专利名称：一种优质抗螨蜜蜂蜂种的选育方法
技术领域：
本发明属于蜜蜂育种领域，涉及一种优质抗螨蜜蜂蜂种的选育方法。
背景技术：
蜂螨是蜜蜂最主要的寄生病虫害之一，它靠吸吮蜜蜂幼虫、蜜蜂蛹以及成年蜂的 体液为食。受蜂螨危害的蜂群，蜂群群势迅速削弱，幼虫早期死亡，出房的蜜蜂无翅或翅不 全，使蜂群中蜜蜂数量下降，采集蜂也逐渐减少，从而导致蜂群生产力、生命力同时下降。又 由于蜂螨的繁殖率极高，在普遍的蜂群中形成了恶性的生物断链循环，可以导致蜂群的最 后灭亡。全球中90%以上意蜂均有不同程度的蜂螨病。为了及时控制和治疗蜂螨，几十年来，养蜂从业人员大都采用药物防治，但药物防 治有如下危害(1)蜂螨对治螨药物易产生抗性，降低了蜜蜂群体质量，同时导致其他蜂病 如爬蜂病等相继出现；(2)药物治螨只能把蜂螨控制在低水平，养蜂者必须每年用药物治 螨2-3次，不仅需要资金，还浪费劳动力和时间；(3)药物治螨容易对蜂产品的造成污染，特 别引起国际市场对我国蜂产品药物残留的过度关注，导致增加了贸易壁垒和技术壁垒。中华蜜蜂是蜂螨的原始寄主，对蜂螨有较强的抗性。利用营养杂交技术结合常规 的育种方法来选育优质抗螨蜂种是从根本上解决蜂螨危害的有效途径。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是针对上述药物不能从根本上解决蜂螨问题，提供 一种利用营养杂交、配子选育、人工受精、自然交尾配套育种技术来选育优质高产抗螨蜂种 方法。本发明的技术方案是
通过配子选育技术与人工受精技术定向选育高产蜂王浆的意大利蜜蜂和抗螨性强的 中华蜜蜂。利用中蜂与意蜂营养杂交技术和自然交尾方法培育意蜂蜂王。杂交数代后，培 育出优质抗螨意蜂蜂种。再通过蜜蜂育种常规指标检测技术、现代分子生物学技术和生化 检测技术等来选育一个抗螨的意蜂新品种。具体步骤是
1)育种素材的选定根据蜜蜂生物学与遗传育种特性的要求，按照抗螨性、生产力、生 命力等系列指标，我们筛选出蜂王浆产量较高的“江山2号”意蜂和产蜜性能优越的法国纯 种意蜂以及抗螨性能优越的健康本地中华蜜蜂蜂种为引种对象。2)抗螨蜂种的选育先利用配子选育原理从江山2号中选育出种用雄蜂，然后遵 照蜜蜂生物学与遗传育种特性的要求选育出江山2号处女蜂王，与选育出的种用雄蜂进行 人工受精杂交，形成生产性能、抗病性能较强的江山2号蜂种作为父本。以从法国引进的产 蜜性能优越的纯种意蜂为母本。选择抗螨性能较强的健康中蜂，采集其新鲜蜂王浆，"200C 保存备用。3)从春繁开始，每隔7天检查割除法国意蜂雄蜂蛹，直至育种结束。制作蜡质意 蜂王台放入中蜂群清理12h。移中蜂幼虫，产浆3天后，在不破坏王浆的情况下去除中蜂幼虫，移入法国意蜂一日龄幼虫。放入中蜂群继续哺育10-12h后移出，放入江山2号强群，每 天用注射器往王台中人工注射50ul新鲜中蜂蜂王浆，直至封盖。营养杂交子一代蜂王出房 后与江山2号雄蜂自然交尾并产卵，组成新的蜂群，检测其工蜂自然蜂螨寄居率。当工蜂自 然蜂螨寄居率大于5%时，取营养杂交子一代一日龄幼虫按上述育种方法培育子二代、子三 代、子四代营养杂交蜂种。