枯草杆菌的杀菌剂或土壤改良剂的制作方法

专利名称：枯草杆菌的杀菌剂或土壤改良剂的制作方法
技术领域：
本发明系为 一种枯草杆菌的杀菌剂或土壤改良剂的制作方法，尤指 有关于培养枯草杆菌及后续将培养液制作成液剂型或粉剂型或其它剂型 的杀菌剂或土壤改良剂的方法，其杀菌剂来源为生物，故亦可称为生物 杀菌剂。10背景技术枯草杆菌是一种会产生孢子且具多种功能的菌林，其不同分离抹过 去多用于生产酵素或抗生素等。本发明将其用于生产杀菌剂或土壤改良 剂。本发明显示枯草杆菌的分离株在培养后得到的孢子及代谢物质可做 15 为农药用于植物病害防治(如豌豆白粉病)及改良土壤菌相促进植物生长。发明内容本发明目的在于提出一种可做为农药用于植物病害防治(如豌豆白粉 病)及改良土壤菌相促进植物生长的枯草杆菌的杀菌剂或土壤改良剂的制20 作方法。一种枯草杆菌的杀菌剂或土壤改良剂制作方法，其特征在于 利用淀粉、蛋白质、糖蜜、酵母粉、玉米浸泡液、(NH4)2S04 、K2HP04 、MgS(V7H20 、 CaCl2*2H20及MnS04.H20作为培养基，并经由下列制作步骤 b. 发酵槽因枯草杆菌为好气性，需消耗大量氧气以维持成长，故 在液态发酵时应以搅拌通气式或相当之高供氧量的发酵槽培养之；c. 培养基质系由最适当的淀粉5-40公克/公升、蛋白质3-24公克/ 公升、糖蜜l-8公克/公升、酵母粉1.5-12.0公克/公升、玉米浸泡液0.5-4.05公克/公升、(NH4)2S04 0.3-2.4公克/公升、K2HP04 0.4-3.2公克/公升、 MgS04*7H20 0.2画1.6公克/公升、CaCl2'2H20 10-80毫克〃^升、MnS04'H20 6-48毫克/公升所组成；d. 发酵操作其操作条件为温度20 40°C、 Ph6.0~8.0、溶解氧气浓 度维持在30%以上饱和度；io e.浓缩系将培养液以真空浓缩除去水份制成浓缩液，其操作压力在0.5大气压以下，其温度在60。C以下，而较佳的压力在O.l气压以下， 其温度在40。C以下，最佳的压力在0.01气压以下，其温度在35。C以下；f. 液剂制剂经过真空浓缩后的浓缩液添加适当及适量的添加剂， 并调节水份使孢子浓度达到既定的产品规格，即可制成液剂产品并具杀15 菌或土壤改良剂的功能；g. 喷雾干燥真空浓缩后的浓缩液以喷雾干燥机完全除去水份，喷 雾出口温度70。C以下可维持孢子的活性；h. 粉剂制剂即以喷雾干燥方式除去水份制成粉末，并可添加适当 及适量的载剂、佐剂或稀释剂，并调节孢子数量达到既定的产品规格，20即可制成粉剂产品；以及I.其它制剂其它剂型(如锭剂、乳剂等)可由液剂或粉剂加工衍生而得。本发明的有益效果在于主要系利用一种枯草杆菌的分离抹在发酵槽中以特别调配的培养基 25质在特定的操控条件下进行培养。培养至末期当孢子生成后，将培养液 真空浓缩以除去水^盼。浓缩液经适当调配后可制成液剂型杀菌或土壤改 良剂。浓缩液再经喷雾干燥可制得粉体，此粉体经适当调配后可制成粉 型杀菌剂或土壤改良剂。其它剂型(如锭剂、乳剂等)可由液剂或粉剂加工 衍生而得。根据该方法制得的产品可做为农药用于植物病害防治(如豌豆 5 白粉病)及改良土壤菌相促进植物生长。附困的简要说明


图1为本发明枯草杆菌的杀菌剂或土壤改良剂的制作方法流程图 10主要组件符号说明A菌种B发酵槽C培养基质D发酵操作E真空浓缩F液剂制剂G喷雾干燥H粉剂制剂I其它制剂具体实施方式
本发明系为 一种枯草杆菌的杀菌剂或土壤改剂制作方法，主要系利用淀粉、蛋白质、糖蜜、酵母粉、玉米浸泡液(com steep liquor)、 (NH4)2S04、 K2HP04、 MgS04*7H20、 CaCl2*2H20及MnS04*H20作为培养基，并经由 25 下列制作步骤
