专利名称：：一种花叶夹竹桃的组织培养方法
技术领域：
：本发明涉及植物的组织培养法，具体地说，是花叶夹竹桃的组织培养法。
背景技术：
：花叶夹竹桃(^r/鹏cv.Variegata)是夹竹桃科夹竹桃属常绿直立大灌木。原产于伊朗、印度、尼泊尔，我国长江以南各省区广为栽植的常用彩叶树种。整个植株，黄绿相间，有的叶片全黄，有的叶片黄、绿交错。植株高达4-5米，萌蘖性强，极耐修剪。叶革质，较原种叶片略薄，花冠粉红色，径约5厘米，有特殊香气，单瓣或重瓣，果长圆形，花期6-10月，常植于公园、庭院、街头、绿地等供观赏。为了保持植株原有性状，必需采用无性繁殖方法繁殖，传统的繁殖方法是扦插、压条，但繁殖速度慢。由于种质资源少，传统方法很难在短期内获得大量植株。在现有技术中，没有有关花叶夹竹桃组织培养方法的报道。
发明内容一种花叶夹竹桃的组织培养方法，它基本上由下列步骤组成步骤l:釆用经选育的花叶夹竹桃优良单株腋芽茎段或茎尖为外植体，经70%酒精消毒30秒，再用0.1%的升汞溶液消毒，(一般8-10分钟)，用无菌水冲洗3-5次；步骤2:在超净的工作台上，无菌条件下，将消毒的外植体接种在经消毒的含有启动培养基的玻璃瓶中，将其置于普通日光灯为光源、光照强度为1500-20001x下，每曰照光14小时，温度22-27"C、湿度为50%-65°/，培养40天，分化长成试管芽苗，所述的启动培养基为每升基本培养基加噻苯隆(TDZ)0.1-0.5毫克、6-苄基嘌呤(BA)1.0-1.5亳克和吲噪丁酸(IBA)0.02-0.1亳克；步骤3:将从步骤2中长成的芽苗，剪切，按步骤2转接于经消毒的含有增殖培养基的玻璃瓶中，进行增殖培养，不断增殖，视繁殖生产规模需要达2000-5000瓶时进入下一步，所述的增殖培养基为每升基本培养基加玉米素(ZT)0.5-1.5亳克、6-节基嘌呤1.0-2.0亳克、吲噪丁酸0.05-0.2亳克和活性炭(Charcoal)1000-2000亳克；步骤4:将步骤3中培养的试管芽苗，剪切，按步骤2接种于经消毒的含有壮苗培养基的玻璃瓶中，进行壮苗培养，30天后进入下一步，所述的壮苗培养基为每升基本培养基加玉米素(ZT)0.2-1.0亳克、6-节基嘌呤0.5-1.0亳克、吲噪丁酸0.1-0.3亳克和活性炭(Charcoal)1000-2000亳克；步骤5:将步骤4中的试管壮苗，去掉基部愈伤组织和部分叶片，留4-5片叶片，按步骤2接种于经消毒的含有生根处理产生根原基培养的培养基的玻璃瓶中，进行生根培养7-12天，所述的生根处理产生根原基培养基为每升基本培养基加oc-萘乙酸(MA)O.2-0.5亳克、丐l哚丁酸0.4-0.8亳克和活性炭(Charcoal)2000-3000亳克；步骤6:将步骤5中生长的带有根原基的无根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭黄心土=1:l(体积比)的基质中，浇透水，保持温度25-28r，相对湿度85%以上，遮光(前IO天)75%，后逐渐见光，25天后生根成活,生根率达86%以上，40-50天，全光照。上述的花叶夹竹桃的组织培养方法，所述的基本培养基的配方见表1:表1:每升基本培养基中含有如下物质种类和质量:<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>本发明的花叶夹竹桃的组织培养方法，通过组织培养方法，能保持原植株的优良性状，而且繁殖速度快，能在短期内生产大量优质种苗，满足园林绿化市场的需要。具体实施例方式实施例1.花叶夹竹桃的组织培养所用的基本培养基配方如表2表2每升基本培养基中含有如下物质种类和质量<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>启动培养基每升基本培养基+TDZ0.lmg+BA1.0mg+IBA0.02mg;增殖培养基每升基本培养基+ZT0.5mg+BA1.Omg+IBA0.05mg+Charcoal1000mg;壮苗培养每升基本培养基+ZT0.2mg+BA0.5mg+IBA0.lmg+Charcoal1000mg;生根处理产生根原基培养每升基本培养基+NAA0.2mg+IBA0.4mg+Charcoal2000mg。将上述启动培养基注入玻璃瓶中，经高温高压消毒(120-125。C，1.1KG/CM2)20分钟，待用。1、釆用经选育的花叶夹竹桃优良单株腋芽茎段或茎尖为外植体，经70%酒精消毒30秒，再用0.1%的升汞溶液消毒，(8-10分钟)，用无菌水冲洗3-5次；2、在超净的工作台上，无菌条件下，将消毒的外植体接种在经消毒的含有启动培养基的玻璃瓶中，将其置于普通日光灯为光源、光照强度为1500-20001x下，每日照光14小时，温度22-27°C、湿度为50°/。