专利名称：山苍子无性快繁育苗方法
技术领域：
本发明属于植物无性快繁技术领域，涉及山苍子无性快繁育苗方法。
背景技术：
山苍子(Litsea Cubeba (Lour.)又名山鸡椒、木姜子、过山香，为樟科 (Lauraceae)木姜子属(Litsea Lam)，是珍贵芳香油料小乔木，其花、叶、果和树皮可蒸馏提取山苍子油，成熟的果实含油量最高。山苍子油中含有柠檬醛、高级醇、有机酸，柠檬醛含量高达70 %，是配制香精、香料和合成维生素A、E的主要原料，还可直接用于杀虫灭菌，一直是我国出口创汇最大的天然植物精油。山苍子主要分布于我国浙江、福建、湖南、湖北、江西、广东、广西、云南、贵州、台湾等省(区)，印度、印度尼西亚、马来西亚等国也有分布，主要生长在阳坡、采伐迹地、火烧迹地、荒山灌丛和稀疏林中。山苍子是一种将生态、经济、社会效益高度统一的树种，因其具有很高的经济价值。目前，我国的山苍子大部分仍处于野生状态，加工的山苍子85%以上采自野果，并且多以毁灭性的砍树为主要采摘方式，这不仅严重破坏了生态平衡，还对山苍子资源的继续利用造成极坏的影响，导致资源枯竭和产量下降，使山苍子油在目前供不应求。山苍子适应性广，耐瘠薄，截水围土性能好，可用来治理疏林地水土流失。传统栽培主要用种子繁殖，不仅种子发芽率低，优良性状遗传也不稳定，严重地影响着山苍子油的产量质量。无性繁殖是稳定保持遗传母本优良性状的有效育苗方法，通过植物组织培养法来快速获得整齐一致的山苍子苗木。山苍子无性繁殖育苗新技术， 是以果实高产的山苍子优良无性系组培继代芽，研究其瓶外扦插生根芽技术，以及组培苗幼态枝扦插育苗技术，成功的培育出完整植株，拟为山苍子人工林良种化、无性系化发展提供科技支撑。关于山苍子无性繁殖的已有技术摘录如下一、马崇坚、胡嘉凯，山苍子不同外植体的组织培养，林业科技，第30卷，第4期， 2005年。取当年生健壮、无病虫害的山苍子野生植株，剪取直径0. 3 0. 5cm的半木质化枝条，以嫩、嫩叶和比较粗壮的茎作为培养材料。将采得的材料先用自来水清洗干净，浸泡 10 15min，再用70 %酒精消毒20min，然后用0. 1 % HgCl，常规灭菌10 15min，无菌水冲洗4 5次。把茎切成的小段，芽和茎分两种方式接种一部份横放接种在培养基上，另一部份垂直插入培养基。叶则整片放入培养基，不切开。各培养材料均接种于MS+6-BA 2. Omg/L+2. Orag/L 2. 4_D培养基附加3. 0%糖及0. 7%的琼脂)，培养温度为25 士 2°C，芽培养的光照为1500 2000Lx，光照时间12hid。叶片与茎先置于黑暗条件中进行愈伤组织诱导。山苍子芽的组织培养芽在接种3 10天后产生一部份褐变，有些渗透到培养基中，使培养基呈现不同程度的褐色。一般在接种5天左右，芽开始萌动；接种10天后，约四.4%的芽开始萌发；到接种25天左右，芽的萌发率达67. (见表)。随着时间的延长， 芽生长较快且旺盛，成活率也比较高。在芽生长的同时，茎基部亦逐渐膨大并形成愈伤组织，在愈伤组织产生过程中，首先看到的是外植体切口处出现愈伤萌动，接着膨大，切口由褐色变成透明状，表皮开始胀开。
山苍子芽的组织培养情况表
^Mtt接种开始 Wd有25 d有~ΙΓΓ~rww^总数.穿天y 效芽数效穿数濟导效眾
P SSS 1 25S7 67.t% ±9,0%二、雷明、李伟，山苍子无菌体系的优化，湖北民族学院学报(自然科学版)，200年 3月第沈卷第1期。材料野生植株；培养器皿采用塑料瓶I(330ml)、塑料瓶II(580ml)、三角瓶 050!111)、罐头瓶直径6.()(^)；封口材料为封口膜、五档透气盖，塑料瓶、封口膜、五档透气盖由北京市振泰园艺设施公司生产；外植体消毒剂为氯化汞(北京双环化学试剂厂)、酒