请参阅
图1所示1. 菌种A:取适合于生产杀菌剂或土i裏改良剂的枯草杆菌的分离抹。所述分离 抹可以在市场购得，即在台湾食品工业发展研究所中的生物资源保存及 5 研究中心(BCRC, Bioresource Collection Research Center)购得。BCRC number: 14199、 10259、 10258、 10257。2. 酿发酵槽B:枯草杆菌为好气性，需消耗大量氧气以维持成长，故在液态发酵时 io 应以搅拌通气式或相当之高供氧量的发酵槽B培养之。本发明以容量50 公升至50000公升(50顿)的大型工业用液态搅拌通气式发酵槽B为例培 养枯草杆菌，在此容量范围之外的发酵槽B亦可应用。3. 培养基质C:is 本发明的培养基质C曾经过最适化研究决定适当的碳/氮比(C/N ratio)与其它微量养份的比例，以促进枯草杆菌的均衡生长(balanced growth)及 孢子与代谢物质的生成。该最适化的培养基质C各成份比例为淀粉5公 克蛋白质3公克糖蜜l公克酵母粉1.5公克玉米浸泡液(corn steep liquor)0.5公克(NH4)2SO40.3公克K2HPO4 0.4公克MgS04'7H20 0.220公克CaCl2*2H20 10毫克MnS04*H20 6毫克。适合菌体生长的培养基质C的组成范围为淀粉5-40公克/公升、蛋白 质3-24公克/公升、糖蜜l-8公克/公升、酵母粉1.5-12.0公克/公升、玉米 浸泡液0.5-4.0公克/公升、(NH4)2S04 0.3-2.4公克/公升、K2HP04 0.4-3.2 公克/公升、MgS04*7H20 0.2-1.6公克/公升、CaCl2*2H20 10-80毫克/公升、25 MnS04*H20 6-48毫克/公升。枯草杆菌在浓度低于此组成的培养基质中生 长迟緩在浓度高于此组成的培养基中生长受抑制。可获得较快速生长的较佳培养基质C组成范围为淀粉15-30公克/公 升、蛋白质9-18公克/公升、糖蜜3-6公克/公升、酵母粉4.5-9.0公克/公 升、玉米浸泡液1.5-3.0公克/公升、(NH4)2SO4 0.9-1.8公克/公升、K2HP04 51.2-2.4公克/公升、MgS04*7H20 0.6-1.2公克/公升、CaCl2*2H20 30-60毫 克/公升、MnS04'H20 18-36毫克/公升。可获得较快速生长的较佳培养基质组成范围为淀粉20-25公克/公升、 蛋白质12-15公克/公升、糖蜜4-5公克/公升、酵母粉6.0-7.5公克/公升、 玉米浸泡液2.0-2.5公克/公升、(NH4)2S04 1.2-1.5公克/公升、K2HP04 io1.6-2.0公克/公升、MgS04'7H20 0.8-1.0公克/公升、CaCl2*2H20 40-50毫 克/公升、MnS04 .H20 24-30毫克/公升。可用的淀粉如玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、树薯淀粉。可用的 蛋白质如大豆蛋白、干酪粉(casein)、乳清蛋白。使用不同的淀粉或蛋白 质效果差异不大。酵母粉提供枯草杆菌必要的生长因子(growth factor)以 15 促菌体产生孢子及代谢物质，故为本发明的培养基质C中重要不可缺的 部份。枯草杆菌在缺乏酵母粉的培养基质C中发育不佳，不适合做为杀 菌剂或土壤改良剂。糖蜜、酵母粉及玉米浸泡液中原已含有微量元素， 但含量不足，故在本发明的培养基质C中添加无机盐类补充之。20 4.酸发酵操作D:配合前述最适化的培养基质C，在下述调整后的操作条件下进行发 酵，在所有曾进行过的试验中可得枯草杆菌孢子与代谢物质的最大产量。 发酵槽B中的培养基质C占发酵槽总体积最多70%,预留的上层空 间可容纳液面的泡沫及避免液体因搅拌而溅出。培养基质以12 rc的饱和 25 蒸气杀菌。培养基质C维持在12rc的时间视发酵槽B的大小而改变，