-65%，培养40天，分化长成试管芽苗；3、将从步骤2中长成的芽苗，剪切，按步骤2转接于经消毒的含有增殖培养基的玻璃瓶中，进行增殖培养，不断增殖，一个周期30天的繁殖倍数为4.0，生长高度达3.5cm，视繁殖生产规模需要达2000-5000瓶时进入下一步；4、将步骤3中培养的试管芽苗，剪切，按步骤2接种于经消毒的含有壮苗培养基的玻璃瓶中，进行壮苗培养，30天后进入下一步；5、将步骤4中的试管壮苗，去掉基部愈伤组织和部分叶片，留4-5片叶片，按步骤2接种于经消毒的含有生根处理产生根原基培养的培养基的玻璃瓶中，进行生根培养7-12天；6、将步骤5中生长的带有根原基的无根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭黄心土=1:1(体积比)的基质中，浇透水，保持温度25-28°C，相对湿度85%以上，遮光(前10天)75%,后逐渐见光，25天后生根成活，生根率达86%以上，40-50天，全光照，可实现花叶夹竹桃的工厂化生产。实施例2.花叶夹竹桃的组织培养所用的基本培养基配方如表3表3每升基本培养基中含有如下物质种类和质量:<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>启动培养基每升基本培养基+TDZ0.5mg+BA1.5mg+IBA0.lmg;增殖培养基每升基本培养基+ZT1.5mg+BA2.0mg+IBA0.2mg+Charcoal2000mg;壮苗培养每升基本培养基+ZT1.Omg+BA1.Omg+IBA0.3mg+Charcoal2000mg;生根处理产生根原基培养每升基本培养基+NAA0.5mg+IBA0.5mg+Charcoal3000mg。其它步骤同实施例1.权利要求1.一种花叶夹竹桃的组织培养方法，其特征是它基本上由下列步骤组成步骤1采用经选育的花叶夹竹桃优良单株腋芽茎段或茎尖为外植体，经70％酒精消毒30秒，再用0.1％的升汞溶液消毒，(一般8-10分钟)，用无菌水冲洗3-5次；步骤2在超净的工作台上，无菌条件下，将消毒的外植体接种在经消毒的含有启动培养基的玻璃瓶中，将其置于普通日光灯为光源、光照强度为1500-20001x下，每日照光14小时，温度22-27℃、湿度为50％-65％，培养40天，分化长成试管芽苗，所述的启动培养基为每升基本培养基加噻苯隆(TDZ)0.1-0.5毫克、6-苄基嘌呤(BA)1.0-1.5毫克和吲哚丁酸(IBA)0.02-0.1毫克；步骤3将从步骤2中长成的芽苗，剪切，按步骤2转接于经消毒的含有增殖培养基的玻璃瓶中，进行增殖培养，不断增殖，视繁殖生产规模需要达2000-5000瓶时进入下一步，所述的增殖培养基为每升基本培养基加玉米素0.5-1.5毫克、6-苄基嘌呤1.0-2.0毫克、吲哚丁酸0.05-0.2毫克和活性炭(Charcoal)1000-2000毫克；步骤4将步骤3中培养的试管芽苗，剪切，按步骤2接种于经消毒的含有壮苗培养基的玻璃瓶中，进行壮苗培养，30天后进入下一步，所述的壮苗培养基为每升基本培养基加玉米素0.2-1.0毫克、6-苄基嘌呤0.5-1.0毫克、吲哚丁酸0.1-0.3毫克和活性炭(Charcoal)1000-2000毫克；步骤5将步骤4中的试管壮苗，去掉基部愈伤组织和部分叶片，留4-5片叶片，按步骤2接种于经消毒的含有生根处理产生根原基培养的培养基的玻璃瓶中，进行生根培养7-12天，所述的生根处理产生根原基培养的培养基为每升基本培养基加α-萘乙酸(NAA)0.2-0.5毫克、吲哚丁酸0.4-0.8毫克和活性炭(Charcoal)2000-3000毫克；步骤6将步骤5中生长的带有根原基的无根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭∶黄心土＝1∶1(体积比)的基质中，浇透水，保持温度25-28℃，相对湿度85％以上，遮光(前10天)75％，后逐渐见光，25天后生根成活，生根率达86％以上，40-50天，全光照。2.根据权利要求l所述的花叶夹竹桃的组织培养方法，其特征是所述的基本培养基的配方见表l:表l:每升基本培养基中含有如下物质种类和质量:<table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>全文摘要一种花叶夹竹桃的组织培养方法，采用经选育的花叶夹竹桃优良单株腋芽茎段为外植体，经消毒后，接种在经消毒的含有启动培养基的玻璃瓶中，将其置于普通日光灯为光源，每日照光14小时，温度22-27℃、湿度为50％-65％，培养40天，分化长成试管芽苗，长成的芽苗，剪切，转接于经消毒的含有增殖培养基的玻璃瓶中，进行增殖培养，不断增殖，剪切后接种于经消毒的含有壮苗培养基的玻璃瓶中，进行壮苗培养，30天后去掉基部愈伤组织和部分叶片，留4-5片叶片，接种于经消毒的含有生根处理产生根原基培养的培养基的玻璃瓶中，进行生根培养7-12天，取出清洗，移栽到含有泥炭∶黄心土＝1∶1(体积比)的基质中，25天后生根成活，生根率达86％以上。文档编号A01H4/00GK101406157SQ200810236240公开日2009年4月15日申请日期2008年11月27日优先权日2008年11月27日发明者史云光,史青云,巫建新,张方亮,徐招弟,艳朱,汤荣弟,王福银,蒋泽平,鲍荣静申请人:江苏农林职业技术学院绿苑实业总公司