ρ； Ib ο养条件培接种后暗培养1 2周后转入光培养.培养温度为25士2°C，光1500 2000LUX，光照时间12h/d，进行愈伤组织与芽的诱导分化.方法材料消毒选择生长健壮、无病虫害的优良结实单株，取直径0. 3 0. 5cm 的半木质化枝条、茎、叶，用自来水冲洗干净、洗衣粉、消洗灵浸泡10 15min，流水冲洗 lh，取其带芽茎段于无菌条件下，用75%酒精消毒20s，再用0. 升汞处理6 lOmin， 无菌水冲洗5 6次，然后将材料切成1 2cm的小段供接种使用。各培养材料均接种于MS+6-BA210mg/L+210mg/L 214-D培养基(附加3. 0%糖及0. 7%的琼脂)。以茎为夕卜植体，参照上面条件，研究不同的培养器皿(塑料瓶I (330ml)、塑料瓶II (580ml)、三角瓶 O50ml)、罐头瓶(直径6. Ocm)和封口材料(封口膜、五档透气盖，塑料瓶、封口膜、五档透气盖)及封口材料使用次数对山苍子试管苗污染的影响。山苍子不同外植体的组织培养①山苍予芽的组织培养。在接种3 IOd后芽产生褐变，有些渗透到培养基中，使培养基呈现不同程度的褐色。在接种7d后，芽开始萌动；12d后，约27. 2%的芽开始萌发； 到接种22d时，芽的萌发率达57. 3%。同时，基部也逐渐膨大并形成愈伤组织，在愈伤组织产生过程中，首先看到的是外植体切口处出现愈伤萌动，切口褐色变成透明状，表皮开始胀开；②山苍子茎的愈伤组织诱导。山苍子茎段在接种IOd后才有茎段侧芽开始萌动， 同时外植体切口处膨大并出现白色愈伤组织；接种3 4周后，白色愈伤组织逐渐转成绿色小突起并逐渐分化出绿色小丛芽，诱导率高达43.0%。某些愈伤组织团块会产生一些淡黄色分泌物，这些淡黄色分泌物逐渐渗入培养基中，在愈伤组织和培养基接触的表面形成一个深色的区域，并向四周扩散，并随着培养时问的延长，愈伤组织团块产生的分泌物转变成棕色，最后这种愈伤组织很容易变渴并死亡；山苍子叶的愈伤组织诱导。在接种后10d，叶片则卷曲、增厚，但诱导速度比较慢，直到2 3周后，某些外植体由白色小点逐渐形成团状的愈伤组织，诱导率高达11.0%。叶褐变速度较茎和芽快。叶片的成活率比较低，且生长速嚏慢。在接种20d左右，叶片边缘开始出现颗粒状突起，星球形小点，继续培养后颗粒逐渐扩大。三、中国专利CN 10056;3431C，申请号200710170434. 6，诱导山苍子丛生芽的方
法。其特征在于包括如下步骤1)外植体灭菌选取山苍子干基部幼嫩枝条，去除叶片，清洗后故入质量浓度为3%的H2A中浸泡15 20分钟，取出立即转入含质量浓度为1 5%吐温-80的0. 1 % HgCl2溶液中浸泡10 20分钟，其间不断用软毛刷刷拭枝条，然后取出用无菌水冲洗5 6次并用灭菌吸水纸将水吸干，继而切取含节茎段作外植体，迅速接种在MS培养基上，放入暗处培养，第二天将外植体转接到新的MS培养基上；2)芽诱导将在MS培养基上不再褐化的外植体转入诱导培养基中，诱导培养基为 MS+6-BA0. 5 1. Omg/L+IBA 0. 1 0. 5mg/L+GA 1. 0 2. Omg/L+ 琼脂 7. Og/L+ 蔗糖 30g/ L，pH6. 0 ；培养温度为25士2°C，光照周期12 14h. d_l，光强度为1200 20001ux ；诱导培养21天后，获得诱导芽；3)芽增殖切取单个诱导芽，去除2/3叶片，切取含节的茎段接种到增殖培养基上，增殖培养基为 MS+6-BA 1. 0 2. 5mg/L+IBA 0. 2 0. 5mg/L+ 琼脂 7. Og/L+ 蔗糖 30g/L, pH6. 0 ；培养25 30天，获得增殖芽；4、将增殖芽重复步骤2、步骤3进行继代培养，获得健壮山苍子丛生芽。
发明内容