并每隔7天割除子一代、子二代和子三代雄蜂蛹，直至工蜂自然 蜂螨寄居率小于5%为止。同理，以江山2号为母本、浙大A系为父本培育出“江浙意蜂”， 然后用同样的方法以“本江意蜂”母本、“江浙意蜂”为父本培育出“本江浙意蜂(Fl，Fi表 示第i代，下同)”。当在不用药物防治情况下，“本江浙意蜂(F1)”蜂群蜂螨感染率下降80% 时，再将“本江浙意蜂(F1)”进行姐妹杂交进行基因固定，以此方式，每代进行姐妹杂交固 定，经过四代的横向固定和继代繁殖，当基因不再发生变化时，即形成一个遗传稳定的蜜蜂 品系——优质抗螨高产蜂种。本发明，可以为蜂农解决蜂螨对蜂群的危害，提高蜂群的繁殖速度和蜂产品的产 量禾口质量。
图1为Nei，s的UPGMA法聚类图； 图2为育种技术流程图3为育种技术路线图。
具体实施例方式育种素材的选定根据蜜蜂生物学与遗传育种特性的要求，按照抗螨性、生产力、 生命力等系列指标，我们筛选出蜂王浆产量较高的“江山2号”意蜂和产蜜性能优越的法国 纯种意蜂以及抗螨性能优越的健康本地中华蜜蜂蜂种为引种对象。抗螨蜂种的选育先利用配子选育原理从江山2号中选育出种用雄蜂，然后遵照 蜜蜂生物学与遗传育种特性的要求选育出江山2号处女蜂王，与选育出的种用雄蜂进行人 工受精杂交，形成生产性能、抗病性能较强的江山2号蜂种作为父本。以从法国引进的产蜜 性能优越的纯种意蜂为母本。选择抗螨性能较强的健康中蜂，采集其新鲜蜂王浆，_20°C保 存备用。从春繁开始，每隔7天检查割除法国意蜂雄蜂蛹，直至育种结束。制作蜡质意蜂王台放入中蜂群清理12h。移中蜂幼虫，产浆3天后，在不破坏王浆的情况下去除中蜂幼虫， 移入法国意蜂一日龄幼虫。放入中蜂群继续哺育10-12h后移出，放入江山2号强群，每天 用注射器往王台中人工注射50ul新鲜中蜂蜂王浆，直至封盖。营养杂交子一代蜂王出房后 与江山2号雄蜂自然交尾并产卵，组成新的蜂群，检测其工蜂自然蜂螨寄居率。当工蜂自 然蜂螨寄居率大于5%时，取营养杂交子一代一日龄幼虫按上述育种方法培育子二代、子三 代、子四代营养杂交蜂种。并每隔7天割除子一代、子二代和子三代雄蜂蛹，直至工蜂自然 蜂螨寄居率小于5%为止。同理，以江山2号为母本、浙大A系为父本培育出“江浙意蜂”， 然后用同样的方法以“本江意蜂”母本、“江浙意蜂”为父本培育出“本江浙意蜂(Fl，Fi表 示第i代，下同)”。当在不用药物防治情况下，“本江浙意蜂(F1)”蜂群蜂螨感染率下降80% 时，再将“本江浙意蜂(F1)”进行姐妹杂交进行基因固定，以此方式，每代进行姐妹杂交固定，经过四代的横向固定和继代繁殖，当基因不再发生变化时，即形成一个遗传稳定的蜜蜂 品系一优质抗螨高产蜂种。遗传育种检测
