5中国株+日本株20∶1 4.40-13.7100.0 0.0-9.5
中国株+日本株50∶1 4.7-6.8-7.8 100.0 0.0-9.5中国株+日本株100∶1 4.9-11.4-3.9 97.5 -2.5-6.8中国株+埃及株1∶1 4.119.6-38.8 100.0 9.5-100.0中国株+埃及株1∶2 4.413.7-34.3 98.5 7.9-97.0中国株+埃及株1∶5 4.315.7-35.8 99.2 8.7-98.4中国株+埃及株1∶10 4.85.9-28.4 94.2 3.2-88.4中国株+埃及株1∶20 5.02.0-25.4 90.8 -0.5-81.6中国株+埃及株1∶50 4.77.8-29.9 100.0 9.5-100.0中国株+埃及株1∶100 5.5-7.8-17.9 92.5 1.3-85.0中国株+埃及株2∶1 4.69.8-31.3 100.0 9.5-100.0中国株+埃及株5∶1 4.511.8-32.8 100.0 9.5-100.0中国株+埃及株10∶1 4.511.8-32.8 100.0 9.5-100.0中国株+埃及株20∶1 4.85.9-28.4 97.8 7.1-95.6中国株+埃及株50∶1 5.02.0-25.4 89.4 -1.9-78.8中国株+埃及株100∶1 4.93.9-26.9 91.5 -0.2-83.0日本株+埃及株1∶1 3.715.9-44.8 100.0 0.0-50.0日本株+埃及株1∶2 3.911.4-41.8 100.0 0.0-50.0日本株+埃及株1∶5 4.021.6-40.3 98.5 -1.5-97日本株+埃及株1∶10 4.119.6-38.8 90.5 -9.5-81日本株+埃及株1∶20 4.413.7-34.3 92.7 -7.3-85.4日本株+埃及株1∶50 4.85.9-28.4 88.5 -11.5-77.0日本株+埃及株1∶100 5.02.0-25.4 85.8 -14.2-71.6日本株+埃及株2∶1 4.217.6-37.3 100.0 0.0-50.0日本株+埃及株5∶1 4.511.8-32.8 100.0 0.0-50.0日本株+埃及株10∶1 4.77.8-29.9 100.0 0.0-50.0日本株+埃及株20∶1 5.2-2.1-22.4 91.3 -8.7-82.6日本株+埃及株50∶1 4.93.9-26.9 100.0 0.0-50.0日本株+埃及株100∶1 5.10-23.9 95.0 -5.0-90.0从表2中可看出，在室内自然变温条件(20~27℃)下，SlNPV中国株和日本株及日本株和埃及株在联合应用时可提高对3龄斜纹夜蛾幼虫的杀虫效果，其中最大提高率可达120.3％。三个分离株分别及两两同时在斜纹夜蛾中增殖1代后，其增强作用更为显著，其中中国株和日本株在联合应用时，对3龄斜纹夜蛾的杀虫效果分别比单用中国株和日本株提高了486.2％和775.9％。
表2室内自然变(20~27℃)下SlNPV不同分离株对3龄斜纹夜蛾的增强作用处理 配比 原始病毒增殖1代病毒杀虫效果(％) 杀虫效果提高率(％) 杀虫效果(％) 杀虫效果提高率(％)中国株 18.2 13.0日本株 27.3 8.7埃及株 22.7 36.4中国株+日本株1∶131.6 15.8-73.676.2 486.2-775.9中国株+日本株1∶232.5 16.0-78.656.5 334.6-549.4中国株+日本株1∶530.5 11.7-67.647.4 264.6-444.8中国株+日本株1∶10 27.8 1.8-52.7 39.8 206.2-357.5中国株+日本株1∶20 30.0 9.9-39.3 42.6 227.7-389.7中国株+日本株1∶50 29.8 9.2-63.7 31.5 