本发明的目的为了解决上述现有技术中存在的问题，开发山苍子优良无性系高效无性快繁技术，旨在提供山苍子无性快繁育苗方法。本发明的技术方案是利用植物细胞具全能性的特点，嫩枝在离体条件下，人为提供特定的环境条件及培养基进行培养形成完整植株的机理。以果实产量> 40kg的单株当年生嫩枝为外植体，在无菌条件下，人为提供适宜山苍子生长发育的环境条件和培养基培养继代芽；以组培继代芽为穗条，黄壤土为基质，生长素为促根剂处理穗条，通过愈伤组织生根而形成完整植株的方法。本发明是这样实现的一种山苍子无性快繁育苗方法，其特征在于以山苍子组培继代芽试管外生根，以山苍子优良无性系组培继代芽为插穗，山苍子优株组培继代芽试管外育苗或组培苗幼态枝扦插育苗的方法，培养山苍子继代芽扦插苗或山苍子组培苗幼态枝扦插苗，包括继代芽培养/建圃、基质、穗条处理和扦插、育苗和出圃操作工序，其操作步骤如下(1)继代芽培养/建圃以果实产量40kg >的单株当年生嫩枝为外植体，消毒接种获取无菌芽，将无菌芽转移到继代增殖培养基和继代壮苗培养基上进行增殖和壮苗培养；或以常规建立组培苗幼态枝扦插采穗圃；(2)基质基质经碎土机粉碎后装入8 X 12mm塑料容器内深30cm，扦插前1天用 0. 3 0. 5%高锰酸钾溶液消毒12 Mh，扦插前自来水清洗药物及淋透基质；(3)穗条处理/扦插以继代单芽为穗条，剪取生长健壮，高> 2cm的继代芽，末端节下Imm处剪切，保留3 4张叶片，置于生根溶液中处理15 30min后，垂直插入基质中， 深度芽长1/4 ；或采集生长健壮，呈半木质化或木质化的组培苗幼态枝，经过一定浓度促根剂的处理，于当年9月至次年的5月垂直插入基质内；(4)育苗搭建200cm高的遮荫棚，遮荫度75%，荫棚下建立50 60cm高密封的小拱棚，培育山苍子继代芽扦插苗或组培幼态枝扦插苗，自然散射光照射育苗；(5)出圃扦插苗生长高20cm以上时可出圃造林。以上所述的继代培养基和壮苗培养基，采用MSC (MS+Ca (NO3) 2380mg/L+H3B038. 2mg/L) +BA 1. 6mg/L+IAA 0.1m g/L+VC lOmg/L 为继代增殖培养基由， MSC(MS+Ca(NO3)2380mg/L+H3B038 . 2mg/L) +BA 0. 6mg/L+IAA 0. 3mg/L+VC 15mg/L 为继代壮
苗培养基。以上所述的基质，采用黄壤土。 以上所述的自然散射光照射育苗，为800 6000LX自然散射光，照射8 10h/d。以上所述的生根溶液，采用ABT6400 600ppm和IBA 100 300ppm的混合溶液。以上所述的培继代芽试管外育苗的方法，是将培养基用500ml的三角瓶分装，每瓶60 80ml，用棉球封口，再用牛皮纸包扎棉球和瓶口，在120°C和1. lkg. cm2条件下，用高压蒸汽灭菌锅灭菌15min备用；将生长健壮的嫩芽以每丛5 8株，每瓶接种6 8丛的方式接种于新继代培养基上，在25士5°C的温度，自然散射光照射育苗，培养25 30d，苗高2. 5 5cm，叶片4 6张，以常规瓶外扦插方法，将经促根剂处理继代芽垂直扦插于基质中，然后用塑料薄膜密封成小拱棚，棚内的温度控制在15 35°C，空气湿度90%，扦插后 15d，每隔3d揭开塑料薄膜1次，时间15 30min，往后每天揭开1次，时间60 120min，插后25 40d插穗生根率达80%时可以揭开薄膜，视阳光的强弱适当遮盖75%遮阴度的遮阴网；扦插完毕用0. 浓度的多菌灵喷淋苗木，以后每隔7 IOd喷1次0. 的多菌灵、 百菌清和托布津，交替使用；及时淋水、清除枯死叶片和植株；扦插15 20d后，每隔10 15d喷叶面肥1次，浓度0. 05 0. 1 %，苗木嫩叶长出2 3片开始追肥，每隔15 25d施复合肥1次，水肥，浓度0. 05 3%，视苗木的生长，由稀到浓。