专利名称：：一种天南星植物和微生物组合杀螺剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种用于消灭钉螺的灭螺剂，特别是指将一种从天南星植物块茎中提取的富含甾体皂甙和草酸钙针晶物质与紫红链霉菌稀释液组合用于杀灭水陆两栖钉螺的一种植物和微生物组合杀螺剂。
背景技术：
：血吸虫病是严重危害人民身体健康和生命安全、影响经济社会发展的重大传染病。钉螺是血吸虫的唯一宿主，消灭了钉螺是血吸虫病流行国家防治血吸虫病的重要策略和措施。目前，化学灭螺剂在中国仍然是主要的灭螺药物，然而，从多年的灭螺经验看，单靠化学灭螺很难阻断血吸虫病的转播。如目前使用的氯硝柳胺是世界卫生组织(WHO)自1972年以来唯一推荐使用的化学灭螺药物，灭螺效果很好，但其存在致命弱点，即对两栖类动物和鱼类的毒性强，在有效灭螺浓度下，可引起两栖类动物和鱼类大量死亡，因此氯硝柳胺的使用受到限制，不能在鱼、蟹等养殖区使用；同时，在浸杀钉螺时钉螺有上爬现象，从而导致灭螺效果的降低。所以，冊0推荐开发使用植物灭螺剂，但至今还没有开发出一种能推广使用的植物灭螺药。其原因是植物如夹竹桃、羊蹄等对钉螺虽然具有缓慢而持久的毒杀作用，但要求的浓度较高，还未能解决钉螺上爬等问题。为了克服上述各自不足，我们将植物和微生物组合使用灭螺。通过试验发现，不同的植物具有不同的协同或诘抗作用，其中发现天南星er"Z7esce/3sSchott)具有很强的灭螺效果，与我们当前筛选的杀螺很强的夹竹桃相当。且发现和微生物链霉菌10倍稀释复配灭螺，其效果比夹竹桃和链霉菌复配效果好，0.1%浓度的复合灭螺效果相当于单一成分天南星1%浓度和原菌液的灭螺效果，具有很好的协同作用，灭螺的浓度低，且解决了钉螺上爬问题，在24小时内没有钉螺上爬。天南星是广泛生长于热带亚热带地区林下的一种耐阴植物，极易移栽和繁殖，这对生态工程灭螺林下的配种具有重要作用。它和链霉菌复合具有很好增效灭螺作用，对有效控制钉螺的繁衍和血吸虫病的流行具有重要意义。jfe明内容本发明的目的是寻找效果更好的新生物灭螺剂，提出了一种用天南星和链霉菌制备的组合杀螺剂及其制备方法。本发明是这样实现的，组合杀螺剂其配方为；1、比重为l.1—1.15的天南星浓縮液1-5%2、链霉菌液原液(含菌量为5xl08个/ml)1-1.5%，3、氮酮(农药级，》95%)0.5-1%4、其余为水以上为体积比，搅拌均匀后即为本发明组合杀螺剂。所述的天南星浓縮液的制备1)采集天南星新鲜块茎，用清水洗净；2)将上述原料加适量水搅碎机粉碎，再用水浸泡48小时，过滤；3)虑渣用5倍水提取，过滤，提取3次后去除滤渣；4)合并滤液即得到含甾体皂甙和碳酸钙针晶活性滤液，将滤液在旋转蒸发仪上于60-8(TC减压浓缩成比重为1.l一l.15浓縮液。所述的链霉菌液的配制1)将紫红链霉菌菌种接种到高氏合成1号琼脂平板或斜面培养基上作平板或斜面增菌培养，26—30。C培养，避光，48—96小时；2)菌液摇瓶发酵培养用消毒300ml三角瓶，装120ral摇瓶发酵培养液，取0.5—lcm2扩平板或斜面增菌活化菌株，纱布棉塞封瓶口，摇瓶转速120—180转/分，26—28'C，72—96小时，即得具有杀螺作用的紫红链霉菌菌液。组合杀螺剂的使用方法使用时，所述的组合杀螺剂加约10倍的水搅匀，用喷雾器于洲滩、塘堰、稻田、沟渠两旁孳生地喷洒灭螺。