但以最短可行的时间为准，以免培养基质受热过久而变性。本发明显示50公升发酵槽B维持在121。C的时间以20分钟以内较佳，500公升发酵 槽25分钟以内较佳，5吨发酵槽40分钟以内较佳。在培养基质C的蒸 气杀菌过程中，以发酵槽B附属的控制计算机自动进行通蒸气、升温、 5维持恒温、降温、通冷却水、通气、阀开关等程序。取自4。C冷藏的培养亚中不需经热震(heat shock)活化的菌种孢子经 摇瓶或小型发酵槽B等方式扩大培养为种菌后接种至大型工业发酵槽 中。发酵操作D温度为20-40°C,在此范围之外菌体生长迟緩。可获得较 io 快速生长的较佳温度为24-36°C。可获得较快速生长的较佳温度为 28-32°C。孢子生产期(sporulationphase)的温度维持在30-32。C较佳。发酵液的pH以已另行灭菌的酸液及碱液(如硫酸及氢氧化钠液)维持 在5.5-8.5，在此pH范围之外菌体生长受抑制。可获得较快速生长的较佳 pH为6.0-8.0。可获得较快速生长的较佳pH为6.5-7.5。在此生长过程中 15 由迟滞期(lag phase)至营养生长期(vegetative growth phase)的中段，pH下 降，须添加碱液维持之；由营养生长期的中段至孢子生产期，pH回升， 须添加酸液维持之。发酵液中的溶解氧气浓度(DO)维持在30%饱和度以上，在此饱和度 之下菌体生长受抑制且有溶菌(菌体分解)现象。可获得较快速生长的较佳 20 DO为50。/o饱和度以上。可获得较快速生长的较佳DO为70%饱和度以上。 在生长过程中，由迟滞期至营养生长期的中段，DO下降；由营养生长期 的中段至孢子生产期，DO回升。此现象与pH的变化一致。DO饱和度 可由搅拌速率及/或通气量调节之。搅拌速率/或通气量增加，DO饱和度 提升；反之下降。25 发酵槽B搅拌速率以维持最大为原则，以提升发酵液的DO饱和度。
其数值依槽体大小而改变。可按各槽规格操作说明书所列最大容许搅拌率的80%(搅拌速率可改变时)或发酵槽B原厂设定的固定搅拌速率操作， 如50乂/^升槽可为300rpm, 500^^升槽可为lOOrpm, 5 p屯槽可为20rpm。高搅拌速率产生的强大剪应力可将首尾连接成串的数个细胞分离成单独 5 个体，但对菌体的发育无不良影响。当发酵槽B在上述之搅拌速率下操作时，经过滤除菌后的空气的通 气量由设定发酵液的DO饱和度下限后经发酵槽B附属的控制计算机调 节之。在生长过程中，由迟滞期至营养生长期的中段，通气量增加以维 持设定的DO饱和度下限；由营养生长期的中段至孢子生产期，通气量 io 回降。此现象与pH的变化一致。在大型发酵槽B中，因搅拌速率有限， 在营养生长期的中段菌体需氧量最大时，通气量可能增加至设备操作容 量的上限。在发酵培养的过程中，因搅拌及通气和培养基质含蛋白质之故，会 在发酵液面产生大量泡沫。故应激活发酵槽B附属的自动消泡设备添加15 已另行灭菌之消泡剂消除泡沫。可用的消泡剂可为硅质(silicon-based)或 脂质(lard),并可经适当的稀释。发酵过程可于80-95%的细胞产生孢子并且细胞破裂释放出成熟的自 由孢子后结束。本发明显示更高的产孢率不易达成且费时，不符发酵槽 操作的经济效益。发酵培养的全程操作时间视发酵槽B的大小而改变。加本发明显示50公升发酵槽B全程操作时间在20小时以内，500公升发 酵槽B在23小时以内，5吨发酵槽B在25小时以内，50吨发酵槽在26 小时以内。5.真空浓缩E :25 发酵完成后培养液以真空浓缩E除去水份。真空浓缩机的操作条件