142.3-262.1中国株+日本株1∶100 27.5 0.7-51.1 32.8 152.3-277.0中国株+日本株2∶130.8 12.8-69.245.5 250.0-423.0中国株+日本株5∶131.2 14.3-71.440.6 212.3-366.7中国株+日本株10∶1 29.5 8.1-62.1 28.8 121.5-23.1.0中国株+日本株20∶1 27.8 1.8-52.7 30.5 134.6-250.6中国株+日本株50∶1 25.8 -5.5-41.827.5 111.5-216.1中国株+日本株100∶1 24.2 -6.1-39.624.9 100.4-198.5日本株+埃及株1∶150.0 83.2-120.3 61.9 70.0-611.5日本株+埃及株1∶248.5 77.7-113.7 54.5 49.7-526.4日本株+埃及株1∶542.8 56.8-88.550.8 39.6-483.9日本株+埃及株1∶10 47.4 73.6-108.8 48.6 33.5-458.6日本株+埃及株1∶20 39.2 43.6-72.745.5 25.0-423.0日本株+埃及株1∶50 38.8 42.1-70.948.0 24.2-451.7日本株+埃及株1∶100 40.2 47.3-77.137.5 3.0-331.0日本株+埃及株2∶151.5 88.6-126.9 50.8 39.6-483.9日本株+埃及株5∶142.8 56.8-88.542.6 17.0-389.7日本株+埃及株10∶1 37.2 36.3-63.935.8 -1.6-311.5日本株+埃及株20∶1 35.4 29.7-55.940.4 11.0-364.4日本株+埃及株50∶1 41.5 52.0-82.837.0 1.6-325.3日本株+埃及株100∶1 38.9 43.2-79.331.9 2.0-289.权利要求
1.一种利用同种昆虫病毒的不同分离株组合控制斜纹夜蛾的方法，其特征在于利用感染斜纹夜蛾的核型多角体病毒分离株组合作为有效成分来控制斜纹夜蛾。
2.根据权利要求1所述的利用同种昆虫病毒的不同分离株组合控制斜纹夜蛾的方法，其特征在于所述的组合为斜纹夜蛾核型多角体病毒中国株与斜纹夜蛾核型多角体病毒日本株，斜纹夜蛾核型多角体病毒中国株与斜纹夜蛾核型多角体病毒埃及株或斜纹夜蛾核型多角体病毒日本株与斜纹夜蛾核型多角体病毒埃及株。
3.根据权利要求2所述的利用同种昆虫病毒的不同分离株组合控制斜纹夜蛾的方法，其特征在于斜纹夜蛾核型多角体病毒中国株与斜纹夜蛾核型多角体病毒日本株的配比为1-100∶1或1∶1-100。
4.根据权利要求2所述的利用同种昆虫病毒的不同分离株组合控制斜纹夜蛾的方法，其特征在于斜纹夜蛾核型多角体病毒中国株与斜纹夜蛾核型多角体病毒埃及株的配比为1-100∶1或1∶1-100。
5.根据权利要求2所述的利用同种昆虫病毒的不同分离株组合控制斜纹夜蛾的方法，其特征在于斜纹夜蛾核型多角体病毒日本株与斜纹夜蛾核型多角体病毒埃及株的配比为1-100∶1或1∶1-100。
全文摘要
本发明公开了一种利用同种昆虫病毒的不同分离株组合联合控制斜纹夜蛾的方法。该方法利用同种核型多角体病毒分离株之间联合作用来提高对害虫的杀虫速度和杀虫效率。该方法可实现同种核型多角体病毒不同分离株在同一昆虫体内增殖，在使用时无需通过分别增殖不同病毒来达到提速增效目的，其生产同于传统的病毒杀虫单剂。该方法相对于利用传统病毒增强技术，具有高效、简易、便捷和安全等优点。生产上大量应用后，将产生显著的经济、社会和生态效益。
文档编号A01N63/00GK1644056SQ200410065958
公开日2005年7月27日 申请日期2004年12月28日 优先权日2004年12月28日
发明者方继朝, 郭慧芳, 王节萍, 刘宝生 申请人:江苏省农业科学院