当扦插苗生长高20cm以上时，即可出圃造林。以上所述的组培苗幼态枝扦插苗育苗的方法，是按长约1000cm、宽120cm、高 30cm、排水沟宽50cm的规格建立泥土苗床或离地30 50cm高的高架沙床；选择高15 20cm的组培苗，按10 15cmX 20 25cm的株行距定植，20 30d离地15cm处截顶促萌； 苗木恢复生长，长出嫩叶2 3片时开始追肥，每隔15 30d追肥1次，复合肥，水肥浓度 0. 2 0. 5%，视苗木的生长及气候变化状况，施肥浓度由稀到浓，次数由多到少培育组培苗；穗条处理和扦插是采集生长健壮，10 15cm长，呈半木质化或木质化组培苗嫩枝，保留顶端3 4张叶片其余剪除，枝条基部用锋利刀片斜切成平滑的斜面，置于生根溶液中处理 30 50min，垂直插入基质经粉碎机粉碎后装入8 X 12cm的塑料容器内，深度芽长1/3，扦插前1天0. 3 0. 5%高锰酸钾溶液消毒12 Mh，扦插前用自来水清洗药物淋透基质；扦插苗培育是穗条扦插淋透水后用塑料薄膜密封成60cm高的小拱棚；自然散射光照射育苗，棚内温度控制在15 35°C，空气湿度80 90%，扦插后15d，每隔3d揭开塑料薄膜1次，时间30 60min，往后每天揭开1次，时间60 120min ；插后25 40d生根率达80%时可以揭开薄膜，视阳光的强弱适当遮盖75%遮阴度的遮阴网。插后每隔7 15d喷1次0. 的多菌灵、百菌清和托布津中的一种杀菌药物，并交替使用；及时淋水、清除枯死叶片和植株；扦插6 IOd后，每隔10 15d喷叶面肥1次，浓度0. 05 0. 1 %，苗木嫩叶长出2 3片开始追肥，每隔15 30d施复合肥1次，水肥，浓度0. 05 3%，视苗木的生长，施肥由稀到浓，次数有多到少；当扦插苗生长高20cm以上时，即可出圃造林。本发明优点及积极效果1、本发明的方法以山苍子果实高产优株培育出的组培继代芽为插穗，以黄壤土为基质，ABT6和IBA —定浓度配比的混合溶液为促根剂，在温度15 35°C，空气湿度90%以上，60cm高小拱棚保湿控光，的环境下形成完整植株，成苗率85 95%。组培苗生根与移栽一步完成，减少了瓶内生根程序，缩短了育苗时间，同时降低了成本，在短期内可以批量生产遗传稳定性较高的组培继代芽生根苗木应用于市场，林木生长良好，林相整齐。2、本发明第方法以定植于大田的山苍子果实高产优株无性系组培苗为采穗母株， 其萌发健壮的嫩枝为穗条，以黄壤土为基质，ABT6和IBA —定浓度配比混合溶液为生根剂， 在温度15 35°C，空气湿度80 90%，60cm高小拱棚保湿控光的环境下形成完整植株， 成苗率70% 85%。在大自然环境条件下育苗，不消耗电能，明显降低了无性系育苗成本， 同时在短期内可以批量生产遗传稳定性较高的组培继代芽生根苗应用于生长，林木生长良好，林相整齐。3、山苍子无性快繁育苗方法，能达到快速批量生产高产、优质无性系苗木目的；其中组培育苗方法占地少，育苗不受季节和地域限制，对促进山苍子野生优良资源人为开发利用，提高山苍子油单位面积的产量质量、出口创汇均具有重要意义。
具体实施例方式下面结合实施例，对本发明的山苍子组培继代芽瓶外育苗和组培苗幼态枝扦插育苗的方法进一步描述。实施例1山苍子组培继代芽试管外生根时间为4月。用山苍子果实产量彡40kg的单株芽器官为外植体，消毒获取无菌芽，将无菌芽转移到继代培养基上进行增殖和壮苗培养.继代增殖培养基由 MSC(MS+Ca(N03)2380mg/L+H3B038. aiig/L)+BA 1. 6mg/L+IAA 0. lmg/ L+VC lOmg/L,壮继代苗培养基由 MSC (MS+Ca (NO3) 2380mg/L+H3B038. 2mg/L) +BA 0. 