为真空度在0.5大气压(atm)，较佳的真空度在O.l大气压以下，最佳的真 空度在O.Ol大气压以下；培养液的沸点在60。C以下，较佳的沸点在40。。 以下，最佳的沸点在35。C以下，除去水份可提高渗透压以保持产品的新 鲜及延长保存期。56. 液剂制剂F:真空浓缩后的浓缩液添加适当及适量的添加剂，并调节水份使孢子 浓度达到既定的产品规格，即可制成液剂产品。可用的添加剂至少包含 防腐剂、调节pH的酸液或碱液。此液剂产品具杀菌或土壤改良剂的功〗o 能。7. 喷雾千燥G:真空浓缩E后的浓缩液以喷雾干燥机完全除去水份。喷雾出口温度 70°C以下可维持孢子的活性。158. 粉剂制剂H:喷雾干燥G后的粉体添加适当及适量的载剂、佐剂或稀释剂，并调 节孢子数量达到既定的产品规格，即可制成粉剂产品。可用的栽剂、佐 剂或稀释剂至少包含木屑、翁土粉、接口活性分散展着剂。此粉剂产品 20 具杀菌产品或土壤改良剂的功能。9. 其它制剂I:其它剂型(如锭剂、乳剂等)可由液剂或粉剂加工衍生而得。25实施例1培养枯草杆菌的方法 首先，冷藏于4。C的PDA培养皿上的枯草杆菌孢子以摇瓶培养活化。 摇瓶底部可附凹槽以增加强氧气传送及搅拌的效果。摇瓶中的培养基(以 下简称标准培养基)组成为玉米淀粉20公克/公升、大豆蛋白12公克/公升、糖蜜4公克/公升、酵母粉6公克/公升、玉米浸泡液2公克/公升、 5(NH4)2S04 1.2公克/公升、K2HP041.6公克/公升、MgS04*7H20 0.8公克/ 公升、CaCV2H2O40毫克/公升、MnS04*H20 24毫克/公升。摇瓶中培养 基的体积以摇瓶容积的1/5为准，如500毫升的摇瓶内装100毫升的培养 基。摇并瓦置于31士rC及200rpm的培养箱中进行培养。当摇瓶中的培养液的菌体光学密度(OD，或吸光度Absorbance)达到 io 0.5以上即可将培养液移转至5公升发酵槽扩大培养。5公升发酵槽内有 3.5公升的标准培养基。以足量的摇,养接种5公升发酵槽使接种量达 10%以上。5公升发酵槽在31±1 。C 、 pH 7.0±0.1及DO 70%饱和度以上的 条件下才喿作。在此DO条件下，发酵槽搅拌速率在600rpm以上，通气量 在1公升/分钟以上。 15 当5公升发酵槽中培养液的菌体DO达到0.5以上即可将培养液移转至50公升发酵槽扩大培养。50公升发酵槽内有35公升的标准培养基。 50公升发酵槽31土1。C 、 pH 7.0±0.1及DO 70%饱和度以上的条件下操作。 在此DO条件下，发酵槽搅拌速率在300rpm以上，通气量在5公升/分钟 以上。发酵可进行至最后(约接种后20小时内)培养基中的养份消耗殆尽、 20 菌体已产生成熟孢子并释放出菌体外时结束，培养液可以真空浓缩进行 后续处理。发酵亦可进行至培养液的菌体OD达到0.5以上做为500公升 发酵培养的种菌。当50公升发酵槽中培养液的菌体DO达到0.5以上即可将培养液移 转至500公升发酵槽扩大培养。500公升发酵槽内有350公升的标准培养 25基。500公升发酵槽31士rC、 pH7.0土0.1及DO60。/。饱和度以上的条件下