①优质抗螨高产蜂种形态指标及初生重测定本地浆蜂、法国意蜂、本地中华蜜蜂、营养杂交F1、F2、F3和F4代的形态测定工作。通过标准方法测定指标为吻长、右前翅长度、右 前翅宽度、第三腹节背板长度、肘脉指数、翅钩数等六外部形态指标及初生重。②优质抗螨高产蜂种生化特性研究以本地浆蜂、法国意蜂、本地中华蜜蜂和营养 杂交Fl、F4代工蜂为材料，应用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳技术检测工蜂苹果酸脱氢酶 II的基因型、基因型频率、基因频率、杂合度和纯合度。③优质抗螨高产蜂种微卫星DNA遗传多样性分析以本地浆蜂、法国意蜂、本地中 华蜜蜂和营养杂交Fl、F4代工蜂为实验材料，运用微卫星DNA遗传多样性分析技术检测以 上蜜蜂的DNA多态性。④优质抗螨高产蜂种繁殖率、蜂螨寄生率和卫生行为测定以本地浆蜂、法国意蜂 和营养杂交F1、F4代蜂群为材料，检测各个蜂种的繁殖率，蜂螨寄生率和卫生行为。⑤优质抗螨高产蜂种抗农药性能测定以本地浆蜂、法国意蜂和营养杂交F4代蜂 群为材料，通过农药摄入法检测以上蜜蜂的抗农药特性。⑥实验蜂群生产力的测定在生产季节，定时定群记录每组蜂群的蜂蜜及蜂王浆产量。⑦蜂蜜、蜂王浆的质量检测用抗螨意蜂生产出来的蜂蜜、蜂王浆质量是否符合国 家标准，取样送往农业部蜂产品检测中心进行水分、蛋白质、蔗糖、癸希酸等指标分析。通过本发明选育的蜂种与亲本蜂种对比如下 1、营养杂交子四代工蜂和亲本蜂种形态指标对比
注表中相同指标上标字母相同表示差异不显著0°>0. 05)，不同字母表示显著 (P<0. 05)。下同。结果营养杂交子三代工蜂在吻长、右前翅长度、右前翅宽度、右后翅翅钩数和肘 脉指数均有向中蜂性状靠拢的趋势，且营养杂交子四代工蜂的上述五个形态指标均小于亲 本江上2号和法国意蜂，差异显著0°<0.05)，也显著大于中蜂；营养杂交子四代工蜂的第 3腹节背板长指标大于江山2号、法国意蜂和中华蜜蜂，差异显著(P<0. 05)。2、营养杂交工蜂抗螨性对比
结果营养杂交蜂群工蜂幼蜂蜂螨寄居率、工蜂封盖子蜂螨寄居率和雄蜂封盖子蜂螨 寄居率显著高于亲本江山2号，且随营养杂交代数的增加，抗螨性也显著增强。3、营养杂交工蜂卫生行为能力对比
结果工蜂卫生行为能力也显著高于江山2号，且随营养杂交代数的增加，抗螨性也显 著增强。4、营养杂交子四代工蜂春季繁殖率对比单位10 个
结果营养杂交Fl和F4代蜂群春季繁殖率均显著高于亲本江山2号与中华蜜蜂，且F4 代显著高于Fl代蜂群。5、营养杂交蜂群生产性能对比单位箱/次
结果营养杂交Fl和F4代蜂群蜂蜜和王浆产量均高于本地浆蜂和中华蜜蜂，且F4代 王浆产量高于Fl代蜂群。6、遗传距离和聚类分析结果 实验数据如下
表ISSR扩增计算的Nei' s遗传距离 Tablel ThegeneticdistanceofSSR
结果由表一可知营养杂交子1代与子4代在遗传距离上向中蜂靠拢。图1表明营 养杂交子1代与子4代聚为一类，再与母本法国意蜂聚为一类，然后与父本江山2号聚为一 类，最后与中华蜜蜂聚为一类，这一结果和5个蜂种遗传进化关系上也是一致的。由此可 见，中意蜂营养杂交对意蜂的结构基因变异产生了极大的影响。本发明，可以为蜂农解决蜂螨对蜂群的危害，提高蜂群的繁殖速度和蜂产品的产 量和质量，大大提高蜂农的经济收入和养蜂积极性，促进中国蜂业发展的良性循环，为加快 解决“三农”问题做出重要贡献。本发明实施，打破国外蜂螨技术封锁，全国每年至少可节约治螨成本数千万元；同 时将大大减少蜂产品污染，提高蜂产品质量，提升中国蜂产品的市场核心竞争力。通过抗 螨蜂种的推广应用，全面提高全国养蜂业的经济效益，预测可直接增加蜂业产值5000万以 上。
