专利名称：绿色食品蔬菜田中防治害虫的生物源杀虫复配剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种杀虫剂，具体涉及一种用于绿色食品蔬菜田中防治害虫的杀虫剂。
背景技术：
农业害虫每年给种植业都造成了巨大的损失。虽然化学防治取得显著成效，但同时也带来了环境污染、抗药性等一系列问题。从20世纪70年代开始，生物防治受到了各国政府的重视。1992年“世界环境和发展大会”的第21条决议提出“到2000年要在全球范围内控制化学农药的销售和使用，生物农药的产量达到60％”。90年代以来，全世界化学农药的销售量不断下降，代之而起的是微生物农药。我国政府也十分重视土地及水资源环境保护，将“绿色食品和生物农药的发展”列入21世纪议程。作为生物防治重要内容的微生物农药，具有对人、畜及害虫天敌极少或完全没有毒害作用的特点，不污染环境、保持生态平衡，保持农业、林业的可持续发展，适应人们对无公害农副产品、绿色食品的需求。
我国加入WTO后，在国际农产品和食品贸易中，将面对国际绿色壁垒的严峻挑战，即苛刻的农药残留标准。此举导致我国对欧美日等国家的农产品出口受限。解决农药毒性超标的最佳途径就是用生物农药代替传统的高毒、高残留的化学农药。现有的苏云金芽孢杆菌生物农药普遍存在着杀虫见效慢的现象，一般是用药后第4天才开始效果比较明显，而且还存在苏云金芽孢杆菌Bt单一制剂对夜蛾科害虫防治不佳的问题。
发明内容
为了解决现有技术存在的不足，本发明提供一种绿色食品蔬菜田中防治害虫的生物源杀虫复配剂。
本发明的杀虫复配剂为苏云金芽孢杆菌Bt与success，其中文名称为菜禧的复配剂。
Success为美国陶氏益农惠赠，主要起辅助杀虫作用，是胃毒剂，Success可以持续激活靶标昆虫乙酰胆碱烟碱型受体，但是其结合位点不同于烟碱和吡虫啉。多杀菌素也可以影响GABA受体，来起杀虫作用。Success其主要成分为spinosynAC41H65NO16和spinosynBC42H67NO16，分子结构式为 本发明杀虫剂的杀虫谱为甘蓝夜蛾、小菜蛾、草地螟等。
现有的苏云金芽孢杆菌生物农药普遍存在着杀虫见效慢的现象，一般是用药后第4天开始效果比较明显，而使用本配方在当天或第二天的杀虫效果就比较明显；同时，杀虫效果也比原来的苏云金芽孢杆菌生物农药杀虫效果明显。从整体杀虫效果上来讲，本发明的杀虫配方的杀虫效果明显优于以往的同类产品。
本发明研制的生物杀虫剂是高活性苏云金芽孢杆菌菌株和来自于微生物的success复合制剂。通过生物测定方法和对苏云金芽孢杆菌-Bt20活力测定筛选出了与苏云金芽孢杆菌相容性好的高活性生物杀虫剂success，并将其作为系列苏云金芽孢杆菌复合杀虫剂的另一重要杀虫组分，通过室内测定、盆栽和田间小区防治试验，取得了另人满意的防治效果，不但能提高苏云金芽孢杆菌的杀虫效果，而且能提高苏云金芽孢杆菌杀虫的速效性，使目标害虫致死时间提高24小时以上。此种生物制剂配方在国内尚属首次。本发明的生物农药是符合AA级绿色食品和国际有机农业生产标准的生物制剂。本发明解决了以往使用生物农药时见效慢的问题；用生物农药代替传统的高毒、高残留的化学农药来解决农药毒性超标，具有如下优点1、降低蔬菜中的农药残留；2、加速生物农药的见效时间；
3、降低农药对人、畜及害虫天敌的毒害作用；4、减少化学农药对环境的污染、保持生态平衡，保持农业、林业的可持续发展，适应人们对无公害农副产品、绿色食品的需求。
具体实施例方式
具体实施方式
一本实施方式的杀虫复配剂为苏云金芽孢杆菌Bt与success(其中文名称为菜禧)的复配剂，其中每100ml复配剂中含苏云金芽孢杆菌Bt芽孢数2×109～7×109个、菜禧0.01～004ml。
具体实施例方式
二本实施方式的苏云金芽孢杆菌Bt采用苏云金芽孢杆菌(Bacillus Thuringiensis)Bt20，其杀虫复配剂的组成为每100ml成品中含吐温-60或吐温-80(60、80是吐温的商品名)2克、柠檬酸1～3克、甲基纤维素1～4克、硅藻土0.2～0.4克、苯甲酸钠0.5～2克、苏云金芽孢杆菌(BacillusThuringiensis)Bt20芽孢数2×109～7×109个、success0.01～0.04ml。