操作。在此DO条件下，发酵槽搅拌速率在100rpm以上，通气量在l5 公升/分钟以上 发酵可进行至最后(约接种后23小时内)培养基中的养份 消耗殆尽、菌体已产生成熟孢子并释放出菌体外时结束，培养液可以真 空浓缩进行后续处理。发酵亦可进行至培养液的菌体OD达到0.5以上做5为5000公升(5吨)发酵培养的种菌。当500公升发酵槽中培养液的菌体DO达到0.5以上即可将培养液移 转至5000公升发酵槽扩大培养。5000公升发酵槽内有3500公升的标准 培养基。5000公升发酵槽31士rC、 pH 7.0土0.1及DO 50%饱和度以上的 条件下^喿作。在此DO条件下，发酵槽搅拌速率在50rpm以上，通气量io 在30公升/分钟以上。发酵可进行至最后(约接种后25小时内)培养基中 的养份消耗殆尽、菌体已产生成熟孢子并释放出菌体外时结束，培养液 可以真空浓缩进行后续处理。发酵亦可进行至培养液的菌体OD达到0.5 以上做为50000公升(50吨)发酵培养的种菌。当5000公升发酵槽中培养液的菌体DO达到0.5以上即可将培养液15 移转至50000公升发酵槽扩大培养。50000公升发酵槽内有35000公升的 标准培养基。5000公升发酵槽31土rC、 pH 7.0士0.1及DO 50%饱和度以 上的条件下操作。在此DO条件下，发酵槽搅拌速率在20卬m以上，通 气量在50公升/分钟以上。发酵进行至最后(约接种后26小时内)培养基 中的养4分消耗殆尽、菌体已产生成熟孢子并释放出菌体外时结束，培养20 液可以真空浓缩进行后续处理。实施例2制作成杀菌剂或土壤改良的方法实施例1中在各不同体积的发酵槽中完成发酵的全部培养液以真空 25浓缩除去水份。真空浓缩机的操作条件为真空度在0.01大气压以下；培
养液的沸点在35。C以下。培养液中若有残留的养份将与培养液一同浓缩， 配制为成品后施用于田间可做为农作物的有机肥料，此做法亦可免除排 放培养液中残留的养份至厂外污染环境的问题。添加适量的水份及酸液或碱液至上述浓缩液，使孢子浓度达到109/ 5毫升以上、pH在7.0士0.5,即可制成液剂产品。上述浓缩液以喷雾干燥机在喷雾出口温度70。C以下完全除去水份后 可得粉体。添加适量的黏土粉至此粉体使孢子数达到109/公克以上，即可 制成粉剂产品。io实施例3液剂型枯草杆菌杀菌剂或土壤改良剂田间试验实例 实施例2中的液剂产品以水稀释400或800倍加适量的接口活性分 私艮着剂，若再添加肥料级胺基酸液稀释1000倍混合静置3小时以上将 有助于枯草杆菌孢子的活化。将此稀释混合液以每公亩200公升以上的 15 施用率均匀喷洒于刚发病的豌豆苗茎叶上，每隔7日施用一次，连续4 次以上，可防治豌豆白粉病并且植抹生长势旺盛，结果期长，果英大而 美丽。试-验详细资料如下百泰生物科技股份有限公司田间试验4艮告 84年6月 20 —.试验目的探讨枯草杆菌剂或土壤改良剂4。/。液剂(S)对豌豆白粉病的防治效果二. 试验药剂枯草杆菌4。/。S三. 试-险i殳计l.试验单位百泰生物科技股份有限公司技术推广部 25 2.试验时间84年4月 84年5月3.试-验地点台中新社 4j式-验作物豌豆5.试-验方法发病初期开始施药，以后每隔7天施药一次，共四次， 喷药时加展着剂均匀喷施全抹。 5 6.田地设计采逢机完全区集设计，每小区40抹，三重复。7. 药剂处理A. 枯草杆菌4%S 400XB. 枯草杆菌4%S 800XC. 平克座10.5% 1500X io D.对照区不施药8. 施药曰期A. 84/4/16B. 84/4/23C. 84/4/30 15 D. 84/5/79. 调查曰期:84/5/1410. 药效调查于最后一次施药后再隔一周调查，统计罹病抹表列之， 并观察结果情形。2025试-睑药剂枯草杆菌4%S 枯草杆菌4%S 平克座10.5% 对照组四.