本发明的另一配方是天南星正丁醇相与链霉菌组合可湿性灭螺粉剂，其组成为1、天南星正丁醇提取物可湿性粉剂；2、链霉菌原液的干燥粉剂；3、氮酮(农药级，》95%)0.5-1%以上1和2按1-5:1的质量比配比，加适量水溶解，氮酮按总体积含量为0.5-196的量加入。搅拌均匀后即为本发明组合杀螺粉剂。所述的天南星正丁醇相可湿性粉剂的制备1)用天南星块茎洗净，粉碎机粉碎，再用水浸泡48小时，过滤，得到含甾体皂甙活性滤液；2)上述滤液再用正丁醇萃取得到正丁醇相；3)蒸馏回收正丁醇；4)在旋转蒸发仪上于60-8(TC减压浓縮、干燥，或用冷冻干燥法冻干，也可用喷雾千燥机于100-ll(TC条件下瞬间喷雾干燥，即得具有杀螺活性的天南星正丁醇提取物可湿性粉剂；所述的链霉菌液的配制同上，链霉菌液用冷冻干燥法冻干，得链霉菌原液的干燥粉剂；天南星正丁醇相与链霉菌组合可湿性灭螺粉剂的使用方法使用时将天南星正丁醇相与链霉菌组合可湿性灭螺粉剂加水溶解稀释，浓度为40-100mg/L的水悬浮液。该水悬浮液用喷雾器于洲滩、塘堰、稻田、沟渠两旁孳生地喷洒灭螺。综上所述利用天南星和链霉菌组合可湿性杀螺剂，具有以下优点1.资源丰富天南星在全国除部分干旱等地区外广为分布，且繁殖容易，可种子和块茎繁殖，目前全国已有天南星作为药材的生产基地，所以取材容易。2.运输方便本发明杀螺剂较为稳定，便于生产、储存、运输和使用。3.符合环保要求该产品杀螺效果持续稳定，对环境无污染，对人蓄和鱼类无的毒害，符合环保要求4.成本低廉该产品综合成本低于化学合成灭螺制剂，经济效应、社会效应和生态效应明显。本发明按WHO"杀螺剂实验室终筛方法"中的浸泡法进行杀螺试验。结果表明，其中可湿性粉剂杀灭钉螺的作用与氯硝柳胺相比，可湿性粉剂可有效抑制钉螺的上爬，防止其逃逸杀伤。具体实施方式实施例1取天南星新鲜块茎5kg，按天南星浓缩液的制备流程制备，得天南星浓縮液5000mL;链霉菌按链霉菌原液制备流程制备1000mL和另取氮酮各1000mL;其余为水。所有组份按组合配方配制天南星与链霉菌组合杀螺剂。实施例2天南星新鲜块茎10kg，按天南星正丁醇相的制备流程制备，得天南星正丁醇提取物可湿性杀螺干粉2.72kg,使用时将粉剂加适量水溶解;另取链霉菌原液和氮酮各1000mL;其余为水。所有组份按组合配方配制天南星与链霉菌组合杀螺剂。应用实施例参见附件1，对鱼类的影响参见附件2，链霉菌的接种和培养见附件3。附件1本发明灭螺试验(复试)的试验报告实验例1实验采用浸泡法。实验在温度控制在(20±1)°C条件下进行。取活钉螺100只为一组，每20个装入一个尼龙网袋中，分别将各组(每组3袋或5袋)钉螺浸入盛有lOOOml不同浓度的天南星单一成分及本发明组合杀螺剂水溶液的玻璃缸中，另设氯硝柳胺水溶液和无氯清水对照。处理ld、2d、3d后，将各处理中的钉螺随机取出1袋，用无氯水冲洗数次，再放入清水中静置1天，然后作存活检査开庵爬行者为活螺，余下的用敲碎和解剖卸剌的方法，鉴别死活。实验重复3次，取其平均值作为实验结果(见表1)。表1本发明杀螺效果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>用不同浓度的天南星块茎水提取物处理钉螺，在不同时间的处理下，钉螺死亡率随处理浓度的增加，钉螺死亡率呈上升趋势。而在与链霉菌稀释液(原液稀释10倍)组合杀螺处理中，钉螺死亡率显著上升。与其单一成分相比，组合杀螺效果明显高于单一成分效果，如0.1%浓度组合在处理ld后，钉螺死亡率达到90%以上，是单一成分同等浓度杀螺效果的4-5倍，相当于单一成分1%浓度的灭螺效果。