6mg/ L+IAAO. 3mg/L+VC 15mg/L。培养基用500ml的三角瓶分装，每瓶65ml，用棉球封口，再用牛皮纸包扎棉球和瓶口，在120°C和1. lkg. cm2条件下，用高压蒸汽灭菌锅灭菌15min待用。在无菌操作间里将生长健壮的嫩芽以每丛5株，每瓶接种6丛的方式接种于新继代培养基上， 在培养室里25 士 5°C的温度，800 6000Lx自然散射光照射8 10h/d的条件培养下，培养观山芽增殖系数3. 5，苗高2. 5以上，叶片4张，可以进行试管外扦插。以山苍子组培继代芽为插穗，黄壤土为基质。继代芽在壮苗培养基中培养30d，转接新的培养基时将单芽健壮> 2. 5cm剪切下来，放入内有无菌水的瓶中保湿。黄壤土经碎土机粉碎后，装入8 X 12cm塑料容器中深30cm，放置在搭建好200cm高，配备75%遮荫网的棚内，用0. 5%浓度高锰酸钾消毒Mh，插前用自来水淋透基质。在搭建棚内修剪单芽，用锋利刀具末端节下Imm处切斜口，切面平直、光滑、清洁，枝皮不能翘起，清除基部叶及叶柄， 保留3片叶，基部插入生根促进剂ABT6400ppm+IBA 2000ppm混合溶液中处理20min，取出芽条垂直插入基质中，深度为芽长1/4，搭盖50cm高小拱棚塑料薄膜密封。插后前15d内，每隔3d揭开塑料薄膜1次，时间为15min，往后每天揭开1次，时间为80min，及时喷水，塑料棚内保持温度25°C左右，90%的空气湿度以上，及时清除枯死植株，培养25d，有80%芽苗生根形成完整植株时，可揭开塑料薄膜，视阳光的强弱适当遮盖75 %遮阴度的遮阴网。扦插完毕用0. 浓度的多菌灵喷淋苗木，以后每隔7d喷1次0. 的多菌灵、百菌清和托布津，交替使用。及时淋水、清除枯死叶片和植株；扦插15d后，每隔IOd喷叶面肥1次，浓度 0. 05%,苗木嫩叶长出3片开始追肥，每隔20d施复合肥1次，水肥，浓度0. 1 3%，视苗木的生长，由稀到浓。芽苗生长高25cm以上时，可以出圃造林。继代芽扦插成活率达95%。实施例2山苍子组培继代芽试管外生根时间为10月。用山苍子果实产量彡40kg的单株芽器官为外植体，消毒获取无菌芽，将无菌芽转移到继代培养基上进行增殖和壮苗培养。 继代增殖培养基由 MSC(MS+Ca(N03)2380mg/L+H3B038. aiig/L)+BA 1. 6mg/L+IAA 0. lmg/L+VC lOmg/L,继代壮苗培养基由 MSC (MS+Ca (NO3) 2380mg/L+H3B038. 2mg/L) +BA 0. 6mg/L+IAA 0. 3mg/L+VC 15mg/L。培养基用500ml的三角瓶分装，每瓶65ml，用棉球封口，再用牛皮纸包扎棉球和瓶口，在120°C和1. lkg. cm2条件下，用高压蒸汽灭菌锅灭菌15min待用。在无菌操作间里将生长健壮的嫩芽以每丛8株，每瓶接种7丛的方式接种于新继代培养基上，在培养室25 士 5°C的温度，800 5000Lx左右自然散射光照射8 10h/d的条件培养下，培养 30d，苗高2. 5以上，叶片4张，可以进行试管外扦插。以山苍子组培继代芽为插穗，黄壤土为基质。继代芽在壮苗培养基中培养30d，转接新的培养基时将单芽健壮> 2. 5cm剪切下来，放入内有无菌水的瓶中保湿。黄壤土经碎土机粉碎后，装入8 X 12cm塑料容器中深30cm，放置在搭建好200cm高，配备75%遮荫网的棚内，用0. 4%浓度高锰酸钾消毒22h，插前用自来水淋透基质。在搭建棚内修剪单芽，用锋利刀具末端节下Imm处切斜口，切面平直、光滑、清洁，枝皮不能翘起，清除基部叶及叶柄， 保留4片叶，基部插入生根促进剂ABT6500ppm+IBA 200ppm混合溶液中处理30min，取出芽条垂直插入基质中，深度为芽长1/4，搭盖50cm高小拱棚塑料薄膜密封。