试-验结果稀释倍数 400倍 800倍1500倍罹病率4.96.8 3.2 25.6注喷洒枯草杆菌的区域植抹生长旺盛、结果期可长达2个月以上(5 月初至7月初)、果英大而美观(颜色翠绿光亮)。 五.结论l.试验期间没有药害发生。 5 2.由以上资料可知枯草杆菌4%S对豌豆白粉病的防治效果佳，并且植株生长旺盛、结果期长、果英大而美观。实施例4粉剂型枯草杆菌剂杀菌剂或土壤改良剂田间实验例 io 实例2中的粉剂产品以水稀释600倍，若再添加肥料级胺基酸液稀释1000倍混合静置3小时以上将有助于枯草杆菌孢子的活化。将此稀释 混合液以每棵500毫升以上的施用率灌注于移植10日的蕃茄苗根部附近 土壤中，每隔7日施用一次，连续4次以上，可防治蕃茄青枯病并且植 抹生长势旺盛，结果期长，果英大而美丽。试验详细资料如下 15 百泰生物科技股份有限公司田间试验报告 90年10月一. 试验目的探讨枯草杆菌剂或土壤改良剂50。/o可湿性粉剂(WP)对 蕃茄青枯病的防治效果二. 试验药剂枯草杆菌50。/。WP 20 三.试-验设计1. 试验单位百泰生物科技股份有限公司技术推广部2. 试验时间卯年7月 90年8月3. 试验地点南投埔里4. 试验作物蕃茄25 5.试验方法于作物移植后10天，土壤灌注，七天一次连续四次。
6. 田地设计采逢机完全区集设计，每小区50林，三重复。7. 药剂处理A. 枯草杆菌50%WP 600XB. 氢氧化铜77%WP 800XC. 对照区不施药8.施药曰期:A.90/7/10B.90/7/17C.90/7/24D.90/7/319.调查日期:A.9CV7/17B.90/7/24C.90/7/31D.90/8/6E.90/8/13F.術8/20IO.药效调查于每次施药后调查，统计罹病林表列之，并观察结果20 情形。四.试验结果1. 由于前二次调查均未发病故不列表。但观查到灌注枯草杆菌的区域 植抹生长势旺盛。2. 第三次调查罹病才朱(90/7/31)25 处 理 罹病率123平均
A. 枯草杆菌50%WP 600XB. 氢氧化铜77%WP 800X c.对照不施药区000 o 0 2 0 0.6635 3 3.66注灌注枯草杆菌的区域才直抹生长势旺盛。 3.第四次调查罹病株(90/8/6)处 理 罹病率123平均 600X 1 0 0 0.33,X 4 4 5 4.335 8 7 6.67注灌注枯草杆菌的区域植抹生长势旺盛，并且植抹果粒大而美观(色 彩鲜艳亮度高)。4.第五次调查罹病抹(90/8/13)A. 枯草杆菌50°/。WPB. 氢氧化铜77%WPC. 对照不施药区1520处 理A. 枯草杆菌50%WP 600XB. 氢氧化铜77%WP 800XC. 对照不施药区^病率1 2 3 平均 120 1.00 8 6 7 7.007 12 12 10.3325注灌注枯草杆菌的区域植抹生长势旺盛，并且植株果粒大而美观(色 彩鲜艳亮度高)。S.第六次调查罹病林(90/8/13)处 理 罹病率123 平均 A. 枯草杆菌50。/oWP600X 22 1 1.67B. 氢氧化铜77%WP800X 10 8 9 9.00C. 对照不施药区 1116 15 14.00注灌注枯草杆菌的区域植抹生长势旺盛，并且植抹果粒大而美观(色 5 彩鲜艳亮度高)。 五.结论1. 试验期间没有药害发生。2. 由以上资料可知枯草杆菌50%WP对蕃茄青枯病的防治效果佳， 比较对照药剂差异大，并且植抹生长旺盛、结果期长(由8月初可持续采io收至11月以上，平均每林开花8次以上)、果粒大而美观(色彩鲜艳亮度高)。
权利要求