组合杀螺表现出明显的协同杀螺作用(C(组合，A+B)。因此，本组合发明明显提高了杀螺效率和降低了天南星的用药量。实验例2实验采用浸泡法。实验在温度控制在(20±1)°C条件下进行。取活钉螺100只为一组，每20个装入一个尼龙网袋中，分别将各组(每组5袋)钉螺浸入盛有1000ml不同浓度的天南星正丁醇提取物单一组分及其本发明的正丁醇提取物与链霉菌组合杀螺剂水溶液的玻璃缸中，另设氯硝柳胺水溶液和无氯清水对照。于处理ld、2d、3d、4d和5d后，将各处理中的钉螺随机取出1袋，用无氯水冲洗数次，再放入清水中静置1天，然后作存活检査开庵爬行者为活螺，余下的用敲碎和解剖卸刺的方法，鉴别死活。实验重复3次，取其平均值作为实验结果(见表1与表2)。表1天南星正丁醇提取物(mg/L)和链霉菌稀释液(107个/mL)配伍灭螺效果(％)浓度及杀螺效果(％)__复合处ld2d3d4d5d_^_清水0氯硝賴卩74.8胺11.3B6.74016.48026.620028.740020.340+B30.880+B48.6200+B56.3400+BB表示菌液用不同浓度的天南星块茎正丁醇提取物单一成分及其组合杀螺剂处理钉螺，在不同时间的处理下，钉螺死亡率规律仍然表现出随处理浓度的增加，钉螺死亡率呈上升趋势。但本发明的组合杀螺剂处理钉螺中，钉螺死亡率显著上升。与其单一成分相比，组合杀螺效果明显高于单一成分效果，即组合杀螺表现出明显的协同杀螺作用(C(组合)〉A+B)。因此，本组合发明明显提高了杀螺效率。表2氯硝柳胺是普遍使用的化学灭螺剂，将本发明的灭螺效果与之对照，可知80mg/L本发明复合杀螺剂水溶液与lppm氯硝柳胺溶液的灭螺效果相当。不过本发明药明药效较氯硝柳胺略慢。用lppm氯硝柳胺溶液处理钉螺3天可达100%的死亡率，用80mg/L的本发明水溶液处理需要4天才能达到同样的效果。000093.610010010020.333.346.678.626.730.651.367.623.333.757.871.940.863.387.394.460.710010010051.067.887.696.778.59410010086.310010010096.6100100100表2天南星正丁醇提取物(mg/L)和链霉菌稀释液(107个/mL)配伍灭螺效果(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>附件2本发明的鱼类毒性试验1.鱼类的急性毒性试验将鱼苗(鲫鱼)放入四个浓度(40mg/L、80mg/L、200mg/L、400mg/L)的本发明水溶液中，每天观察鱼苗的反应，无异常现象发生，400mg/L游动也很轻快，72小时后统计鱼苗无死亡，再观察48小时后，仍无异常和死亡现象。2.鱼类慢性毒性试验将所买鱼苗(鲫鱼)放入本发明复合水剂的四个浓度(40mg/L、80mg/L、200mg/L400mg/L)和一个清水对照的处理中，30天后分别测量鱼的体长、称鱼的体重，进统计分析。所得数据及统计分析见下表<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>在2对照组和处理组的鲫鱼鱼苗体重的方差分析<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>从以上的方差分析可知，F<F。.Q5，F<F。.<n，对照组和各浓度组饲养鱼的无显著差异:,可见本发明水溶液对鲫鱼的体重增长无显著影响。