插后前15d内，每隔3d揭开塑料薄膜1次，时间为20min，往后每天揭开1次，时间为120min，及时喷水，塑料棚内保持温度20 30°C，90%的空气湿度以上，及时清除枯死植株，培养40d，有80%芽苗生根形成完整植株时，可揭开塑料薄膜，视阳光的强弱适当遮盖75%遮阴度的遮阴网。扦插完毕用0. 1 %浓度的多菌灵喷淋苗木，以后每隔IOd喷1次0. 1 %的多菌灵、百菌清和托布津，交替使用。及时淋水、清除枯死叶片和植株；扦插18d后，每隔13d喷叶面肥1次，浓度 0. 05%,苗木嫩叶长出3片开始追肥，每隔25d施复合肥1次，水肥，浓度0. 1 3%，视苗木的生长，由稀到浓。芽苗生长高25cm以上时，可以出圃造林。继代芽扦插成活率达85%。实施例3山苍子组培苗幼态枝扦插时间为11月。选择地势平坦、交通方便、供水排水状况良好的地段作圃地；确定圃地后人工或机耕土地，深30cm，起畦。按长约1000cm、宽120cm、 高30cm、排水沟宽50cm的规格建立泥土苗床或离地50cm高的高架沙床；选择高20cm的组培苗，按15CmX20Cm的株行距定植，淋透定根水，30d离地15cm处截顶促萌；苗木恢复生长，长出嫩叶3片时开始追肥，每隔20d追肥1次，复合肥，水肥浓度0. 2 0. 5%，视苗木的生长及气候变化状况，施肥浓度由稀到浓，次数由多到少，采集穗条后应及时施肥。在早上9点，采集生长健壮，13cm长，呈半木质化或木质化组培苗嫩枝，下端插入盆内清水中保湿。黄壤土，经粉碎机粉碎后装入8X 12cm的塑料容器内，摆放在大田，扦插前1天0. 5%高锰酸钾溶液消毒12h，扦插前用自来水清洗药物淋透基质。将保湿枝条取出修剪，保留顶端3张叶片其余剪除，枝条基部用锋利刀片斜切成平滑的斜面，置于含有 600ppmABT6+200ppm IBA混合溶液中处理40min，垂直插入黄壤土基质中，深度芽长1/3。穗条扦插淋透水后用塑料薄膜密封成60cm高的小拱棚；棚内温度控制在30°C左右，空气湿度85%左右，扦插后15d，每隔3d揭开塑料薄膜1次，时间40min，往后每天揭开1次，时间60min;插后36d生根率达80%时可以揭开薄膜，视阳光的强弱适当遮盖75%遮阴度的遮阴网。插后每隔IOd喷1次0.1%的杀菌药物(多菌灵、百菌清和托布津，交替使用)。及时淋水、清除枯死叶片和植株；扦插8d后，每隔15d喷叶面肥1次，浓度0. 05 %，苗木嫩叶长出3片开始追肥，每隔20d施复合肥1次，水肥，浓度0. 05 3%，视苗木的生长，施肥由稀到浓，次数有多到少。芽苗生长高25cm以上时，可以出圃造林。组培苗幼态枝扦插成活率达 75%。实施例4山苍子组培苗幼态枝扦插时间为3月。选择地势平坦、交通方便、供水排水状况良好的地段作圃地；确定圃地后人工或机耕土地，深25cm，起畦。按长约1000cm、宽120cm、高 30cm、排水沟宽50cm的规格建立泥土苗床或离地35cm高的高架沙床；选择高15cm的组培苗，按15cmX 20cm的株行距定植，淋透定根水，25d离地15cm处截顶促萌；苗木恢复生长， 长出嫩叶2片时开始追肥，每隔15d追肥1次，复合肥，水肥浓度0. 2 0. 5%，视苗木的生长及气候变化状况，施肥浓度由稀到浓，次数由多到少，采集穗条后应及时施肥。在早上9点，采集生长健壮，12cm长，呈半木质化或木质化组培苗嫩枝，下端插入盆内清水中保湿。黄壤土，经粉碎机粉碎后装入8X 12cm的塑料容器内，摆放在大田，扦插前1天0. 3%高锰酸钾溶液消毒22h，扦插前用自来水清洗药物淋透基质。将保湿枝条取出修剪，保留顶端3张叶片其余剪除，枝条基部用锋利刀片斜切成平滑的斜面，置于含有 500ppm ABT6+300ppm IBA混合溶液中处理45min，垂直插入黄壤土基质中，深度芽长1/3。 