权利要求
一种优质抗螨蜜蜂蜂种的选育方法，其特征在于包括以下步骤a)育种素材的选定按照抗螨性、生产力、生命力等系列指标，筛选出蜂王浆产量较高的“江山2号”意蜂和产蜜性能优越的法国纯种意蜂以及抗螨性能优越的健康本地中华蜜蜂蜂种为引种对象；b)抗螨蜂种的选育先从江山2号中选育出种用雄蜂，然后遵照蜜蜂生物学与遗传育种特性的要求选育出江山2号处女蜂王，与选育出的种用雄蜂进行人工受精杂交，形成生产性能、抗病性能较强的江山2号蜂种作为父本；以从法国引进的产蜜性能优越的纯种意蜂为母本；选择抗螨性能较强的健康中蜂，采集其新鲜蜂王浆，-20℃保存备用；c)从春繁开始，每隔7天检查割除法国意蜂雄蜂蛹，直至育种结束；制作蜡质意蜂王台放入中蜂群清理12 h；移中蜂幼虫，产浆3天后，在不破坏王浆的情况下去除中蜂幼虫，移入法国意蜂一日龄幼虫；放入中蜂群继续哺育10-12 h后移出，放入江山2号强群，每天用注射器往王台中人工注射50ul新鲜中蜂蜂王浆，直至封盖；营养杂交子一代蜂王出房后与江山2号雄蜂自然交尾并产卵，组成新的蜂群，检测其工蜂自然蜂螨寄居率；当工蜂自然蜂螨寄居率大于5%时，取营养杂交子一代一日龄幼虫按上述育种方法培育子二代、子三代、子四代营养杂交蜂种；并每隔7天割除子一代、子二代和子三代雄蜂蛹，直至工蜂自然蜂螨寄居率小于5%为止；同理，以江山2号为母本、浙大A系为父本培育出“江浙意蜂”，然后用同样的方法以“本江意蜂”母本、“江浙意蜂”为父本培育出“本江浙意蜂”；当在不用药物防治情况下，“本江浙意蜂”蜂群蜂螨感染率下降80%时，再将“本江浙意蜂”进行姐妹杂交进行基因固定，以此方式，每代进行姐妹杂交固定，经过四代的横向固定和继代繁殖，当基因不再发生变化时，即形成一个遗传稳定的优质抗螨高产蜂种。
全文摘要
一种优质抗螨蜜蜂蜂种的选育方法，其特征在于包括以下步骤1)育种素材的选定按照抗螨性、生产力、生命力等系列指标，筛选出蜂王浆产量较高的“江山2号”意蜂和产蜜性能优越的法国纯种意蜂以及抗螨性能优越的健康本地中华蜜蜂蜂种为引种对象；2)抗螨蜂种的选育先从江山2号中选育出种用雄蜂，然后遵照蜜蜂生物学与遗传育种特性的要求选育出江山2号处女蜂王，与选育出的种用雄蜂进行人工受精杂交，形成生产性能、抗病性能较强的江山2号蜂种作为父本；以从法国引进的产蜜性能优越的纯种意蜂为母本；3)从春繁开始，每隔7天检查割除法国意蜂雄蜂蛹，直至育种结束。本发明可以为蜂农解决蜂螨对蜂群的危害，提高蜂群的繁殖速度和蜂产品的产量和质量。
文档编号A01K67/033GK101849529SQ20101018151
公开日2010年10月6日 申请日期2010年5月25日 优先权日2010年5月25日
发明者何旭江, 曾志将, 汪志平, 陈利华 申请人:兰溪市鸿香生物科技有限公司;江西农业大学蜜蜂研究所