表3鲫鱼鱼苗饲养30天后的体长(cm)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表4对照组和处理组鲫鱼鱼苗体长的方差分析<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>以上方差分析可知，F<F。.。5，F<F。.D1，处理组和对照组的鲫鱼鱼苗体长无显著差异，也就是说四个浓度的本发明水溶液对鲫鱼鱼苗的生长也无显著影响。在上述四个浓度的本发明水溶液中对鲤鱼鱼苗的饲养也无显著影响。通过实验数据和方差分析，结果表明在对钉螺有较强杀灭效果的不同浓度本发明中词养鲫鱼一个月后，对鲫鱼鱼苗的生长发育均无显著影响。附件3.菌种培养将紫红链霉菌菌种接种到高氏合成1号琼脂平板或斜面培养基上作平板或斜面增菌培养，26—30'C培养，避光，48—96小时；菌液摇瓶发酵培养用消毒300ml三角瓶，装120ml摇瓶发酵培养液，取0.5—lcm2扩平板或斜面增菌活化菌株，纱布棉塞封瓶口，摇瓶转速120—180转/分，26—28'C，72—96小时；得具有杀螺作用的紫红链霉菌菌液；上述高氏合成1号琼脂平板或斜面培养基是将可溶性淀粉8—12g、燕麦粉8—10g、硝酸钾1—2g、磷酸氢二钾0.5—lg、硫酸镁0.5—0.8mg、氯化钠0.5—0.8g、硫酸亚铁8—12mg、琼脂18—22g及水1000ml耐混合；摇瓶发酵培养液是将可溶性淀粉、蔗糖、碳酸钙、磷酸氢二钾0.5—lg、硫酸镁0.5—0.8mg、氯化钠0.5—0.8g、燕麦粉8—10g、玉米粉、硫酸按、酵母粉、植物油、及水1000ml混合；将上述高氏合成1号琼脂平板或斜面培养基和摇瓶发酵培养液用氢氧化钠或碳酸氢钠调pH7.27.4,110—13FC灭菌20—30min,冷却后至室温备用。权利要求1、一种天南星植物和微生物组合杀螺剂，其特征在于其配方为a)、比重为1.1—1.15的天南星浓缩液1-5％，b)、链霉菌液原液(含菌量为5×108个/ml)1-1.5％，c)、氮酮(农药级，≥95％)0.5-1％，d)、其余为水，以上为体积比，搅拌均匀后即为本发明组合杀螺剂。2、一种天南星植物和微生物组合杀螺粉剂，其特征k于其配方为a)、天南星正丁醇提取物可湿性粉剂；b)、链霉菌原液的干燥粉剂；c)、氮酮(农药级，》95%)0.5-1%以上a)和b)按1-5:l的质量比配比，加适量水溶解，氮酮按总体积含量为0.5-1%的量加入。搅拌均匀后即为本发明组合杀螺粉剂。全文摘要本发明提出了一种用天南星和链霉菌制备的组合杀螺剂，其配方为1.比重为1.1-1.15的天南星浓缩液1-5％，2.链霉菌液原液(含菌量为5×10<sup>8</sup>个/ml)1-1.5％，3.氮酮(农药级，≥95％)0.5-1％，4.其余为水。以上为体积比，搅拌均匀后即为本发明组合杀螺剂。本发明的另一配方是天南星正丁醇相与链霉菌组合可湿性灭螺粉剂，其组成为1.天南星正丁醇提取物可湿性粉剂，2.链霉菌原液的干燥粉剂，3.氮酮(农药级，≥95％)0.5-1％。以上1和2按1-5∶1的质量比配比，加适量水溶解，氮酮按总体积含量为0.5-1％的量加入。搅拌均匀后即为本发明组合杀螺粉剂。本发明原料资源丰富，成本低廉，杀螺效果持续稳定，符合环保要求。文档编号A01N65/40GK101455212SQ200810246309公开日2009年6月17日申请日期2008年12月31日优先权日2008年12月31日发明者杨金莲,柯文山,马安宁申请人:湖北大学