穗条扦插淋透水后用塑料薄膜密封成60cm高的小拱棚；棚内温度控制在20°C左右，空气湿度85%左右，扦插后15d，每隔3d揭开塑料薄膜1次，时间40min，往后每天揭开1次，时间 120min;插后25d生根率达80%时可以揭开薄膜，视阳光的强弱适当遮盖75%遮阴度的遮阴网。插后每隔8d喷1次0.1%的杀菌药物(多菌灵、百菌清和托布津，交替使用)。及时淋水、清除枯死叶片和植株；扦插IOd后，每隔15d喷叶面肥1次，浓度0. 05%，苗木嫩叶长出2片开始追肥，每隔25d施复合肥1次，水肥，浓度0. 05 3. 0%，视苗木的生长，施肥由稀到浓，次数有多到少。芽苗生长高25cm以上时，可以出圃造林。组培苗幼态枝扦插成活率达85%。
权利要求
1.一种山苍子无性快繁育苗方法，其特征在于以山苍子组培继代芽试管外生根，以山苍子优良无性系组培继代芽为插穗，山苍子优株组培继代芽试管外育苗或组培苗幼态枝扦插育苗，培养山苍子继代芽扦插苗或是山苍子组培苗幼态枝扦插苗，包括继代芽培养/ 建圃、基质、穗条处理和扦插、育苗和出圃操作工序，其操作步骤如下(1)继代芽培养/建圃以果实产量40kg>的单株当年生嫩枝为外植体，消毒接种获取无菌芽，将无菌芽转移到继代增殖培养基和继代壮苗培养基上进行增殖和壮苗培养；或以常规建立组培苗幼态枝扦插采穗圃；(2)基质基质经碎土机粉碎后装入8X12mm塑料容器内深30cm，扦插前1天用0. 3 0. 5%高锰酸钾溶液消毒12 Mh，扦插前自来水清洗药物及淋透基质；(3)穗条处理/扦插以继代单芽为穗条，剪取生长健壮，高>2cm的继代芽，末端节下 Imm处剪切，保留3 4张叶片，置于生根溶液中处理15 30min后，垂直插入基质中，深度芽长1/4 ；或采集生长健壮，呈半木质化或木质化的组培苗幼态枝，经过一定浓度促根剂的处理，于当年9月至次年的5月垂直插入基质内；(4)育苗搭建200cm高的遮荫棚，遮荫度75%，荫棚下建立50 60cm高密封的小拱棚，培育山苍子继代芽扦插苗或组培幼态枝扦插苗，自然散射光照射育苗；(5)出圃扦插苗生长高20cm以上时可出圃造林。
2.根据权利要求1所述的一种山苍子无性快繁育苗方法，其特征在于所述的继代培养基和壮苗培养基，采用 MSC (MS+Ca (NO3) 2380mg/L+H3B038. 2mg/L) +BA 1. 6mg/L+IAA 0. lmg/L+VC lOmg/L 为继代增殖培养基由，MSC (MS+Ca (NO3) 2380mg/L+H3B038 . 2mg/L) +BA 0. 6mg/L+IAA 0. 3mg/L+VC 15mg/L 为继代壮苗培养基。
3.根据权利要求1所述的山苍子无性快繁育苗方法，其特征在于所述的基质，采用黄壤土。
4.根据权利要求1所述的山苍子无性快繁育苗方法，其特征在于所述的自然散射光照射育苗，为800 6000Lx自然散射光，照射8 10h/d。
5.根据权利要求1所述的山苍子无性快繁育苗方法，其特征在于所述的生根溶液，采用ABT6400 600ppm和IBA 100 300ppm的混合溶液。
6.根据权利要求1所述的山苍子无性快繁育苗方法，其特征在于所述的培继代芽试管外育苗的方法，是将培养基用500ml的三角瓶分装，每瓶60 80ml，用棉球封口，再用牛皮纸包扎棉球和瓶口，在120°C和1. lkg. cm2条件下，用高压蒸汽灭菌锅灭菌15min备用； 将生长健壮的嫩芽以每丛5 8株，每瓶接种6 8丛的方式接种于新继代培养基上，在 25士5°C的温度，自然散射光照射育苗，培养25 30d，苗高2. 