本实施方式中所用的菌株苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)Bt20简称Bt20，于2006年5月11日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC NO.1710。它在杀虫剂中起杀虫作用，即苏云金芽孢杆菌可形成一种称为“内毒素”的蛋白质晶体，这种内毒素对人、畜无毒，昆虫取食苏云金芽孢杆菌后，内毒素晶体在昆虫的肠道中溶解，经过昆虫肠道中的蛋白酶加工作用，降解成有毒性的蛋白毒素，与肠道细胞表面上的受体结合，插入膜内，形成孔洞或离子通道导致膜完全性的破坏，引起离子渗漏，水随之进入细胞，细胞因膨胀而解体、死亡，最终昆虫死亡。
本实施方式中，所述success的质量浓度为2.5％。
本实施方式中芽孢计数按照如下方法进行在无菌室内，向已培养好的斜面中加入2ml无菌水，刮下菌苔，用移液器反复吹打使其在无菌水中充分混匀，将菌液移入无菌小瓶中；然后按梯度稀释104～105倍；在血球计数板上滴几滴已稀释的菌液，盖好盖玻片，在显微镜下查数并记录平均每格芽孢个数，计算每毫升菌液含芽孢数，求出原菌液浓度。
本实施方式的Bt20可从土壤中分离获得，具体获得方法为(1)主要材料无菌水、多粘菌素B、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、待分离病原的土壤、显微镜。
(2)操作步骤i.将1克土壤悬浮于10毫升无菌水中，强烈振荡，然后静置5分钟。
ii.用灭菌吸管将上层悬浮转入一个灭菌试管中，用无菌水进行10倍系列稀释，将每个稀释度的悬浮1/10毫升放入已灭菌并倒好牛肉膏蛋白胨的琼脂培养基中(pH＝8.5，含5ppm的多粘菌素B)，用灭菌三角玻璃刮铲摊平，30℃，2天，就可分离到Bt20。
值得注意的是iBt20的培养性状见表1。
表1 Bt20的在牛肉膏蛋白胨琼脂斜面上的培养性状
iiBt 20有4条酯酶区带，强带在Ef值与43处，与库斯塔克亚种酯酶型相同，见表2。
表2 Bt20菌株区带数及Ef值
具体实施方式
三本实施方式的杀虫复配剂的组成为每100ml成品中含吐温-60或吐温-802克、柠檬酸1克、甲基纤维素1克、硅藻土0.2克、苯甲酸钠0.5克、苏云金芽孢杆菌(Bacillus Thuringiensis)Bt20芽孢数2×109个、质量浓度为2.5％的success0.01ml。
具体实施例方式
四本实施方式的杀虫复配剂的组成为每100ml成品中含吐温-60或吐温-802克、柠檬酸3克、甲基纤维素4克、硅藻土0.4克、苯甲酸钠2克、苏云金芽孢杆菌(Bacillus Thuringiensis)Bt20芽孢数7×109个、质量浓度为2.5％的success004ml。
具体实施例方式
五本实施方式的杀虫复配剂的组成为每100ml成品中含吐温-60或吐温-802克、柠檬酸1.5克、甲基纤维素2.6克、硅藻土0.3克、苯甲酸钠1克、苏云金芽孢杆菌(Bacillus Thuringiensis)Bt20芽孢数4×109个、质量浓度为2.5％的success0.02ml。上述杀虫剂的药效试验如下1、高活性苏云金杆菌菌株的筛选筛选方法用甘蓝叶片浸苏云金杆菌发酵液，风干后饲喂小菜蛾，于24、72、120、168小时观察小菜蛾的死亡情况，计算死亡率和校正死亡率。对照处理是用清水浸甘蓝叶片。
经初步筛选，得到Bt20的杀虫活性在所选菌株中最强，其校正死亡率为85.40％，具体结果见表3。
表3 苏云金杆菌菌株对菜蛾的室内生物测定
2、苏云金杆菌与Success混用对主要蔬菜害虫的防效测定将Bt20菌种按每毫升含芽孢1×108的菌液，分别与稀释6000倍、9000倍液的Success混用，对菜蛾进行室内、室外杀虫活性测定，通过2年试验结果表明Success对苏云金杆菌有明显的增效作用，药后48～72h对菜蛾室内防效达90％以上，田间小区防治效果稳定在80％～85％以上。对菜青虫、甘蓝夜蛾的室内防治效果为60％～70％(表4～6)。
表4 Success混用对菜蛾防效的室内测定
从表4可以看出Success对菜蛾有一定的防治效果，但其防治效果仅为48～66％；将Success稀释到9000倍还是6000倍时对菜蛾防治的效果差异不大。
表5 Bt20与success混配及单独使用时菜蛾的校正死亡率