1. 一种枯草杆菌的杀菌剂或土壤改良剂制作方法，其特征在于利用淀粉、蛋白质、糖蜜、酵母粉、玉米浸泡液、(NH4)2SO4、K2HPO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O及MnSO4·H2O作为培养基，并经由下列制作步骤a.菌种取适合于生产杀菌剂或土壤改良剂的枯草杆菌的分离株；b.发酵槽因枯草杆菌为好气性，需消耗大量氧气以维持成长，故在液态发酵时应以搅拌通气式或相当之高供氧量的发酵槽培养之；c.培养基质系由最适当的淀粉5-40公克/公升、蛋白质3-24公克/公升、糖蜜1-8公克/公升、酵母粉1.5-12.0公克/公升、玉米浸泡液0.5-4.0公克/公升、(NH4)2SO40.3-2.4公克/公升、K2HPO4 0.4-3.2公克/公升、MgSO4·7H2O 0.2-1.6公克/公升、CaCl2·2H2O 10-80毫克/公升、MnSO4·H2O6-48毫克/公升所组成；d.发酵操作其操作条件为温度20～40℃、Ph6.0～8.0、溶解氧气浓度维持在30％以上饱和度；e.浓缩系将培养液以真空浓缩除去水份制成浓缩液，其操作压力在0.5大气压以下，其温度在60℃以下，而较佳的压力在0.1气压以下，其温度在40℃以下，最佳的压力在0.01气压以下，其温度在35℃以下；f.液剂制剂经过真空浓缩后的浓缩液添加适当及适量的添加剂，并调节水份使孢子浓度达到既定的产品规格，即可制成液剂产品并具杀菌或土壤改良剂的功能；g.喷雾干燥真空浓缩后的浓缩液以喷雾干燥机完全除去水份，喷雾出口温度70℃以下可维持孢子的活性；h.粉剂制剂即以喷雾干燥方式除去水份制成粉末，并可添加适当及适量的载剂、佐剂或稀释剂，并调节孢子数量达到既定的产品规格，即可制成粉剂产品；以及I.其它制剂其它剂型(如锭剂、乳剂等)可由液剂或粉剂加工衍生而得。
2. 如权利要求1所述的制作方法，其特征在于所述发酵槽以容量50公 升至50000公升(50吨)的大型工业用液态搅拌通气式培养枯草杆菌。
3. 如权利要求1所述的制作方法，其特征在于其中液剂制剂的添加剂 io至少包含有防腐剂、调节pH的酸液或碱液。
4. 如权利要求3所述的制作方法，其特征在于含有枯草杆菌的液剂制 剂经由浓缩后添加适量水份及酸液或碱液，并调节pH为7.0±0.5，使其 孢子浓度达到109/毫升以上所形成。15
5. 如权利要求1所述的制作方法，其特征在于粉剂制剂的添加剂的载 剂、佐剂或稀释剂至少包含木屑、黏土粉、接口活性分散展着剂。
6. 如权利要求5所述的制作方法，其特征在于含有枯草杆菌的粉剂制 20剂培养液经由浓缩、喷雾干燥所形成的粉体，添加适量的黏土，使其孢子浓度达到109/公克以上所形成。
7. 如权利要求1所述的制作方法，其特征在于枯草杆菌的杀菌剂或土 壤改良剂可用于植物、土壤、种子的处理与青枯病的防治效果优越。
全文摘要
本发明系为一种枯草杆菌的杀菌剂或土壤改良剂的制作方法，主要系利用淀粉、蛋白质、糖蜜、酵母粉、玉米浸泡液(corn steep liquor)、(NH₄)₂SO₄、K₂HPO₄、MgSO₄·7H₂O、CaCl₂·2H₂O及MnSO₄·H₂O作为培养基，并经由下列制作步骤菌种、培养基质、发酵操作、真空浓缩、液剂制剂、喷雾干燥、粉剂制剂及其它制剂，其中方法所制作的培养液作为杀菌剂或土壤改良剂的用途，而培养液的杀菌剂或土壤改良剂，可分为液剂型产品或粉剂型产品，可用于植物、土壤、种子的处理与青枯病的防治效果优越。
文档编号A01N63/00GK101209057SQ20061016806
公开日2008年7月2日 申请日期2006年12月25日 优先权日2006年12月25日
发明者陈良荣 申请人:百泰生物科技股份有限公司