5 5cm，叶片4 6张，以常规瓶外扦插方法，将经促根剂处理继代芽垂直扦插于基质中，然后用塑料薄膜密封成小拱棚，棚内的温度控制在15 35°C，空气湿度90%，扦插后15d，每隔3d揭开塑料薄膜1 次，时间15 30min，往后每天揭开1次，时间60 120min，插后25 40d插穗生根率达 80%时可以揭开薄膜，视阳光的强弱适当遮盖75%遮阴度的遮阴网；扦插完毕用0. 浓度的多菌灵喷淋苗木，以后每隔7 IOd喷1次0. 1 %的多菌灵、百菌清和托布津，交替使用；及时淋水、清除枯死叶片和植株；扦插15 20d后，每隔10 15d喷叶面肥1次，浓度 0. 05 0. 1%，苗木嫩叶长出2 3片开始追肥，每隔15 25d施复合肥1次，水肥，浓度 0. 05 3%，视苗木的生长，由稀到浓，次数有多到少；当扦插苗生长高20cm以上时，即可出圃造林。
7.根据权利要求1所述的山苍子无性快繁育苗方法，其特征在于所述的组培苗幼态枝扦插苗育苗的方法，是按长约1000cm、宽120cm、高30cm、排水沟宽50cm的规格建立泥土苗床或离地30 50cm高的高架沙床；选择高15 20cm的组培苗，按10 15cmX20 25cm的株行距定植，20 30d离地15cm处截顶促萌；苗木恢复生长，长出嫩叶2 3片时开始追肥，每隔15 30d追肥1次，复合肥，水肥浓度0. 2 0. 5 %，视苗木的生长及气候变化状况，施肥浓度由稀到浓，次数由多到少培育组培苗；穗条处理和扦插是采集生长健壮， 10 15cm长，呈半木质化或木质化组培苗嫩枝，保留顶端3 4张叶片其余剪除，枝条基部用锋利刀片斜切成平滑的斜面，置于生根溶液中处理30 50min，垂直插入基质经粉碎机粉碎后装入8 X 12cm的塑料容器内，深度芽长1/3，扦插前1天0. 3 0. 5%高锰酸钾溶液消毒12 Mh，扦插前用自来水清洗药物淋透基质；扦插苗培育是穗条扦插淋透水后用塑料薄膜密封成60cm高的小拱棚；自然散射光照射育苗，棚内温度控制在15 35°C，空气湿度80 90%，扦插后15d，每隔3d揭开塑料薄膜1次，时间30 60min，往后每天揭开1 次，时间60 120min ；插后25 40d生根率达80%时可以揭开薄膜，视阳光的强弱适当遮盖75 %遮阴度的遮阴网，插后每隔7 15d喷1次0. 1 %的多菌灵、百菌清和托布津中的一种杀菌药物，并交替使用；及时淋水、清除枯死叶片和植株；扦插6 IOd后，每隔10 15d 喷叶面肥1次，浓度0. 05 0. 1 %，苗木嫩叶长出2 3片开始追肥，每隔15 30d施复合肥1次，水肥，浓度0. 05 3%，视苗木的生长，施肥由稀到浓，次数有多到少；当扦插苗生长高20cm以上时，即可出圃造林。
全文摘要
本发明公开一种山苍子无性快繁育苗方法，是以山苍子组培继代芽试管外生根，以山苍子优良无性系组培继代芽为插穗，山苍子优株组培继代芽试管外育苗或组培苗幼态枝扦插育苗的方法，采用MSC(MS+Ca(NO3)2380mg/L+H3BO38.2mg/L)+BA 1.6mg/l+IAA 0.1mg/L+VC 10mg/L为继代增殖培养基由，MSC(MS+Ca(NO3)2380mg/L+H3BO38.2mg/L)+BA 0.6mg/L+IAA 0.3mg/L+VC 15mg/L为继代壮苗培养基，黄壤土为基质，自然散射光照射的培养条件下培养山苍子继代芽扦插苗或是山苍子组培苗幼态枝为插苗，继代芽扦插成活率为85％～95％，幼态枝扦插成活80％～90％。本发明方法具有繁殖速度快、育苗量大、方法简单、操作容易，材料消耗少，其子代能够保持母株的优良遗传特性，并解决了山苍子良种无性化育苗问题。
文档编号A01H4/00GK102227976SQ20111008832
公开日2011年11月2日 申请日期2011年4月11日 优先权日2011年4月11日
发明者吴幼媚, 王以红, 蔡玲, 覃子海, 黄金使 申请人:广西壮族自治区林业科学研究院