从表5可以看出Bt20与success混配的杀虫效果明显优于单独Bt20和success的单独使用；同时，也可以看出Success稀释到9000倍还是6000倍与Bt20混合使用对菜蛾的防治效果影响不大。
表6 田间小区菌株Bt20与Success混用对菜蛾幼虫的防治效果
从表6可以看出苏云金芽孢杆菌Bt20与success混配的防治菜蛾幼虫的效果明显优于单独Bt20和success的单独使用；而且，明显优于常用的菜蛾杀虫剂2.5％功夫菊酯。同时，也可以看出success稀释到9000倍还是6000倍与Bt20混合使用对菜蛾的防治效果影响不大。
3、生物杀虫剂的室内杀虫活性及田间防治效果(表7～9)用本实施方式所配制复配制剂对菜青虫、甘蓝夜蛾、草地螟等重要农林害虫进行了杀虫活性测定。结果表明，对菜青虫防效达89.1％(72h)、甘蓝夜蛾84.8％(72h)、草地螟86.7％(48h)。室外盆栽及小区试验，对对2龄甘蓝夜蛾的防治效果达70～100％(96h)。
表7 Bt20菌株与Success及助剂混配后对草地螟的防治效果
注助剂是指配方中除了苏云金芽孢杆菌Bt20和success以外的其它成份组合。
从表7可以看出单独使用助剂时，对草地螟的杀虫效果不大，可以忽略；本实施方式的复配剂对草地螟的杀虫效果明显优于success+Bt20对草地螟的防治效果。
表8 田间小区菌剂对菜青虫的防治结果
从表8可以看出田间小区试验中，本实施方式的复配剂对菜青虫的杀虫效果优于菌株Bt20单独防治效果。
表9 Bt复配剂对蔬菜害虫的田间小区防治试验
从表9可以看出本实施方式的复配剂对甘蓝夜蛾都有较好的防效。
权利要求
1.绿色食品蔬菜田中防治害虫的生物源杀虫复配剂，其特征在于所述杀虫复配剂为苏云金芽孢杆菌Bt与success的复配剂。
2.根据权利要求1所述的绿色食品蔬菜田中防治害虫的生物源杀虫复配剂，其特征在于每100ml复配剂中含苏云金芽孢杆菌Bt芽孢数2×109～7×109个、菜禧0.01～004ml。
3.根据权利要求1或2所述的绿色食品蔬菜田中防治害虫的生物源杀虫复配剂，其特征在于所述苏云金芽孢杆菌Bt为苏云金芽孢杆菌Bt20。
4.根据权利要求3所述的绿色食品蔬菜田中防治害虫的生物源杀虫复配剂，其特征在于所述苏云金芽孢杆菌Bt20于2006年5月11日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC NO.1710。
5.根据权利要求1所述的绿色食品蔬菜田中防治害虫的生物源杀虫复配剂，其特征在于所述每100ml复配剂中含吐温-60或吐温-802克、柠檬酸1～3克、甲基纤维素1～4克、硅藻土0.2～0.4克、苯甲酸钠0.5～2克、苏云金芽孢杆菌Bt20芽孢数2×109～7×109个、success0.01～004ml。
6.根据权利要求所述的绿色食品蔬菜田中防治害虫的生物源杀虫复配剂，其特征在于每100ml复配剂中含吐温-60或吐温-802克、柠檬酸1克、甲基纤维素1克、硅藻土0.2克、苯甲酸钠0.5克、苏云金芽孢杆菌Bt20芽孢数2×109个、success0.01ml。
7.根据权利要求所述的绿色食品蔬菜田中防治害虫的生物源杀虫复配剂，其特征在于100ml复配剂中含吐温-60或吐温-802克、柠檬酸3克、甲基纤维素4克、硅藻土0.4克、苯甲酸钠2克、苏云金芽孢杆菌Bt20芽孢数7×109个、success004ml。
8.根据权利要求所述的绿色食品蔬菜田中防治害虫的生物源杀虫复配剂，其特征在于每100ml复配剂中含吐温-60或吐温-802克、柠檬酸1.5克、甲基纤维素2.6克、硅藻土0.3克、苯甲酸钠1克、苏云金芽孢杆菌Bt20芽孢数4×109个、success0.02ml。
全文摘要
绿色食品蔬菜田中防治害虫的生物源杀虫复配剂，涉及一种杀虫剂。本发明杀虫复配剂为苏云金芽孢杆菌Bt与success的复配剂，其中每100ml复配剂中含苏云金芽孢杆菌Bt芽孢数2×10
文档编号A01N43/02GK1875717SQ20061001026
公开日2006年12月13日 申请日期2006年7月7日 优先权日2006年7月7日
发明者于洪春, 赵奎军, 樊东, 韩岚岚, 王晓云, 戴长春 申请人:东北农业大学